【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】BRAF特异性TCR及其用途政府权益声明本专利技术是在国立卫生研究院授予的CA015704下，通过政府支持完成。政府对本专利技术享有一定的权利。关于序列表的声明与本申请相关联的序列表以文本格式提供，以代替纸质版，并在此通过引用方式并入说明书。含有序列表的文本文件名为360056_454WO序列号.txt。该文本文件为126KB，创建于2018年8月9日，并通过EFS-Web以电子方式提交。
技术介绍
肿瘤特异性T细胞的过继性转移是一种有吸引力的策略，它可以消除现存的肿瘤，并且需要在体内建立数量众多的抗原特异性T细胞，以消除现存的肿瘤并防止复发(Stromnesetal.,Immunol.Rev.257:145,2014)。近年来，越来越多的证据表明，针对癌症突变产生的抗原的免疫应答可以被T细胞识别，并且这些T细胞可以介导对过继细胞疗法和免疫检查点抑制剂治疗的临床反应。由这种突变产生的抗原，是免疫治疗的特别吸引人的目标，因为相对于正常组织，它们对癌症是完全特异的，而且还因为它们缺乏可能限制T细胞对其他抗原类型的功能的中枢耐受...
【技术保护点】
1.一种结合蛋白，包括:/n(a)T细胞受体(TCR)α链变量(Vα)结构域，该结构域具有SEQ ID NO:29-32中任一个所示的CDR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:29-32中任一个所示的以多达五个氨基酸替代、插入和/或删除的CDR3氨基酸序列，以及TCRβ链变量(Vβ)结构域；/n(b)Vα结构域，和Vβ结构域，该Vβ结构域具有SEQ ID NO:33-35中任一个所示的CDR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:33-35中任一个所示的以多达五个氨基酸替代、插入和/或删除的CDR3氨基酸序列；或/n(c)(a)的Vα结构域和(b)的Vβ结构域，/n其中，所述的...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170811 US 62/544,6951.一种结合蛋白，包括:
(a)T细胞受体(TCR)α链变量(Vα)结构域，该结构域具有SEQIDNO:29-32中任一个所示的CDR3氨基酸序列，或SEQIDNO:29-32中任一个所示的以多达五个氨基酸替代、插入和/或删除的CDR3氨基酸序列，以及TCRβ链变量(Vβ)结构域；
(b)Vα结构域，和Vβ结构域，该Vβ结构域具有SEQIDNO:33-35中任一个所示的CDR3氨基酸序列，或SEQIDNO:33-35中任一个所示的以多达五个氨基酸替代、插入和/或删除的CDR3氨基酸序列；或
(c)(a)的Vα结构域和(b)的Vβ结构域，
其中，所述的结合蛋白能够与包括含BRAFV600E突变的BRAF肽的细胞表面上的HLA复合物特异性结合，并且与包括不含BRAFV600E突变的BRAF肽的细胞表面上的HLA复合物不结合。
2.根据权利要求1所述的结合蛋白，其中:
(a)所述Vα结构域包括SEQIDNO:29的CDR3氨基酸序列，所述Vβ结构域包括SEQIDNO:33的CDR3氨基酸序列；
(b)所述Vα结构域包括SEQIDNO:30的CDR3氨基酸序列，所述Vβ结构域包括SEQIDNO:34的CDR3氨基酸序列；
(c)所述Vα结构域包括SEQIDNO:31的CDR3氨基酸序列，所述Vβ结构域包括SEQIDNO:34的CDR3氨基酸序列；
(d)所述Vα结构域包括SEQIDNO:32的CDR3氨基酸序列，所述Vβ结构域包括SEQIDNO:35的CDR3氨基酸序列；
(e)所述Vα结构域包括SEQIDNO:29的CDR3氨基酸序列，所述Vβ结构域包括SEQIDNO:34的CDR3氨基酸序列；
(f)所述Vα结构域包括SEQIDNO:29的CDR3氨基酸序列，所述Vβ结构域包括SEQIDNO:35的CDR3氨基酸序列；
(g)所述Vα结构域包括SEQIDNO:30的CDR3氨基酸序列，所述Vβ结构域包括SEQIDNO:33的CDR3氨基酸序列；
(h)所述Vα结构域包括SEQIDNO:30的CDR3氨基酸序列，所述Vβ结构域包括SEQIDNO:35的CDR3氨基酸序列；
(i)所述Vα结构域包括SEQIDNO:31的CDR3氨基酸序列，所述Vβ结构域包括SEQIDNO:33的CDR3氨基酸序列；
(j)所述Vα结构域包括SEQIDNO:31的CDR3氨基酸序列，所述Vβ结构域包括SEQIDNO:35的CDR3氨基酸序列；
(k)所述Vα结构域包括SEQIDNO:32的CDR3氨基酸序列，所述Vβ结构域包括SEQIDNO:33的CDR3氨基酸序列；或
(l)所述Vα结构域包括SEQIDNO:32的CDR3氨基酸序列，所述Vβ结构域包括SEQIDNO:34的CDR3氨基酸序列。
3.根据权利要求1或2所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白包括Vα结构域，所述Vα结构域与SEQIDNO:1-4中任一个所示的氨基酸序列具有至少90％的一致性，并且包括Vβ结构域，所述Vβ结构域与SEQIDNO:5-7中任一个所示的氨基酸序列具有至少90％的一致性，前提是(a)至少三个或四个CDR没有突变，以及(b)有突变的CDR只有多达三个氨基酸替代、插入和/或缺失。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的结合蛋白，其中Vα结构域包括或由SEQIDNO:1-4中任一个所示的氨基酸序列组成。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的结合蛋白，其中Vβ结构域包括或由SEQIDNO:5-7中任一个所示的氨基酸序列组成。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白是TCR、TCR的抗原结合片段，或嵌合抗原受体。
7.根据权利要求6所述的结合蛋白，其中所述TCR的抗原结合片段，包括单链TCR(scTCR)。
8.根据权利要求6或7所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白是嵌合抗原受体。
9.根据权利要求6-8中任一项所述的结合蛋白，其中TCR、TCR的抗原结合片段，或嵌合抗原受体是嵌合的、人类化的或人类的。
10.根据权利要求6或9所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白为TCR。
11.根据权利要求10所述的结合蛋白，其中所述TCR包括α链恒定(Cα)结构域，其具有至少90％与SEQIDNO:25的氨基酸序列的序列一致性。
12.根据权利要求11所述的结合蛋白，其中Cα结构域包括SEQIDNO:25的氨基酸序列。
13.根据权利要求10-12中任一项所述的结合蛋白，其中TCR包括β链(Cβ)恒定结构域，其与SEQIDNO:26的氨基酸序列具有至少90％的一致性。
14.根据权利要求13所述的结合蛋白，其中Cβ结构域包括SEQIDNO:26的氨基酸序列。
15.根据权利要求11-14中任一项所述的结合蛋白，其中TCRα链包括SEQIDNO:55-58中任一个所示的氨基酸序列。
16.根据权利要求11-15中任一项所述的结合蛋白，其中TCRβ链包括SEQIDNO:59-61中任一个所示的氨基酸序列。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的结合蛋白，其中所述BRAFV600E肽包括从约7至约27个氨基酸、从约10至约25个氨基酸、从约12至约20个氨基酸，或从约15至约19个氨基酸。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的结合蛋白，其中所述BRAFV600E肽包括SEQIDNO:38或39中所述的氨基酸序列。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的结合蛋白，其中所述HLA复合物包括HLA-DQ。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的结合蛋白，其中所述HLA复合物包括HLA-DQB1*0301、*0302或*0303。
21.根据权利要求20所述的结合蛋白，其中所述HLA复合物包括HLA-DQB1*0302。
22.根据权利要求19-21中任一项所述的结合蛋白，其中所述HLA复合物包括HLA-DQA1*03。
23.一种组合物，包括根据权利要求1-22中任一项所述的结合蛋白，和药物上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的组合物。
24.根据权利要求1-22中任一项所述的编码结合蛋白的分离的多核苷酸。
25.根据权利要求24所述的分离的多核苷酸，其中编码结合蛋白的多核苷酸是优化的密码子，用于在目的宿主细胞中表达。
26.一种表达载体，其包括根据权利要求24或25所述的可操作地连接到表达控制序列的多核苷酸。
27.根据权利要求26所述的表达载体，其中所述载体能够将所述多核苷酸递送至宿主细胞。
28.根据权利要求27所述的表达载体，其中所述宿主细胞是造血祖细胞或人类免疫系统细胞。
29.根据权利要求28所述的表达载体，其中所述免疫系统细胞为CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4-CD8-双阴性T细胞、γδT细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞或其任何结合。
30.根据权利要求29所述的表达载体，其中所述免疫系统细胞是CD4+T细胞。
31.根据权利要求29或30所述的表达载体，其中所述T细胞为幼稚T细胞、中央记忆T细胞、干细胞记忆T细胞、效应记忆T细胞，或其任何结合。
32.根据权利要求26-31中任一项所述的表达载体，其中所述载体是病毒载体。
33.根据权利要求32所述的表达载体，其中所述病毒载体是慢病毒载体或γ-逆转录病毒载体。
34.宿主细胞，其包括根据权利要求24或25所述的异源多核苷酸，或根据权利要求26-33中任一项所述的表达载体，其中宿主细胞在其细胞表面表达由异源多核苷酸编码的结合蛋白。
35.根据权利要求34所述的宿主细胞，其中：
(a)编码Vα结构域的异源多核苷酸的部分，至少与SEQIDNO:18-21中任一个所示的多核苷酸序列约80％是一致的；和/或
(b)编码Vβ结构域的异源多核苷酸的部分，至少与SEQIDNO:22-24中任一个所示的多核苷酸序列约80％是一致的。
36.根据权利要求34或35所述的宿主细胞，其中编码Vα结构域的异源多核苷酸的部分，包括或由SEQIDNO:18-21中任一个所示的多核苷酸序列组成。
37.根据权利要求34-36中任一项所述的宿主细胞，其中编码Vβ结构域的异源多核苷酸的部分，包括或由SEQIDNO:22-24中任一个所示的多核苷酸序列组成。
38.根据权利要求34-37中任一项所述的宿主细胞，其中编码Vα结构域的异源多核苷酸的部分连接到编码TCRα链恒定结构域的部分，其中编码α链常数结构域的部分包括或由至少约80％与SEQIDNO:27一致的多核苷酸序列组成。
39.根据权利要求34-38中任一项所述的宿主细胞，其中编码Vβ结构域的异源多核苷酸部分连接到编码TCRβ链常数结构域的部分，其中编码β链常数结构域的部分，包括或由与SEQIDNO:28的序列约80％一致的多核苷酸序列组成。
40.根据权利要求34-39中任一项所述的宿主细胞，其中，编码Vα结构域的部分，包括或由SEQIDNO:18的多核苷酸序列组成，而编码Vβ结构域的部分，包括或由SEQIDNO:22的多核苷酸序列组成。
41.根据权利要求34-39中任一项所述的宿主细胞，其中编码Vα结构域的部分包括或由SEQIDNO:19的多核苷酸序列组成，而编码Vβ结构域的部分包括或由SEQIDNO:23的多核苷酸序列组成。
42.根据权利要求34-39中任一项所述的宿主细胞，其中编码Vα结构域的部分，包括或由SEQIDNO:20的多核苷酸序列组成，而编码Vβ结构域的部分，包括或由SEQIDNO:23的多核苷酸序列组成。
43.根据权利要求34-39中任一项所述的宿主细胞，其中编码Vα结构域的部分，包括或由SEQIDNO:21的多核苷酸序列组成，而编码Vβ结构域的部分，包括或由SE...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·维奇，S·R·里德尔，S·李，
申请(专利权)人：弗雷德哈钦森癌症研究中心，华盛顿大学，
类型：发明
国别省市：美国;US
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