CD24及CD24抗体的新用途制造技术

本发明专利技术公开了CD24及CD24抗体的新用途。该新用途是CD24抗体在富集胰腺前体细胞中的应用。本发明专利技术将使目的胰腺前体细胞得到相当程度的富集，这样将有利于准确筛选各种内皮或者间质来源的信号对进一步分化成熟的作用，从而对整个胰腺分化的研究起着相当重要的推动作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及⑶M及⑶M抗体的新用途。
技术介绍
人胚胎干细胞不但能够为今后的糖尿病尤其是I型糖尿病治疗提供充足的供体胰岛细胞来源，而且能够成为探索人胰腺发育过程的理想的体外研究模型。到目前为止，在诱导人胚胎干细胞向胰腺前体和胰岛素分泌细胞定向诱导分化方面已经取得了一些进展。 按照分步诱导法，人胚胎干细胞的分化过程将模拟体内胰腺的发育过程，首先诱导其分化为胚内内胚层，在此基础上进一步诱导分化为胰腺前体细胞和胰岛素分泌细胞。目前主要用一些胰腺发育相关基因的共表达如PDXl、HNFlb、S0X9以及HNF6等来标记胰腺前体细胞， 并且人胚胎干细胞能够通过体外诱导分化获得这类胰腺前体细胞，但是它们向成熟的功能性beta细胞定向分化的效率较低，并且移植到糖尿病小鼠模型体内不能有效地逆转糖尿病症状。Kroon研究组报道人胚胎干细胞来源的胰腺前体细胞移植到免疫缺陷小鼠体内3 个月后能够形成成熟的胰岛细胞，但前体细胞的致瘤性使其不能在今后向临床应用推广。 因此，相较于胰腺前体细胞，成熟的胰岛细胞是更理想的供体细胞来源，但是如何有效地诱导胰腺前体细胞产生胰岛细胞仍然是糖尿病干细胞疗法的瓶颈之一。胰腺器官发育过程包括了一系列复杂的组织间相互作用和信号传递。在胎胰的发育过程中，上皮-间充质、上皮-内皮以及内皮-间充质细胞间的相互作用同时并协同发生，并在胰腺前体的维持、胰腺外分泌部和内分泌部的特化、胰岛细胞的分化以及成熟发挥重要作用。然而，这些功能大多在低等动物如斑马鱼动物模型上发现的，对于人胰腺的发育过程，仍然缺少相关的研究报道。在胚胎干细胞的分化过程中，存在混合的不同类型细胞群；并且细胞与细胞间的相互作用使得探索诱导功能性胰岛素分泌细胞产生的分子信号的过程变得非常的复杂和困难。尽管用化学筛选的方法能够寻找到一些能够特化内胚层细胞和胰腺前体细胞的化学分子及其相关信号通路，但是基于不纯的混合体系筛选得到的信息是不完全的。纯化胰腺前体细胞能够有利于进一步深入探索调节胰岛细胞分化和成熟的关键信号通路。因此，如果能够寻找到胰腺前体细胞的表面标记基因将对于分离和深入研究胰腺前体细胞都意义重大。但鉴于研究人体发育的局限，以人胚胎干细胞来源的胰腺前体细胞为研究模型，寻找其纯化的表面标记基因是目前最佳的研究体系之一。在过去的几年中，已经陆续有胰腺前体细胞表面标记基因研究的相关报导。 Suzuki等利用c-Met，肝细胞生长因子(h印atocyte growth factor)的受体，来分选成体小鼠胰腺中具有高度增殖能力以及多向分化潜能的前体细胞。CD133已经被用来在新生和成体小鼠体内分离胚胎胰腺前体细胞，并且这类分离的细胞能够产生胰腺的外分泌、内分泌和导管细胞。在另外的报道中，在小鼠15. 5天胚胎胰腺中，⑶133阳性/⑶49f低表达标记了一群内分泌前体细胞，并且这一表达标记证明在人胎胰中也是保守的。除了这一例报道外，由于取材方面的限制，还未见其他关于人胰腺前体细胞表面标记的相关报道。由于人和啮齿类动物胰腺发育方面有很大差异，目前还不是很清楚是否目前在小鼠模型上报道的胰腺前体标记适用于人的胰腺前体细胞。因此，人胚胎干细胞的体外分化模型将为研究人胰腺发育提供一个很效的研究平台，有利于探索人胰腺前体细胞的特异性标记。到目前为止，现发表的研究中还未见有关于人胚胎干细胞来源的胰腺细胞的表面标记的相关报道。CDM 的氨基酸序列 NCBI Reference Sequence :NP_037362. I0 具体如 SEQ ID NO :1 所示。PDXl (pancreatic and duodenal homeobox 1)的氨基酸序列 NCBI Reference Sequence :NP_000200. I0 具体如 SEQ ID NO :2 所示。S0X9 的氨基酸序列 NCBI Reference Sequence :ΝΡ_000337· 1。具体如 SEQ ID NO :3 所示。HNF6 (h印atocyte nuclear factor 6)的氨基酸序列 NCBI Reference Sequence :NP_004489. I0 具体如 SEQ ID NO :4 所示。 HNFlb (hepatocyte nuclear factor 1-beta)的氨基酸序列 NCBI Reference Sequence NP_000449. 1。具体如 SEQ ID NO :5 所示。HB9(Hlxb9)的氨基酸序列 NCBI Reference Sequence :NP_005506. 30 具体如 SEQ ID NO :6 所示。F0XA2 (forkhead box A2)的氨基酸序列 NCBI Reference Sequence :NP_068556. 20 具体如 SEQ ID NO :7 所示。NKX6. 1 (NK6 homeobox 1)氨基酸序列 NCBI Reference Sequence :ΝΡ_006159· 2。具体如 SEQ ID NO :8 所示。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供CDM的抗体在富集胰腺前体细胞中的应用；或，CD24 的抗体在制备富集胰腺前体细胞的试剂盒中的应用；或，CDM在富集胰腺前体细胞中的应用；或，CDM作为靶标在富集胰腺前体细胞中的应用。上述应用中，所述胰腺前体细胞是由离体的人胚胎干细胞分化而来的。上述任一应用中，所述离体的人胚胎干细胞为细胞系Hl或细胞系H9。上述任一应用中，所述分化为体外分化。上述任一应用中，所述由离体的人胚胎干细胞分化而来的方法包括如下步骤1)将所述离体的人胚胎干细胞换用细胞培养液I，培养4天；2)将步骤1)得到的细胞直接换用细胞培养液II，培养6-8天；3)将步骤2)得到的细胞直接换用细胞培养液III，培养3-5天；所述细胞培养液I按照如下方法配制得到将DMEM/F12培养基、B27，aCtiVin A和 wortmannin混合，得到细胞培养液I,其中DMEM/F12培养基、B27，activin A和wortmannin 的配比为 Iml 5μ 1 IOOng 0. 5nmol ；所述细胞培养液II按照如下方法配制得到将IMDM培养基，F12培养基，B27，RA， FGF7和NOGGIN混合，得到细胞培养液II,其中IMDM培养基，F12培养基，B27，RA, FGF7和 NOGGIN 的配比为 0. 5ml 0.5ml 10 μ 1 2nmol 20ng IOOng ；所述细胞培养液III按照如下方法配制得到将DMEM培养基，N2和EGF混合，得到细胞培养液III，其中DMEM培养基，N2和EGF的配比为Iml 10 μ 1 50ng ；所述步骤1)中，培养的条件为温度为37°C，5%二氧化碳；所述步骤2)中，培养的条件为温度为37°C，5%二氧化碳；所述步骤3)中，培养的条件为温度为37°C，5%二氧化碳；所述步骤1)中，细胞的接种密度为50% -80%。上述任一应用中，所述胰腺前体细胞是具备如下1)和/或幻所示条件的细胞1)表达如下蛋白中的至少一种PDX1、S0X9，HNF6, HNFlb、HB9 和 F0XA2本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．ＣＤ２４的抗体在富集胰腺前体细胞中的应用；或，ＣＤ２４的抗体在制备富集胰腺前体细胞的试剂盒中的应用；或，ＣＤ２４在富集胰腺前体细胞中的应用；或，ＣＤ２４作为靶标在富集胰腺前体细胞中的应用。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：邓宏魁，蒋卫，隋鑫，张冬卉，刘猛，尹明，时艳，
申请(专利权)人：北京大学，北京瑞普晨创科技有限公司，
类型：发明
国别省市：11