本文揭示针对抗原ＣＤ２０的抗体和所述抗体的用途。详细来说，揭示针对抗原ＣＤ２０的完全人类单克隆抗体。揭示编码重链和轻链免疫球蛋白分子的核苷酸序列和包含重链和轻链免疫球蛋白分子的氨基酸序列，特定地说，相应于横跨构架区和／或互补决定区（ＣＤＲ）的邻接重链和轻链序列的序列，具体地说从ＦＲ１到ＦＲ４或ＣＤＲ１到ＣＤＲ３。还揭示表达所述免疫球蛋白分子和单克隆抗体的杂交瘤细胞或其他细胞系。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及针对靶抗原CD20的单克隆抗体和所述抗体的用途。更具体地说，本发 明涉及针对CD20的完全人类单克隆抗体和这些抗体的用途。本专利技术的方面还涉及表达 所述抗体的杂交瘤细胞或其他细胞系。所述抗体可用作诊断剂并用于治疗与CD20的活 性和/或过度表达和/或CD20+细胞的存在和/或活性相关的疾病。
技术介绍
CD20为长度为298个氨基酸的33,000 MW糖磷蛋白。人类CD20基因的长度为1653 个碱基对。5'UTR的长度为147个碱基对。编码序列的长度为893个碱基对，而3'UTR 的长度为613个碱基对。CD20仅在B淋巴细胞系的正常细胞和赘生性细胞表面上以高密度表达且认为其在 B细胞活化期间起受体作用。干细胞和B细胞祖细胞显然缺乏CD20抗原。CD20的预 测氨基酸序列显示具有4个跨膜结构域的高度疏水蛋白质，其中所述蛋白质的氨基酸羧 基末端位于细胞质内。短亲水区位于残基142和185之间且可能会暴露在细胞表面上。重量为33、35和37kDa的三种人类CD20同种型由单个蛋白质的差别磷酸化产生。 CD20不与其他已知蛋白质共享任何显著同源性。在跨膜区具有最大相似性的人类序列 和小鼠序列之间存在73%的同源性。CD20与其他蛋白质，尤其C-末端src激酶-结合蛋白(Cbp)、 CD40和主要组织相 容性复合体II类蛋白质(MHCII)紧密相关。已发现结合CD20的抗体有时会诱导分子 快速移位到脂筏(lipidraft)。目前，许多公司销售靶向CD20蛋白质的治疗剂。Rituxan⑧(利妥昔单抗(Rituximab)) (Genentech, South San Francisco, CA) 、 Tositumomab (GlaxoSmithKIine， Brentford, Middlesex, United Kingdom)禾口 HuMax-CD20 (Genmab， Copenhagen, Denmark)为耙向 CD20蛋白质的单克隆抗体治疗剂。
技术实现思路
本专利技术的实施例涉及特异性结合CD20且抑制表达CD20的细胞生长的耙向结合剂。 可实现此的机制可包括且不限于诱导表达CD20的细胞的细胞凋亡、诱导表达CD20的 细胞的抗体依赖性细胞细胞毒性(ADCC)或诱导表达CD20的细胞的补体依赖性细胞 毒性(CDC),从而根除包括CD20+淋巴瘤细胞、CD20+白血病细胞和正常B细胞的CD20 阳性B细胞。在本专利技术的一个实施例中，所述靶向结合剂为结合CD20且诱导表达CD20的细胞 的细胞调亡的完全人类抗体。本专利技术的又一实施例为结合CD20且诱导表达CD20的细 胞的抗体依赖性细胞细胞毒性(ADCC)的完全人类单克隆抗体。本专利技术的另一实施例 为结合CD20且诱导表达CD20的细胞的补体依赖性细胞毒性(CDC)的完全人类单克 隆抗体。在一些实施例中，在Ramos细胞的标准CellTiterGlo生存力分析中，所述抗体结合 CD20且以约0.5 pg/ml或以下的EC5o诱导表达CD20的细胞的细胞凋亡。在一些实施例 中，所述抗体或其抗原结合部分在Ramos细胞的标准CellTiterGlo生存力分析中，诱导 B细胞的细胞凋亡的ECso至多约0.4、 0.3、 0.2、 0.1、 0.09、 0.08、 0.07、 0.06、 0.05、 0.04、 0.03或0.02 ng/ml。在一些实施例中，在Ramos细胞的标准Alamar Blue生存力分析中， 所述抗体或其抗原结合部分结合CD20且以约0.2吗/ml或以下的ECso诱导表达CD20 的细胞的细胞凋亡。在一些实施例中，所述抗体或其抗原结合部分在Ramos细胞的标准 AlamarBlue生存力分析中，ECso至多约0.1、 0.09、 0.08、 0.07、 0.06、 0.05或0.04 pg/ml。本专利技术的另一实施例为与本文所述的任何靶向结合剂或抗体竞争结合的抗体。 在一个实施例中，所述抗体以小于12纳摩尔浓度(nM)的Ko结合CD20。在另一 实施例中，所述抗体以小于10nM、 9nM、 8 nM、 7 nM、 6 nM、 5 nM、 4 nM、 3 nM、 2 nM或lnM的Ko结合。在一个实施例中，所述抗体以500、 100、 30、 20、 10或5 pM 的Kd結合。如本文所述，可通过FMAT、 FACS、 KinExA⑧和/或BIACORE⑧测量亲和力 和/或活动性测量值。在一个实施例中，所述抗体包含具有互补决定区(CDR)的重链氨基酸序列，其中所述互补决定区具有表8所示的序列中的一种。应注意到熟悉本领域的一般技术人员可容易地完成CDR测定。参见，例如Kabat等人，Sqwe""s o/Pra"/"s o//mww"o/ogz'ca//W懇"第5版，NIH Publication 91-3242, BethesdaMD (1991)，第l-3巻。 一个实施例为结合CD20且包含具有氨基酸序列GYSFTSYWIG (SEQ ID NO. 201)的重链互补决定区1 (CDR1)的靶向结合剂。又一实施例为结合CD20且包含具有CDR的轻链氨基酸序列的抗体，所述CDR包含表9所示的序列中的一种。在某些实施例中，所述抗体为完全人类单克隆抗体。因此， 一个实施例为结合CD20且包含具有氨基酸序列KISNRFS (SEQ ID NO. 202)的轻链互 补决定区2 (CDR2)的靶向结合剂。另一实施例为结合CD20且包含具有表8所示的CDR序列中的一种的重链氨基酸 序列和表9所示的CDR序列中的一种的轻链氨基酸序列的抗体。在某些实施例中，所 述抗体为完全人类单克隆抗体。在一些实施例中，本专利技术提供一种结合与本文所揭示的 任何抗体相同的抗原决定基的抗体。一个实施例提供一种单克隆抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或结合部分包含 具有SEQ ID NO.:2序列的重链多肽。在一个实施例中，所述抗体或其结合部分进一步 包含具有SEQ ID NO.:4序列的轻链多肽。另一实施例为一种单克隆抗体或其抗原结合 部分，其中所述抗体或结合部分包含具有SEQIDNO.:30序列的重链多肽。在一个实施 例中，所述抗体或其结合部分进一步包含具有SEQIDNO.:32序列的轻链多肽。另一实 施例为一种单克隆抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或结合部分包含具有SEQ ID NO.:46序列的重链多肽。在一个实施例中，所述抗体或其结合部分进一步包含具有SEQ ID NO.:48序列的轻链多肽。本专利技术的其他实施例包括特异性结合CD20的人类单克隆抗体，其中所述抗体包含 对应于典范类1的重链互补决定区1 (CDR1)。本文提供的抗体也可包括对应于典范类 2的重链互补决定区2 (CDR2)、对应于典范类4的轻链互补决定区1 (CDR1 )、对应于 典范类1的轻链互补决定区2 (CDR2)和对应于典范类1的轻链互补决定区3 (CDR3)。本专利技术的其他实施例包括结合CD20且包含来源于VH5-51种系序列的重链多肽的 人类单克隆抗体。本专利技术的一些实施例包括结合CD20且包含Vk轻链的人类单克隆抗 体。本专利技术的其他实施例包括包含vk轻链的单克隆抗体，其中所述v本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种靶向结合剂，其结合ＣＤ２０且包含具有氨基酸序列ＧＹＳＦＴＳＹＷＩＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．：２０１）的重链互补决定区１（ＣＤＲ１）。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：加迪加齐特博恩斯泰因，拉里L格林，杨晓东，克里斯托夫克瓦，戴维查尔斯布莱基，塔布里兹穆罕默德，
申请(专利权)人：阿斯利康公司，
类型：发明
国别省市：SE[瑞典]
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