本发明专利技术涉及一种铜绿假单胞菌噬菌体K8假定蛋白GP075，其核苷酸序列为SEQ No.1，其氨基酸序列为SEQ No.10。本假定蛋白GP075发生突变，突变后的蛋白具有结构蛋白的功能，该类噬菌体突变株在原识别脂多糖的基础上，增加了额外的受体识别蛋白，可识别脂多糖O‑抗原缺陷型宿主细胞或者只含有核心寡糖结构(core oligosaccharides)的宿主细胞，同时具有更宽的宿主范围、更强的裂解及吸附宿主细胞的能力，有望应用于噬菌体制剂，防治铜绿假单胞菌引起的各种感染。
A putative protein gp075 of Pseudomonas aeruginosa phage K8 and its mutant, mutant protein and Application
【技术实现步骤摘要】
一种铜绿假单胞菌噬菌体K8假定蛋白GP075及其突变株、突变蛋白和应用
本专利技术属于生物工程
，尤其是一种铜绿假单胞菌噬菌体K8假定蛋白GP075及其突变株、突变蛋白和应用。
技术介绍
铜绿假单胞菌是一种条件致病菌，容易感染免疫功能低下、身体虚弱以及囊性纤维病人，导致囊性纤维病人较高的发病率和死亡率。噬菌体作为细菌的天然克星，可特异性杀死细菌，研究噬菌体与宿主之间相互作用，有助于开发噬菌体制剂，用于治疗细菌感染。近几年对铜绿假单胞菌及其噬菌体的研究与日俱增，铜绿假单胞菌的各类噬菌体感染机制越来越清晰，大多数分离的铜绿假单胞菌噬菌体识别受体为脂多糖O-抗原，研究最多是LPS合成相关的基因，主要有wbpL、wbpR、wbpO、algC、wbpV、galU、wbpT、wzy、wapH、migA、ssg和wbpS等。与此同时，大多数噬菌体利用尾部识别细胞受体，在合适的条件下，尾部和受体的相互作用诱导尾部发生结构性重排，最终传导到头-尾连接处，引发其打开，最终使噬菌体DNA释放，完成噬菌体感染过程。在现有的研究基础上铜绿假单胞菌噬菌体受体结合蛋白为尾丝蛋白，对于未知功能的假定蛋白作为受体结合蛋白的研究却很少。近年来，随着抗菌素的滥用，抗菌素耐受型细菌的数量不断增加，耐受型细菌引起的各类感染疾病问题亟需解决。例如，铜绿假单胞菌是引起院内感染重要的条件致病菌，众所周知，噬菌体能对宿主菌进行感染，而且具有较强的宿主特异性，不影响其它非宿主的正常细胞，所以，研究噬菌体疗法，作为抗菌素的替代品，显得尤为重要。目前研究最多的鸡尾酒疗法，即混合噬菌体疗法(指将多种噬菌体混合使用，达到杀灭多种细菌的一种治疗方法)，早在2014年，欧盟启动Phagoburn计划，针对临床上常见的铜绿假单胞菌、埃希氏菌、变形杆菌、克雷白氏杆菌、葡萄球菌引起的各种感染，“鸡尾酒疗法”起到了良好的效果，并对鸡尾酒疗法的安全性进行了评价。另一方面，在应用噬菌体制剂治疗细菌感染的同时，亦可考虑噬菌体制剂与抗生素联合用药达到治疗效果。在噬菌体体内和体外的杀菌实验中，针对不同的宿主菌，同一噬菌体杀菌效率不同，这和噬菌体感染宿主菌的过程受到宿主菌基因表达水平的影响有关，噬菌体裂解宿主依赖于宿主菌的机制，从而增加了噬菌体裂解宿主菌的复杂程度。了解更多与噬菌体感染相关的宿主基因，这将有利于噬菌体的治疗效率，并且在未来提供多种临床感染的治疗方案。通过检索，尚未发现与本专利技术专利申请相关的专利公开文献。
技术实现思路
本专利技术目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种铜绿假单胞菌噬菌体K8假定蛋白GP075及其突变株、突变蛋白和应用，该假定蛋白GP075发生突变，突变后的蛋白具有结构蛋白的功能，该类噬菌体突变株在原识别脂多糖的基础上，增加了额外的受体识别蛋白，可识别脂多糖O-抗原缺陷型宿主细胞或者只含有核心寡糖结构(coreoligosaccharides)的宿主细胞，同时具有更宽的宿主范围、更强的裂解及吸附宿主细胞的能力，有望应用于噬菌体制剂，防治铜绿假单胞菌引起的各种感染。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种铜绿假单胞菌噬菌体K8假定蛋白GP075，其核苷酸序列为SEQNo.1，其氨基酸序列为SEQNo.10。一株铜绿假单胞菌噬菌体K8突变株K8-D7，所述突变株K8-D7能够感染脂多糖O-抗原缺陷型宿主细胞，其序列是在如上所述的假定蛋白GP075的氨基酸105、106之间插入1个与106至112完全重复的氨基酸序列；所述突变株K8-D7的核苷酸序列为SEQNo.2，其氨基酸序列为SEQNo.11。一种含有如上所述的假定蛋白GP075的突变蛋白GP075-14，其序列是在所述GP075氨基酸105、106之间插入2个与106至112完全重复的氨基酸序列，所述突变蛋白GP075-14的核苷酸序列为SEQNo.3，其氨基酸序列为SEQNo.12。一种含有如权利要求1所述的假定蛋白GP075的突变蛋白GP075-21，其序列是GP075氨基酸105、106之间插入3个与106至102完全重复的氨基酸序列，所述突变蛋白GP075-21的核苷酸序列为SEQNo.4，其氨基酸序列为SEQNo.13。一株铜绿假单胞菌噬菌体K8突变株K8-E126K，所述突变株K8-E126K能够感染脂多糖O-抗原缺陷型宿主细胞，其序列是在如上所述的假定蛋白GP075发生突变E126K，所述突变株K8-E126K的核苷酸序列为SEQNo.5，其氨基酸序列为SEQNo.14。一株铜绿假单胞菌噬菌体K8突变株K8-S142L，所述突变株K8-S142L能够感染脂多糖O-抗原缺陷型宿主细胞，其序列是在如上所述的假定蛋白GP075发生突变S142L，所述突变株K8-S142L的核苷酸序列为SEQNo.6，其氨基酸序列为SEQNo.15。一株铜绿假单胞菌噬菌体K8突变株K8-L189R，所述突变株K8-L189R能够感染脂多糖O-抗原缺陷型宿主细胞，其序列是在如上所述的假定蛋白GP075发生突变L189R，所述突变株K8-L189R的核苷酸序列为SEQNo.7，其氨基酸序列如为SEQNo.16。一株铜绿假单胞菌噬菌体K8突变株K8-P197L，所述突变株K8-P197L能够感染脂多糖O-抗原缺陷型宿主细胞，其序列是在如上所述的假定蛋白GP075发生突变P197L，所述突变株K8-P197L的核苷酸序列为SEQNo.8，其氨基酸序列为SEQNo.17。一株铜绿假单胞菌噬菌体K8突变株K8-T239A，所述突变株K8-T239A能够感染脂多糖O-抗原缺陷型宿主细胞，其序列是在如上所述的假定蛋白GP075发生突变T239A，所述突变株K8-T239A的核苷酸序列为SEQNo.9，其氨基酸序列为SEQNo.18。一株铜绿假单胞菌噬菌体K8突变株K8-X，所述突变株K8-X能够感染脂多糖O-抗原缺陷型宿主细胞，GP075未发生突变。如上所述的铜绿假单胞菌噬菌体K8突变株K8-X在铜绿假单胞菌O-抗原缺陷型菌株的生长抑制方面中、或在铜绿假单胞菌自发突变的抑制方面中的应用。本专利技术取得的优点和积极效果为：1、本专利技术研究过程中发现，噬菌体K8突变群体中包含多种GP075突变型噬菌体，分离得到的噬菌体K8突变株主要包括K8-D7,K8-E126K,K8-S142L,K8-L189R,K8-P197L,K8-T239A，另外在研究GP075突变多样性过程中，还发现了比例较高的两种突变蛋白GP075-14，GP075-21。以上噬菌体中假定蛋白GP075发生突变，突变后的蛋白具有结构蛋白的功能，该类噬菌体突变株在原识别脂多糖的基础上，增加了额外的受体识别蛋白，可识别脂多糖O-抗原缺陷型宿主细胞或者只含有核心寡糖结构(coreoligosaccharides)的宿主细胞，同时具有更宽的宿主范围、更强的裂解及吸附宿主细胞的能力，有望应用于噬菌体制剂，防治铜绿假单胞菌引起的各种感染。2、本专利技术中分离得到的K本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种铜绿假单胞菌噬菌体K8假定蛋白GP075，其特征在于：其核苷酸序列为SEQNo.1，其氨基酸序列为SEQ No.10。/n
【技术特征摘要】
1.一种铜绿假单胞菌噬菌体K8假定蛋白GP075，其特征在于：其核苷酸序列为SEQNo.1，其氨基酸序列为SEQNo.10。
2.一株铜绿假单胞菌噬菌体K8突变株K8-D7，其特征在于：所述突变株K8-D7能够感染脂多糖O-抗原缺陷型宿主细胞，其序列是在如权利要求1所述的假定蛋白GP075的氨基酸105、106之间插入1个与106至112完全重复的氨基酸序列；所述突变株K8-D7的核苷酸序列为SEQNo.2，其氨基酸序列为SEQNo.11。
3.一种含有如权利要求1所述的假定蛋白GP075的突变蛋白GP075-14，其特征在于：其序列是在所述GP075氨基酸105、106之间插入2个与106至112完全重复的氨基酸序列，所述突变蛋白GP075-14的核苷酸序列为SEQNo.3，其氨基酸序列为SEQNo.12。
4.一种含有如权利要求1所述的假定蛋白GP075的突变蛋白GP075-21，其特征在于：其序列是GP075氨基酸105、106之间插入3个与106至102完全重复的氨基酸序列，所述突变蛋白GP075-21的核苷酸序列为SEQNo.4，其氨基酸序列为SEQNo.13。
5.一株铜绿假单胞菌噬菌体K8突变株K8-E126K，其特征在于：所述突变株K8-E126K能够感染脂多糖O-抗原缺陷型宿主细胞，其序列是在如权利要求1所述的假定蛋白GP075发生突变E126K，所述突变株K8-E126K的核苷酸序列为SEQNo.5，其氨基酸序列为SEQNo.14。
6.一株铜绿假单胞...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨洪江，孙利，张志强，李东航，尤甲甲，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：天津;12
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