人Lp‑PLA2抗原表位肽、抗原、抗体、用途及试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及人Lp‑PLA2抗原表位肽、抗原、抗体、用途及试剂盒。本发明专利技术的人Lp‑PLA2抗原表位肽的氨基酸序列，为序列表SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2所示的序列之一。本发明专利技术的Lp‑PLA2抗原由人Lp‑PLA2抗原表位肽与载体蛋白偶联制得。本发明专利技术的Lp‑PLA2单克隆抗体或多克隆抗体由本发明专利技术的Lp‑PLA2抗原制得。本发明专利技术的Lp‑PLA2单克隆抗体或多克隆抗体用于制备Lp‑PLA2体外诊断试剂盒。本发明专利技术的人Lp‑PLA2抗原表位肽具有良好的抗原性，用其制备的抗原（免疫原）免疫动物能够产生高度特异性的单克隆抗体和多克隆抗体，从而可应用于人Lp‑PLA2的体外检测。

【技术实现步骤摘要】
人Lp-PLA2抗原表位肽、抗原、抗体、用途及试剂盒
本专利技术属于多肽化学和免疫学领域，具体涉及人脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）抗原表位肽、用该抗原表位肽制备的Lp-PLA2特异性抗原和相应的单克隆抗体或多克隆抗体、所述抗体在制备人Lp-PLA2体外诊断试剂盒上的用途，人Lp-PLA2体外诊断试剂盒，以及一种用于定量检测待测物中人Lp-PLA2蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法。
技术介绍
心脑血管疾病一直被公认为是危害人类健康的最大杀手之一，也是全球范围内造成死亡的最主要原因。我国每年死于心脑血管疾病的人数高达300万以上，现有患者超过6000万人。近年来，随着居民生活水平的不断提高，自然环境的不断恶化，各种人群的心脑血管疾病的患病率、发病率和死亡率都呈逐年上升的趋势。尤其是中老年人的发病率高达62%，因此预防治疗心脑血管疾病已经变得刻不容缓，它不仅关系到广大人民群众的健康生活问题，在一定程度上还影响着整个国家国民素质的整体情况。心脑血管疾病的病理基础是动脉粥样硬化。近年来，研究发现动脉粥样硬化是一种炎性反应性疾病，炎性细胞及其释放的产物被认为是最主要的促动脉粥样硬化的因素。在粥样斑块形成、进展和最终破裂的过程中均有炎性反应介质的参与。因此，寻找一种能够反应这种动态变化过程的介质尤为重要，目前国际上已经发现了一种新的炎性反应标志物，即脂蛋白相关磷脂酶A2（Lipoprotein-AssociatedPhospholipaseA2，Lp-PLA2)。脂蛋白相关磷脂酶A2，英文简写Lp-PLA2，属于磷脂酶A2家族，主要由炎症细胞（如巨噬细胞和淋巴细胞）分泌。Lp-PLA2是由441个氨基酸组成的蛋白质，分子量为45KDa。Lp-PLA2具有降解血小板活化因子的活性，又称为血小板活化因子乙酰水解酶（PAF-AH）。80%的Lp-PLA2与低密度脂蛋白（LDL）结合，能水解低密度脂蛋白上的氧化卵磷脂，生成溶血卵磷脂和氧化型游离脂肪酸，后二者是促炎物质，因此Lp-PLA2具有促炎症和促动脉粥样硬化形成的作用。当动脉粥样硬化的炎症发展到严重程度时，Lp-PLA2将会被大量释放入血液中，致使其血液内的水平大幅增高，因此Lp-PLA2在血液中的浓度能够反映动脉粥样斑块的炎症程度。因此，通过检测血液中的Lp-PLA2，可以有效地了解动脉粥样硬化斑块的炎症程度及其稳定性。这样就可预警心肌梗死和脑血栓的发生，对预防心脑血管突发事件具有相当重要的意义。检测Lp-PLA2最理想的方法是免疫测定。因此，寻找合适的具有免疫原性的Lp-PLA2抗原表位肽、制备特异性的Lp-PLA2抗原及抗体即成为了重点。
技术实现思路
为解决上述现有技术中所存在的问题，本专利技术提供了一种人Lp-PLA2抗原表位肽，用该抗原表位肽制备的Lp-PLA2特异性抗原和相应的单克隆抗体或多克隆抗体，其在制备人Lp-PLA2体外诊断试剂盒上的用途，以及人Lp-PLA2体外诊断试剂盒。具体而言，本专利技术提供了：一种人Lp-PLA2抗原表位肽，其中所述Lp-PLA2抗原表位肽的氨基酸序列为如下两者之一：(1)Thr-Lys-Ile-Pro-Arg-Gly-Asn-Gly-Pro-Arg-Ser-Lys-Glu-Ser-Tyr；(2)Tyr-Lys-Gly-Asp-Ile-Asp-Ser-Asn-Val-Ala-Ile-Asp-Leu-Ser-Asn。本专利技术还提供了一种Lp-PLA2抗原，其是通过使所述的人Lp-PLA2抗原表位肽(1)与载体蛋白偶联制备而成的。本专利技术还提供了一种Lp-PLA2抗原，其是通过使所述的人Lp-PLA2抗原表位肽(2)与载体蛋白偶联制备而成的。本专利技术还提供了一种人Lp-PLA2抗体，其是由所述的Lp-PLA2抗原制备而成的单克隆抗体或多克隆抗体，其中所述Lp-PLA2抗原是通过使所述的人Lp-PLA2抗原表位肽(1)与载体蛋白偶联制备而成的。本专利技术还提供了一种人Lp-PLA2抗体，其是由所述的Lp-PLA2抗原制备而成的单克隆抗体或多克隆抗体，其中所述Lp-PLA2抗原是通过使所述的人Lp-PLA2抗原表位肽(2)与载体蛋白偶联制备而成的。本专利技术还提供了根据所述的人Lp-PLA2抗体在制备人Lp-PLA2体外诊断试剂盒上的用途。本专利技术还提供了一种人Lp-PLA2体外诊断试剂盒，其包含所述的人Lp-PLA2抗体作为包被抗体，其中所述包被抗体优选为单克隆抗体。优选地，所述试剂盒还包含结合抗体，所述结合抗体为所述的人Lp-PLA2抗体，并且该结合抗体优选为多克隆抗体，并且当所述结合抗体来源于所述的人Lp-PLA2抗原表位肽(1)和(2)中的一者时，所述包被抗体来源于所述的人Lp-PLA2抗原表位肽(1)和(2)中的另一者。优选地，所述试剂盒还包含酶标记的第二抗体。本专利技术与现有技术相比具有以下优点和积极效果：1.本专利技术的人Lp-PLA2抗原表位肽具有良好的抗原性，用其制备的抗原（免疫原）免疫动物能够产生高度特异性的单克隆抗体和多克隆抗体。2.用本专利技术制备的Lp-PLA2单克隆抗体和多克隆抗体能够高度特异地与血液样本中的Lp-PLA2结合。3.本专利技术的人Lp-PLA2体外诊断试剂盒可以有效地监测动脉粥样硬化斑块的炎症程度及其稳定性，可预警心肌梗死和脑血栓的发生，预防心脑血管突发事件。4.本专利技术将荧光分析技术与快速层析免疫技术相结合，提供了一种用于定量检测待测物中人Lp-PLA2蛋白的荧光免疫层析试纸，用该试纸检测待测物中的人Lp-PLA2蛋白，操作简便、快速，只需10分钟就能完成样品检测，并且检测范围宽、特异性高、灵敏度好，能够迅速及时地帮助诊断病情，监测预后。5.本专利技术在制备所述人Lp-PLA2蛋白的荧光免疫层析试纸的过程中，通过大量的试验摸索，优化了各方面的制备条件，使得用本专利技术的荧光免疫层析试纸进行检测时，荧光信背比大大提高，从而提高了检测灵敏度和结果可信度；此外，本专利技术还通过试纸的检测区与质控区的荧光强度比值的变化来反应样品中Lp-PLA2的含量，这与传统的层析技术只考查检测区的绝对荧光强度相比，最大程度上减少了外界条件和背景等的影响，进一步提高了检测结果可信度。具体实施方式以下通过具体实施方式的描述对本专利技术作进一步说明，但这并非是对本专利技术的限制，本领域技术人员根据本专利技术的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本专利技术的基本思想，均在本专利技术的范围之内。一、人Lp-PLA2抗原表位肽本文中所述的人Lp-PLA2蛋白是本领域已知的，其氨基酸序列是本领域已知的，可以在NCBI等专业数据库中查到。本专利技术提供了一种人Lp-PLA2抗原表位肽(1)和(2)，其氨基酸序列分别如序列表SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示，为：(1)Thr-Lys-Ile-Pro-Arg-Gly-Asn-Gly-Pro-Arg-Ser-Lys-Glu-Ser-Tyr；(2)Tyr-Lys-Gly-Asp-Ile-Asp-Ser-Asn-Val-Ala-Ile-Asp-Leu-Ser-Asn。本专利技术的专利技术人经过大量的理论研究和实验摸索，最终筛选得到两种具有良好的抗原性的抗原表位肽。Lp-PLA2抗原表位肽(1)以人Lp-PLA2蛋白N端第54至6本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人Lp‑PLA2抗原表位肽，其中所述Lp‑PLA2抗原表位肽的氨基酸序列为如下两者之一：(1)Thr‑Lys‑Ile‑Pro‑Arg‑Gly‑Asn‑Gly‑Pro‑Arg‑Ser‑Lys‑Glu‑Ser‑Tyr；(2)Tyr‑Lys‑Gly‑Asp‑Ile‑Asp‑Ser‑Asn‑Val‑Ala‑Ile‑Asp‑Leu‑Ser‑Asn。

【技术特征摘要】
1.一种人Lp-PLA2抗原表位肽，其中所述Lp-PLA2抗原表位肽的氨基酸序列如下：Thr-Lys-Ile-Pro-Arg-Gly-Asn-Gly-Pro-Arg-Ser-Lys-Glu-Ser-Tyr。2.一种Lp-PLA2抗原，其是通过使权利要求1所述的人Lp-PLA2抗原表位肽与载体蛋白偶联制备而成的。3.一种人Lp-PLA2抗体，其是由权利要求2所述的Lp-PLA2抗原制备而成的单克隆抗体或多克隆抗体。4.根据权利要求3所述的人Lp-PLA...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱建安，
申请(专利权)人：深圳市安群生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44