本发明专利技术涉及医药技术领域，具体是抗原肽RACGAP1‑1和RACGAP1‑2在制备预防和/或治疗肝癌药物中的应用，所述的抗原肽RACGAP1‑1和RACGAP1‑2的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。本发明专利技术提供的可用于肝癌治疗的两条抗原肽RACGAP1‑1和RACGAP1‑2，可以负载树突状细胞诱导并获取大量具有特异性识别肝癌细胞的CTL，并可在体内显著杀伤肝癌实体瘤，可用于制备预防或治疗肝癌的药物。
Antigen peptide RACGAP1 1 and RACGAP1 2 in preparation for the application of drugs in hepatocellular carcinoma
The present invention relates to the technical field of medicine, in particular antigen peptide RACGAP1 1 and RACGAP1 2 in preparation for preventing and / or treatment of liver cancer, 2 amino acid sequence of the peptide RACGAP1 1 and RACGAP1 respectively such as SEQ ID and SEQ NO.7 ID shown in NO.8. The present invention may be used in two liver cancer antigen peptide RACGAP1 1 and RACGAP1 2, can be induced by dendritic cells loaded with specific recognition and access to a large number of liver cancer cells CTL, and significant tumor killing in vivo, and can be used for preparing drugs for preventing or treating liver cancer.
【技术实现步骤摘要】
抗原肽RACGAP1-1和RACGAP1-2在制备治疗肝癌药物中的应用
本专利技术涉及医药
，具体地说，是抗原肽RACGAP1-1和RACGAP1-2在制备治疗肝癌药物中的应用。
技术介绍
肝细胞肝癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)是一种起源于肝细胞的恶性肿瘤，是人类主要的恶性肿瘤之一，据世界卫生组织(WHO)报告，全世界每年有约100万人死于肝癌。肝癌死亡率很高，我国肝癌发病率居世界之首,肝癌是我国第2位癌症杀手，是全球第3位癌症死因。器官移植是治疗肝癌晚期唯一有效的手段，但仍存在供肝数量逐年减少以及急性、慢性排斥反应所导致的移植物存活时间短等诸多问题，放疗、化疗虽然一定程度上抑制肿瘤的生长和转移，但对正常肝细胞造成的损伤以及复发率高的问题仍未得到有效解决。近年来针对实体瘤的免疫治疗逐渐成为肿瘤学研究的热点。生物体对肿瘤细胞识别杀伤过程中，细胞免疫、特别是细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxiclymphocyte,CTL)发挥着核心作用。在此过程中，肿瘤细胞被抗原递呈细胞(antigen-presentingcell，APC)吞噬后，其癌细胞特有的蛋白可以被蛋白酶水解形成肽段，并在内质网中与主要组织相容性复合体(majorhistocompatibilitycomplex，MHC)I类分子结合，形成复合物，后被运送到细胞表面进行抗原递呈，诱导特异性CTL增殖。CTL可以识别肿瘤细胞上的抗原肽与MHC的复合物，对肿瘤细胞进行杀伤。根据这一原理，可以通过选取肿瘤内特异性蛋白设计抗原肽，来诱导肿瘤特异性CTL。随着大数据时代的到来，循证医学逐渐取代经验医学成为科学诊断和治疗的切入点，以大数据为背景，进行科研研究逐渐成为主流。Oncomine、TCGA等含有大量肿瘤临床样本数据的数据库得到国内外学者的广泛关注，并越来越多的运用到肿瘤的研究中来，2013-2016年多篇研究工作发表在Nature、Science等顶级杂志。但是目前，利用大数据进行肝癌研究的多关注于肝癌发生发展过程中分子机制，而较少关注肿瘤抗原肽的开发。
技术实现思路
本专利技术根据现有肝癌公开数据，设计了一套利用差异分析挖掘肝癌高表达分子、后用ENCODE数据库数据剔除可能引起自身免疫反应抗原的筛选方案。鉴于I型HLA中，位于HLA-A基因座0201型等位基因在人群中分布极为广泛，其表达产物HLA-A*0201在肿瘤的抗原递呈过程中起着非常重要的作用，且与HLA-A*0201发生结合的CTL表位长度被限制在9±1个氨基酸残基。因此，本专利技术利用网络软件在线计算出潜在的抗原九肽，鉴定出在以HLA-A*0201阳性肝癌细胞癌患者为对象的免疫疗法中有效的、与HLA-A*0201结合并递呈在人CTL上的肽段。在裸鼠移植瘤模型中回输负载后的肿瘤抗原肽后的树突状细胞(dendriticcell，DC)与T细胞，证明使用该肽有效。本专利技术提供一种鉴定发现肝癌抗原肽的方法，具体是指通过公开的肝癌测序或芯片数据分析，筛选出肝癌高表达的基因，并通过ENCODE数据库过滤表达于成年人其他组织中的分子，进而设计与HLA-A*0201发生结合的抗原九肽，负载DC诱导CTL后，通过体外杀伤实验与裸鼠移植瘤模型筛选获得有效的抗原肽。本专利技术的主要技术方案如下：本专利技术人通过调阅GEO数据库中一例含有220例肝癌癌旁组织与224例肝癌组织芯片结果的Dataset，分析鉴定出了人肝癌细胞中特异性过表达的分析，并取top20作为候选分子。又通过ENCODE数据库，剔除20个中表达于成年个体其他组织的分子，剩余SPINK1、GPC3、AKR1B10、RACGAP1、CCL20、PEG10、MDK和ENAH作为肿瘤抗原。通过在线软件设计候选分子的抗原九肽，合成后体外负载DC，并加入T细胞共培养诱导特异性识别抗原肽的CTL，同时在体外杀伤实验和PDTX模型中验证其抗瘤能力，由此鉴定出可以作为应用于免疫治疗的候选肝癌抗原肽。即，本专利技术提供以下内容：通过体外实验证实负载树突状细胞并递呈后可诱导特异性杀伤CTL的抗原肽：通过体内实验证实负载树突状细胞并递呈后可诱导特异性杀伤CTL，并可在体内显著杀伤实体瘤的抗原肽：GPC3-1(编号2)、GPC3-3(编号4)、RACGAP1-1(编号7)和RACGAP1-2(编号8)。本专利技术的第一方面，提供抗原肽RACGAP1-1在制备预防和/或治疗肝癌药物中的应用，所述的抗原肽RACGAP1-1的氨基酸序列如SEQIDNO.7所示。本专利技术的第二方面，提供抗原肽RACGAP1-2在制备预防和/或治疗肝癌药物中的应用，所述的抗原肽RACGAP1-2的氨基酸序列如SEQIDNO.8所示。所述的抗原肽RACGAP1-1或RACGAP1-2可诱导特异性杀伤CTL，并可在体内显著杀伤肝癌实体瘤。本专利技术的第三方面，提供一种用于肝癌的预防和/或治疗的药物组合物，所述的药物组合物是以抗原肽RACGAP1-1作为活性成分，或者是含有抗原肽RACGAP1-1的药物组合物。本专利技术的第四方面，提供一种用于肝癌的预防和/或治疗的药物组合物，所述的药物组合物是以抗原肽RACGAP1-2作为活性成分，或者是含有抗原肽RACGAP1-2的药物组合物。本专利技术的第五方面，提供一种用于肝癌的预防和/或治疗的药物组合物，所述的药物组合物是以抗原肽RACGAP1-1和抗原肽RACGAP1-2作为活性成分，或者是含有抗原肽RACGAP1-1和抗原肽RACGAP1-2的药物组合物。优选的，所述的药物组合物含有有效量的上述的抗原肽，以及药学上可接受的载体。所述的“药学上可接受的”的成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)的，即有合理的效益/风险比的物质。所述的“有效量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。本专利技术建立了一整套基于肝癌二代测序数据挖掘肝癌抗原的方案，并基于挖掘出的肿瘤抗原设计抗原肽，同时将抗原肽负载树突状细胞后递呈CD8+T细胞，体外、体内实验筛选具有有效抗瘤能力的肽段。本专利技术提供可用于肝癌治疗的4条抗原肽，由以编号2、编号4、编号7和编号8中的任意一条由氨基酸形成的短肽，或者编号2和编号4两两组合、编号7和编号8两两组合可以负载树突状细胞诱导并获取大量具有特异性识别肝癌细胞的CTL。附图说明图1为GEO数据库中下载包含220例癌旁组织和224例肝癌组织的GSE14520数据集U133芯片数据，R语言中分析并输出的热图结果。调用函数包为DeSeq，参数设定为padj＜0.05，log2(foldchange)＞2。图2为ENCODE数据库中下载127种primarycell的RNA-Seq数据以及44种tissue的RNA-Seq数据。将表达数据经过TPM算法(RPKM算法的优化版本)进行均一化处理，生成矩阵，并在矩阵中调用GPC3的表达数据。图3为ENCODE数据库中下载127种primarycell的RNA-Seq数据以及44种tissue的RNA-Seq数据。将表达数据经过TPM算法(RPKM算法的优化版本)进行均一化处理，生成矩阵，并在矩阵中调用TOP2A的表达数据。图4为体外诱导人树突状细胞并负载本文档来自技高网...
【技术保护点】
抗原肽RACGAP1‑1在制备预防和/或治疗肝癌药物中的应用，所述的抗原肽RACGAP1‑1的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。
【技术特征摘要】
1.抗原肽RACGAP1-1在制备预防和/或治疗肝癌药物中的应用，所述的抗原肽RACGAP1-1的氨基酸序列如SEQIDNO.7所示。2.根据权利要求1所述的抗原肽RACGAP1-1在制备预防和/或治疗肝癌药物中的应用，其特征在于，所述的抗原肽RACGAP1-1诱导特异性杀伤CTL，并可在体内显著杀伤肝癌实体瘤。3.一种用于肝癌的预防和/或治疗的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物是以抗原肽RACGAP1-1作为活性成分，或者是含有抗原肽RACGAP1-1的药物组合物。4.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物含有有效量的抗原肽RACGAP1-1，以及药学上可接受的载体。5.抗原肽RACGAP1-2在制备预防和/或治疗肝癌药物中的应用，所述的抗原肽RACGAP1-2的氨基酸序列...
【专利技术属性】
技术研发人员：丁国善，王全兴，郭猛，刘芳，鲍蕾蕾，张铭健，展洋洋，曹雪涛，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：上海,31
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