【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种二化螟血淋巴细胞的原代培养方法,其特征在于,包括如下步骤: (1)配制细胞原代培养液和传代培养液;(2)在无菌条件下,将二化螟幼虫浸没在70%或75%乙醇溶液中,进行表面消毒10~20分钟,用无菌蒸馏水清洗二化螟幼虫2~3次,用无菌滤纸吸干虫体或用吹风机吹干虫体;(3)将虫体置于用70%或75%乙醇消毒过的解剖蜡盘中,用解剖针将头尾固定,解剖二化螟,用20μL移液器吸取血淋巴;(4)将血淋巴放入盛有1mL~2mL HBSS清洗液的T‑25cm2细胞培养瓶,静置15~20分钟,待血淋巴细胞贴壁后,吸除HBSS,加入新鲜的HBSS,重复3次;(5)最后1次去除HBSS后,加入细胞原代培养液1mL,放入无光照的细胞培养箱中27℃培养,过夜后,再加入2mL细胞传代培养液;(6)每隔7天吸出和换入50%~70%量的细胞传代培养液,直至扩展并增殖的细胞充满培养瓶。
【技术特征摘要】
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