PCV2b ORF2蛋白在昆虫细胞中的重组表达制造技术

本发明专利技术涉及兽医疫苗的领域，尤其涉及针对PCV2和相关疾病的猪疫苗。具体地，本发明专利技术涉及以下发现：在PCV2b ORF2蛋白中需要突变，以防止其在昆虫细胞中表达后的核积累；所述突变在氨基酸位置131处引入脯氨酸。这允许在昆虫细胞中的有效表达，容易收获，且生成大量病毒样颗粒。VLP在猪的疫苗中对于减少PCV2的感染或相关疾病体征高度有效。

Recombinant expression of pcv2b ORF2 in insect cells

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】PCV2bORF2蛋白在昆虫细胞中的重组表达本专利技术涉及兽医疫苗的领域，尤其涉及针对PCV2的猪疫苗。具体地，本专利技术涉及包含表达突变型PCV2bORF2蛋白的异源核酸序列的昆虫细胞，突变型PCV2bORF2蛋白的病毒样颗粒，昆虫细胞或突变型PCV2bORF2蛋白的生产或使用方法，以及猪动物的疫苗。猪圆环病毒2(PCV2)是猪动物的病原体，其在全世界存在，并引起许多动物患病并给农业部门造成严重的经济损失。对于综述，参见Gillespie等人(2009,J.Vet.Intern.Med.,vol.23,p.1151-1163)。PCV2属于圆环病毒科(Circoviridae)，而且具有小的(17nm)二十面体无包膜病毒粒子，其含有约1.76kb的环状、单链DNA基因组。该基因组仅含有几个开放阅读框，其中ORF2编码含有主要的病毒中和表位的病毒衣壳蛋白。PCV2是相对稳定且高度感染性的。其经由不同种类的机体-分泌而脱落，并且可以在猪群中横向和纵向传播。由PCV2感染引起的主要病变是淋巴耗竭；所得的免疫抑制还使受感染动物对继发性或并发性感染易感。因此，P本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.包含异源核酸的昆虫细胞，所述异源核酸包含：/na. 编码来自基因型2b的猪圆环病毒2(PCV2b)的ORF2蛋白的核苷酸序列，和/nb. 与所述核苷酸序列可操作连接的转录控制序列，/n所述昆虫细胞的特征在于所述核苷酸序列编码突变型PCV2b ORF2蛋白，所述突变型PCV2b ORF2蛋白在氨基酸位置编号131处具有脯氨酸。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171017 EP 17196768.01.包含异源核酸的昆虫细胞，所述异源核酸包含：
a.编码来自基因型2b的猪圆环病毒2(PCV2b)的ORF2蛋白的核苷酸序列，和
b.与所述核苷酸序列可操作连接的转录控制序列，
所述昆虫细胞的特征在于所述核苷酸序列编码突变型PCV2bORF2蛋白，所述突变型PCV2bORF2蛋白在氨基酸位置编号131处具有脯氨酸。


2.根据权利要求1所述的昆虫细胞，其特征在于所述转录控制序列是杆状病毒p10基因启动子或杆状病毒多角体蛋白基因启动子。


3.根据权利要求1或2所述的昆虫细胞，其特征在于所述异源核酸包含在重组杆状病毒基因组中。


4.突变型PCV2bORF2蛋白的病毒样颗粒(VLP)，其特征在于所述突变型PCV2bORF2蛋白在氨基酸位置编号131处具有脯氨酸。


5.用于在根据权利要求1-3中任一项所述的昆虫细胞中表达突变型PCV2bORF2蛋白的方法，所述方法采用杆状病毒-昆虫细胞表达系统。


6.用于产生在氨基酸位置编号131处具有脯氨酸的突变型PCV2bORF2蛋白的方法，所述产生包括一个或两个选自以下的步骤：
-培养根据权利要求1-3中任一项所述的昆虫细胞；和
-从昆虫细胞培养物收获所述突变型PCV2bORF2蛋白。


7.用于减少...

【专利技术属性】
技术研发人员：PJA松德梅杰，L桑德尔斯，KHA范德尔海登列夫肯斯，
申请(专利权)人：英特维特国际股份有限公司，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL