【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物技术生产领域，尤其是一种生产l-色氨酸的基因工程菌及其构建方法与应用。
技术介绍
1、色氨酸（l-tryptophan，l-trp），化学名称为α-氨基-β-吲哚丙酸，是一种用途广泛的芳香族氨基酸，不仅参与蛋白质合成，还在人体的免疫调节中起至关重要的作用，是血清素、褪黑素的合成前体。近年来，随着人们对l-色氨酸生物活性认识不断深入以及其在应用领域不断扩大，全球市场对l-色氨酸的需求急剧增加，l-色氨酸供不应求，因此，提高l-色氨酸工业化产能极具现实意义。
2、l-色氨酸的生产方式主要是微生物发酵法，微生物发酵法是以葡萄糖等廉价原料作为碳源，采用微生物发酵的方式来实现的。在早期研究过程中，研究者培育l-色氨酸生产菌株时仅仅依据传统化学或者物理的诱变方式，该方式获得的生产菌株稳定性较差，产酸性能不高。而通过基因工程手段进行定向改造，则有望弥补诱变育种方式的不足。
3、大肠杆菌具有遗传背景清晰，基因编辑技术成熟，生长迅速，营养需求低的优点，是微生物发酵行业优良的出发菌株。目前大肠杆菌工程菌生产l-色氨...
【技术保护点】
1.一种生产L-色氨酸的基因工程菌，其特征在于：缺失了tnaA、tyrR、trpR基因，上调了trpEfbr、aroGfbr、serAfbr、talB、aroB、aroD、aroE、aroK、aroA、aroC、yddG基因的转录水平，强化色氨酸操纵子TrpEfbrDCBA中各基因簇TrpEfbrD、TrpDC、TrpBA的表达，异源引入了短双歧杆菌来源的磷酸酮醇酶基因bbxfpk、枯草芽孢杆菌来源的glnAfbr基因。
2.根据权利要求1所述的生产L-色氨酸的基因工程菌，其特征在于：以E.coli W3110作为出发菌株，敲除了 tnaA、tyrR、tr...
【技术特征摘要】
1.一种生产l-色氨酸的基因工程菌，其特征在于：缺失了tnaa、tyrr、trpr基因，上调了trpefbr、arogfbr、serafbr、talb、arob、arod、aroe、arok、aroa、aroc、yddg基因的转录水平，强化色氨酸操纵子trpefbrdcba中各基因簇trpefbrd、trpdc、trpba的表达，异源引入了短双歧杆菌来源的磷酸酮醇酶基因bbxfpk、枯草芽孢杆菌来源的glnafbr基因。
2.根据权利要求1所述的生产l-色氨酸的基因工程菌，其特征在于：以e.coli w3110作为出发菌株，敲除了 tnaa、tyrr、trpr基因；利用trc启动子强化了trpefbr基因转录，并整合到了trple基因位点；利用trc启动子强化了arogfbr基因转录，并整合到了yjiv假基因位点；利用trc启动子强化了talb基因转录，并在基因组以双拷贝形式分别整合到了ilvg和yeel假基因位点；利用trc启动子强化了短双歧杆菌来源的磷酸酮醇酶基因bbxfpk转录，并整合到了yghe假基因位点；利用trc启动子强化了arob，arod，aroe基因转录，并整合到了yjgx假基因位点，形成一个微型操纵子；利用trc启动子强化了arok，aroa，aroc基因转录，并整合到了ylbe假基因位点，形成一个微型操纵子；将改造后的色氨酸操纵子trpefbrdcba拆分成trpefbrd，trpdc，trpba三个微型操纵子，利用bba_j23101启动子分别整合至yjiv，yjit，yjip假基因位点；利用trc启动子强化了serafbr基因转录，并整合到了ycdn假基因位点；利用trc启动子强化了枯草芽孢杆菌来源的glnafbr基因转录，并整合到了mbha假基因位点；利用trc启动子强化了yddg基因转录，并在基因组以双拷贝形式分别整合到了rph和yjik假基因位点。
3.根据权利要求2所述的生产l-色氨酸的基因工程菌，其特征在于：所述出发菌株为e.coli w3110 atcc 27325。
4.根据权利要求1或2所述的生产l-色氨酸的基因工程菌，其特征在于：所述trc启动子的核苷酸序列如序列表seq id no.1所示；bba_j23101启动子的核苷酸序列如序列表seqid no.2所示；tnaa基因的核苷酸序列如序列表seq id no.5所示； tyrr基因的核苷酸序列如序列表seq id no.6所示；trpr基因的核苷酸序列如序列表seq id no.7所示；trpefbr的核苷酸序...
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