具有针对屎肠球菌的溶菌能力的新型抗细菌蛋白EFAL-2制造技术

本发明专利技术涉及一种来源于噬菌体Ent‑FAP‑4(登录号：KCTC 12854BP)的抗细菌蛋白EFAL‑2，所述抗细菌蛋白EFAL‑2具有杀死屎肠球菌的能力和以SEQ ID NO:2表示的氨基酸序列，一种含有所述抗细菌蛋白EFAL‑2作为活性成分的药物组合物，以及一种使用所述药物组合物来预防或治疗屎肠球菌导致的疾病的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有针对屎肠球菌的溶菌能力的新型抗细菌蛋白EFAL-2
本专利技术涉及一种具有针对屎肠球菌(Enterococcusfaecium)的溶菌能力的抗细菌蛋白，以及一种使用含有所述抗细菌蛋白作为活性成分的组合物来预防或治疗屎肠球菌感染的方法。具体而言，本专利技术涉及一种抗细菌蛋白EFAL-2，所述抗细菌蛋白EFAL-2具有杀死屎肠球菌的能力和以SEQIDNO:2表示的氨基酸序列，并且所述抗细菌蛋白EFAL-2使用噬菌体Ent-FAP-4(登录号：KCTC12854BP)的遗传信息来开发，一种含有所述抗细菌蛋白EFAL-2作为活性成分的药物组合物，以及一种使用所述药物组合物来预防或治疗屎肠球菌感染的方法。
技术介绍
肠球菌(Enterococcus)是驻留在胃肠道和泌尿生殖系统中的兼性厌氧革兰氏阳性菌。正如所报道，肠球菌属有大约19个种，包括粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)、屎肠球菌(Enterococcusfaecium)、耐久肠球菌(Enterococcusdurans)和铅黄肠球菌(Enterococcuscasseliflavus)，在这些种中粪肠球菌和屎肠球菌可以作为导致实际感染的主要菌种。过去，粪肠球菌导致的感染是非常常见的。然而，最近，相对而言屎肠球菌导致的感染有所增加。肠球菌的毒性相对较弱，因此不会在正常人中导致疾病。然而，肠球菌会在老年人、免疫缺陷患者、慢性潜在疾病患者或住院患者中导致各种机会性感染，诸如泌尿道感染、伤口感染、菌血症和心内膜炎。此外，肠球菌可以通过基因杂交从外部获得致病因子，从而导致感染性疾病。泌尿道感染是肠球菌导致的最常见的感染，其次是伤口感染。心内膜炎可以作为肠球菌导致的其他主要感染，并且5％至20％的细菌性心内膜炎是肠球菌导致的。同时，抗生素(诸如氨基糖苷、头孢菌素、克林霉素和半合成青霉素制备物)通常被用于肠球菌治疗。然而，对这些抗生素的耐药性细菌的观察经常有所报道。已知肠球菌通过获得新DNA(质粒、转座子)或使用突变来获得对抗生素的耐药性。具体而言，当已经获得对氨基糖苷的耐药性的肠球菌导致心内膜炎或严重感染时，因为不能杀死肠球菌，治疗难以成功。据报道，就万古霉素耐药性肠球菌(VRE)导致的菌血症而言，死亡率达到67％。在1986年，首次在法国报道了VRE对万古霉素具有耐药性。在韩国，在1992年首次分离VRE。在美国，从1988年首次分离VRE以来，来自NNIS(美国国家院内感染监控(NationalNosocomialInfectionSurveillance))的数据显示，在1990年和1997年期间1％至15％的分离的肠球菌是VRE，并且VRE的比率从1999年的25％增加至2003年的28.5％。近年来，VRE的出现在欧洲、美国、亚洲(包括韩国)和大洋洲的全球范围内有所增加。因此，迫切需要开发可以用于预防或治疗抗生素耐药性肠球菌感染的药物。最近，使用噬菌体作为针对细菌感染性疾病的对策已引起相当大的关注。具体而言，噬菌体的使用由于具有针对抗生素耐药性细菌的极好抗细菌活性而受到更大的关注。噬菌体是感染细菌的非常小的微生物，通常简单地称为“噬体(phage)”。一旦噬菌体感染细菌，该噬菌体即可在细菌细胞内部增殖。在增殖之后，噬菌体的子代会破坏细菌细胞壁，并从作为宿主的细菌中逃出，这表明噬菌体具有杀死细菌的能力。噬菌体感染细菌的方式通过其非常高的特异性来表征，以致于感染特定细菌的噬菌体的类型数量是有限的。也就是说，某些噬菌体可以仅感染特定细菌，这表明某些噬菌体可以赋予仅针对特定细菌的抗细菌作用。为了克服这种抗细菌活性范围相对较窄的困难，已提出了使用在噬菌体表现出针对细菌的抗细菌作用时实际发挥作用的抗细菌蛋白的方法。噬菌体来源的抗细菌蛋白称为细胞溶素或内溶素。通常，噬菌体来源的抗细菌蛋白可以提供与作为其宿主噬菌体相比更宽的抗细菌活性范围。与常规抗生素相比，噬菌体或噬菌体来源的抗细菌蛋白对细菌菌种具有高特异性。也就是说，它们不会影响除目标细菌菌种之外的细菌菌种。噬菌体和噬菌体来源的抗细菌蛋白的细菌特异性提供了仅针对目标细菌的抗细菌作用(溶菌能力)，不影响环境中或动物中的共生细菌。通常，已经广泛用于细菌治疗的常规抗生素会同时影响若干细菌类型。这会导致诸如环境污染和动物的正常菌群紊乱的问题。相比之下，噬菌体或噬菌体来源的抗细菌蛋白仅针对特定细菌发挥作用，以致于噬菌体或噬菌体来源的抗细菌蛋白的使用不会导致身体中正常菌群的紊乱。所以，与抗生素的使用相比，噬菌体或噬菌体来源的抗细菌蛋白的使用是非常安全的，并且使用导致的副作用的可能性相对而言非常低。
技术实现思路
技术问题因此，本专利技术人使用本专利技术人分离的噬菌体的遗传信息提供了可以杀死肠球菌中的屎肠球菌(它们是有害的病原菌)的抗细菌蛋白。此外，本专利技术人提供了一种药物组合物，所述药物组合物含有所开发的抗细菌蛋白作为活性成分，并且被用于预防或治疗屎肠球菌感染，以及一种使用所述药物组合物来有效地用于预防或治疗屎肠球菌感染的方法。因此，本专利技术的一个目的是提供一种抗细菌蛋白EFAL-2，所述抗细菌蛋白EFAL-2具有杀死屎肠球菌的能力和以SEQIDNO:2表示的氨基酸序列，并且所述抗细菌蛋白EFAL-2使用噬菌体Ent-FAP-4(登录号：KCTC12854BP)的遗传信息来开发。因此，本专利技术的另一个目的是提供一种有效地制造来源于噬菌体Ent-FAP-4(登录号：KCTC12854BP)的抗细菌蛋白EFAL-2的方法，所述抗细菌蛋白EFAL-2具有杀死屎肠球菌的能力和以SEQIDNO:2表示的氨基酸序列。本专利技术的另一个目的是提供一种用于预防或治疗屎肠球菌感染的药物组合物，所述药物组合物含有来源于噬菌体Ent-FAP-4的抗细菌蛋白EFAL-2作为活性成分。本专利技术的另一个目的是提供一种使用药物组合物来预防屎肠球菌感染的方法，所述药物组合物含有来源于噬菌体Ent-FAP-4的抗细菌蛋白EFAL-2作为活性成分。本专利技术的另一个目的是提供一种使用药物组合物来治疗屎肠球菌感染的方法，所述药物组合物含有来源于噬菌体Ent-FAP-4的抗细菌蛋白EFAL-2作为活性成分。技术方案为了实现上述目的，本专利技术的专利技术人致力于使用由本专利技术人从自然界分离的长尾病毒科噬菌体Ent-FAP-4(登录号：KCTC12854BP)的遗传信息来开发抗细菌蛋白EFAL-2，所述抗细菌蛋白EFAL-2具有以SEQIDNO:2表示的氨基酸序列和针对屎肠球菌的极好的溶菌能力，所述长尾病毒科噬菌体Ent-FAP-4具有杀死屎肠球菌的能力。本专利技术人还开发了一种有效地制造所述抗细菌蛋白EFAL-2的方法，并且最终开发了一种药物组合物，所述药物组合物含有所述抗细菌蛋白EFAL-2作为活性成分，并且用于预防或治疗屎肠球菌感染的目的，从而完成本专利技术。因此，根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供具有针对屎肠球菌的溶菌能力的抗细菌蛋白EFAL-2的氨基酸序列。具体而言，所述抗细菌蛋白EFAL-2具有以SEQIDN本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗细菌蛋白EFAL-2，所述抗细菌蛋白EFAL-2具有针对屎肠球菌的溶菌能力和以SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170222 KR 10-2017-00233201.一种抗细菌蛋白EFAL-2，所述抗细菌蛋白EFAL-2具有针对屎肠球菌的溶菌能力和以SEQIDNO:1表示的氨基酸序列。


2.如权利要求1所述的抗细菌蛋白EFAL-2，其中所述抗细菌蛋白EFAL-2来源于噬菌体Ent-FAP-4(登录号：KCTC12854BP)。


3.一种基因，所述基因用于编码如权利要求1所述的抗细菌蛋白EFAL-2。


4.如权利要求3所述的基因，其中所述基因具有以SEQIDNO:1表示的核苷酸序列。


5.一种大肠杆菌转化株TOP10-pBAD-EFAL-2(登录号：KCTC13177BP)，所述大肠杆菌转化株TOP10-pBAD-EFAL-2用于产生如权利要求1或权利要求2所述的抗细菌蛋白E...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹圣君，康明松，俊苏云，金钟铉，郑奇慕，孙杰苏，白邢岩，康桑贤，
申请(专利权)人：尹特荣生物科技株式会社，
类型：发明
国别省市：韩国;KR