抗IGF-1R的新抗体制造技术

本发明专利技术涉及包含抗体或其抗原结合片段，其特异性地结合ＩＧＦ－１Ｒ特别是ｈＩＧＦ－１Ｒ。还公开了包含本发明专利技术抗体或抗原结合片段的抗体制剂。制备此类抗体或抗原结合片段的方法以及它们的应用也包含在本发明专利技术范围内。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗IGF-1R的新抗体本专利技术涉及特异结合人胰岛素样生长因子受体(hIGF-lR)的抗体及 其抗原结合片段。本专利技术还涉及以所述抗体及其抗原结合片段、包含所 述抗体及其抗原结合片段的药物组合物治疗疾病或疾患的方法和制造 方法。
技术介绍
人胰岛素样生长因子受体(也^皮称为IGF-1R、 CD221或EC 2.7.112) 是一种与胰岛素受体具有70%同源性的酪氨酸激酶受体。该受体被两个 以高亲和力结合到该受体的配体IGF-I和IGF-II活化。该受体是二石危4建 连接的a(3 二聚体，表示为(ap)2。 a-链全部位于细胞外，而|3-链则横跨 细胞膜，并具有胞外域和胞内信号传导域。配体介导的受体活化引发胞 内事件，包括MAPK和PI3K-蛋白激酶B途径的活化。尽管已知IGF-1R 在正常的胚胎和出生后的生长发育中具有重要作用，但它在癌症生物学 中也发挥重要作用，参与许多生物途径，例如有丝分裂发生、转化和凋 亡保护(Baserga等人(1997) Endocrine, 7(1):99隱102, Baserga (2003) Int J Cancer， 107(6):873-7; Larsson等人(2005) Br J Cancer, 92(12):2097隱101; Romano (2003) Drug News Perspect, 16(8):525隱31进行了广泛的综述)。而 且，已知受体表达水平在各种胂瘤类型中上调(Khandwala等人(2000) Endocr Rev., 21(3):215-44综述)，并且配体IGF-I水平升高与发生前列腺 癌的风险升高有联系(Chan等人(1998) Science, 279(5350):563-6)。已知IGF-1R信号传导途径的拮抗剂具有体外和体内的抗肿瘤效应 (Hofmann等人(2005) Drug Discov Today, 10(15):1041-7和Zhang等人 (2004) Expert Opin Investig Drugs, 13(12):1569-77综述)。方法包括中和 抗体(参阅Kull等人(1983) J Biol Chem., 258(10):6561-6; Li等人(1993) Cancer Immunol Immunother.， 49(4-5):243-52; Xiong等人(1992) Proc Natl Acad Sci U S A., 89(12):5356画60; Burtmm等人(2003) Cancer Res., 63(24):8912画21; Cohen等人(2005) Clin Cancer Res., 11(5):2063-73; Maloney等人(2003) Cancer Res" 63(16):5073-83; Jackson-Booth等人 (2003) Horm Metab Res., 35(1 l-12):850-6)、反义(参阅Resnicoff等人(1994)Cancer Res., 54(18):4848-50 ; Lee 等人(1996) Cancer Res., 56(13):3038-41; Muller等人(1998) Int J Cancer., 77(4):567画71; Trojan等 人(1993) Science, 259(5091):94陽7; Shapiro等人(1994) J Clin Invest,S A., 91(6):2181-5)和小分子酪氨酸激酶^制剂(参阅Hopfner等人(2006) Biochem Pharmacol. 2006, 71(10):1435-48和IGF-结合蛋白(IGFBPs 一参 阅Nickerson等人(1997) Biochem Biophys Res Commun., 237(3):690画3))。 已知的单克隆抗体包括WO99/60023、 WO03/100008、 WO02/053596、 WO04簡529 、 EP0629240B 、WO03/059951 、WO03/106621 、 WO04/083248、 WO04/087756、 US2006452167A所描述的单克隆抗体。 但是，仍需要具有改进的效应子功能例如具有改进的ADCC和/或CDC 功能的抗体。抗体结构为本领域所熟知，特别是已知重链恒定区具有糖基化的糖 链，它可为N-糖苷连接的糖链例如N-乙酰葡糖胺，它可一皮岩藻糖基化或 不被岩藻糖基化。测量岩藻糖基化水平的方法为本领域熟知，例如对于一个抗体群， 可使用酸水解除去抗体糖基化糖链的单糖，它们可用染料例如2-氨基苯 甲酸(2-AA)标记。随后可进4亍反相高效液相色谱和荧光4企测，构建用于 样品定量的标准曲线。随后可计算每抗体群的岩藻糖与甘露糖的比例。附图简述附图说明图1: ELISA测定的纯化鼠单克隆抗体对人IGF-1R的结合。图2A-E: ELISA测定的纯化6E11嵌合抗体和6E11人源化抗体对 人IGF-1R的结合。在图2A中，由于抗体浓度极低，无法精确定量，因 此H0L0的结合曲线偏移到右侧。在图2D中，虽然总体走向相似，但 与其他测定相比，信号发生下降。图3:以抗人IGF-1R的纯化6E11鼠单克隆抗体对3T3/LISN c4细 胞温育24小时后，IGF-1R受体的下调。图4:以抗人IGF-1R的人源化H0L0抗体对NCI-H838细胞温育长 达24小时后，IGF-1R受体的下调。图5:以H0L0、 H0L0IgGlm(AA)或非耙向的人IgG温育NCI-H838 细胞24小时后，IGF-1R受体和胰岛素受体的下调。6图6:以HOLO在4。C和37。C下温育后，粒细胞和淋巴细胞群体的IGF-IR荧光强度水平的直方图。图7:与同种型对照相比，以H0L0在4。C和37。C下温育后，粒细胞和淋巴细胞群体的IGF-1R焚光强度水平的直方图。图8:纯化鼠单克隆单体6E11、 5G4和15D9介导的受体磷酸化的抑制。图9:显示了与6Ellc相比，H1L0介导的受体磷酸化抑制的实例。图10:显示了 HOLO、 HOLO IgGlm(AA)、 H1L0和H10L0 IgGlm(AA)介导的受体磷酸化抑制的实例。图11A:显示了各种纯化鼠单克隆抗体在竟争性ELISA中活性的实例。图11B:显示了与6Ellc相比，HILO在竟争性ELISA中活性的实例。图12A-C:竟争性ELISA显示了纯化6E11鼠单克隆抗体或6E11嵌合抗体或6E11人源化抗体抑制IGF-IR受体与第二中和抗体的结合。图13A: ELISA测定的纯化鼠单克隆抗体对重组食蟹猴IGF-IR的结合。图13B:与6E11嵌合抗体(6Ellc)相比，纯化人源化单克隆抗体对重组食蟹猴IGF-1R的结合。图14:采用纯化鼠单克隆抗体进行的胰岛素受体结合ELISA。图15:采用纯化人源化抗体进行的胰岛素受体结合ELISA。图16: FACS测定显示抗体识别Colo205胂瘤细胞系。图17: FACS测定显示抗体识别NCI-H838肺癌胂瘤细胞系。图18: FACS测定显示抗体识别MCF7肺瘤细月包系和A549肺癌细胞系。图19:采用纯化本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种特异结合ＩＧＦ－１Ｒ的抗体或其抗原结合片段，包含ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ：１的ＣＤＲ　Ｈ３或其在ＣＤＲＨ３含有１个或２个氨基酸置换的变体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：MN伯登，JH艾利斯，PA汉布林，AP路易斯，R沙，
申请(专利权)人：葛兰素集团有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[]