与NCC-ST-439抗原特异性反应的单克隆抗体及其制造方法技术

识别用作肿瘤标记物的糖链抗原的抗体的抗原特异性不充分，因而在使用了这样的抗体检测肿瘤标记物时，存在检测特异性降低、癌症诊断的准确性降低的问题。为了解决上述课题，本发明专利技术提供与用作肿瘤标记物的NCC‑ST‑439抗原的糖链进行特异性反应的抗体及其制造方法。

Monoclonal antibody specific to ncc-st-439 and its manufacturing method

【技术实现步骤摘要】
与NCC-ST-439抗原特异性反应的单克隆抗体及其制造方法
本专利技术涉及与NCC-ST-439抗原特异性反应的单克隆抗体及其制造方法。
技术介绍
近年来，报告了很多与用作肿瘤标志物的糖链抗原相对应的抗体。现已知，识别食管癌组织的抗体所识别的NCC-ST-439抗原是包含唾液酸的糖链抗原，并在在胃癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌等中上升(非专利文献1)。另外，现已知，以人胰腺癌培养细胞HPAF-1为免疫抗原而制成的单克隆抗体DUPAN-2与由胰腺癌细胞高效产生的粘蛋白样蛋白质反应，并且可认为唾液酸与其抗原决定簇相关(非专利文献2、3)。该抗原被称为DUPAN-2抗原，特别用作胰腺癌、胆道系统癌等消化系统癌症的标记物。另一方面，识别这些用作肿瘤标记物的糖链抗原的抗体通常是作为以特定癌细胞整体为抗原进行识别的物质而被分离，因而其抗原特异性不充分，可能与多个糖链抗原反应。在使用这些的抗体检测肿瘤标记物时，存在检测特异性降低，癌症诊断的准确性降低的问题。因此，为了利用肿瘤标记物进行更准确的诊断，需要获得与特定糖链抗原特异性反应的抗体。现有技术文献非专利文献非专利文献1：GANNJapaneseJournalofCancerResearch,1984年,Vol.75,No.6,pp.485-488非专利文献2：临床病理，1986年，Vol.34,No.6,pp.705-710非专利文献3：癌症与化学疗法,1986年,Vol.13,No.11,pp.3207-3214
技术实现思路
专利技术所要解决的问题本专利技术的目的在于提供与用作肿瘤标记物的NCC-ST-439抗原的糖链特异性反应的抗体及其制造方法。用于解决问题的技术方案本专利技术人等为了解决上述课题潜心研究，其结果是，实现了将NCC-ST-439抗原的糖链自身用作抗原并获得与该抗原特异性识别的抗体。在各种用作肿瘤标记物的粘蛋白抗原中，通过该方法得到的抗体高度特异性地识别NCC-ST-439抗原，而不与DUPAN-2等其它肿瘤标记物抗原反应。即，在本专利技术的一种方式中，提供以下物质。[1]一种抗体及其抗原结合片段，所述抗体及其抗原结合片段与具有下述糖链结构的NCC-ST-439抗原反应，并且不与具有下述糖链结构的DUPAN-2抗原反应Neu5Acα2-3Galβ1-3GlcNAcβ1-3Gal-。[2]根据[1]所述的抗体或其抗原结合片段，其中，对于DUPAN-2抗原的反应性低于对于NCC-ST-439抗原的反应性的10％。[3]根据[1]所述的抗体或其抗原结合片段，其中，对于DUPAN-2抗原的反应性低于对于NCC-ST-439抗原的反应性的1％。[4]根据[1]～[3]中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体为大鼠抗体。[5]一种方法，其为所述[1]～[4]中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的制造方法，并且其包含将结合有所述NCC-ST-439抗原的高分子化合物进行动物免疫的工序。[6]一种方法，其为产生所述[1]～[4]中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的细胞的制造方法，并且其包含将结合有所述NCC-ST-439抗原的高分子化合物进行动物免疫的工序。[7]根据所述[5]或[6]所述的方法，其中，结合有所述NCC-ST-439抗原的高分子化合物不包含NCC-ST-439抗原结合蛋白的蛋白部分。[8]一种免疫测定方法，其使用所述[1]～[3]中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。[9]一种免疫测定试剂，其包含所述[1]～[3]中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。专利技术效果在用作肿瘤标记物的粘蛋白抗原中，本专利技术的抗体高度特异性地识别NCC-ST-439抗原，而不与DUPAN-2等其他肿瘤标记物抗原反应。因此，可以特异性检测表达NCC-ST-439抗原的癌细胞，例如胰腺癌细胞等，从而可以更准确地诊断癌症。另外，通过利用本专利技术中的制备特异性识别用作肿瘤标记物的粘蛋白抗原的抗体的方法，可以得到与特定肿瘤标记物高度特异性反应的抗体。附图说明图1是表示与NCC-ST-439抗原特异性反应的抗体的制备方法的概要的图。图2是表示抗原固相化ELISA法的试验结果的图。图3是表示本专利技术的单克隆抗体的表位分析结果的图。图4a是表示本专利技术的单克隆抗体的特异性分析结果的图。图4b是表示本专利技术的单克隆抗体的特异性分析结果的图。图4c是表示本专利技术的单克隆抗体的特异性分析结果的图。图4d是表示本专利技术的单克隆抗体的特异性分析结果的图。图4e是表示本专利技术的单克隆抗体的特异性分析结果的图。具体实施方式下面，对本专利技术的实施方式进行说明。下面的说明仅为示例，本专利技术的范围不限定于这些说明，并且可以在不损害本专利技术的主旨的范围内实施适当变更。(定义)只要没有特别指示，则本说明书中所使用的全部技术术语及科学术语具有本领域技术人员通常理解的含义。在本说明书中，在示出多个数值范围的情况下，由这些多个范围的任意下限值及上限值的组合而构成的范围也具有相同含义。在本说明书中，在采用抗体和某个化合物“反应”、“表现出反应性”、“具有反应性”、“结合”或者抗体“识别”某个化合物这些的表述的情况下，包含本专利技术的领域中通常使用的含义，且均按照相同的含义使用。抗体是否与某化合物“反应”，除可以通过本领域技术人员公知的抗原固相化ELISA法、竞争ELISA法、夹心ELISA法等来确认以外，还可以通过利用了表面等离子体共振(surfaceplasmonresonance)原理的方法(SPR法)等来确认。SPR法可以使用以Biacore(注册商标)的名称市售的装置、传感器、试剂类来进行。在本说明书中，本专利技术的抗体不与某化合物“反应”是指本专利技术的抗体实质上不与某化合物反应。“实质上不反应”是指，例如在抗原固相化ELISA法中，抗体和固相化抗原的结合实质上不因添加该化合物而受到影响。也可以通过除上述抗原固相化ELISA法以外的本领域技术人员公知的方法及方式来确认“实质上不反应”。在本说明书中，抗体“特异性反应”、或抗体的“特异性”是指抗体与存在于抗原上的抗原决定簇可检测地进行反应的能力，而在另一方面与其它抗原的可检测的反应性较小或实质上检测不到反应性。例如，在抗体与特定抗原“特异性反应”的情况下，该抗体与该抗原反应，且不与其它抗原反应。在优选方式中，在抗体与特定抗原“特异性反应”的情况下，例如在抗原固相化ELISA法中固定的该抗原和该抗体的相互作用被游离的该抗原抑制，且不被其它游离抗原抑制。例如，在利用游离抗原的IC50表示上述抗原固相化ELISA法的抑制的情况下，相对于该特异性抗原的IC50，非特异性抗原的IC50可以为10倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、1000倍、10000倍。另外，在特异性抗原的IC50为其它抗原的1/X的情况下，也可以表现为该特异性抗原的反应性为对于其它抗原的反应性的X倍。优选其它抗原的反应性相对于特异性抗原为20％、15％、10％、5％、4％、3％、2％或1％以下。在本专利技术的优选方式中，本专利技术的抗体与NCC-ST-439抗原反应，而不与DUPAN-2抗原反应。在本说明书中，“抗体”是指包含四个多肽链、并通过二硫键相互连接的含有两个重链(H)和两个轻链(L)的免疫球蛋白分子。各重链包含重链的可变本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段与具有下述糖链结构的NCC‑ST‑439抗原反应，

【技术特征摘要】
2018.03.30 JP 2018-069132;2018.05.25 JP 2018-100971.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段与具有下述糖链结构的NCC-ST-439抗原反应，并且不与具有下述糖链结构的DUPAN-2抗原反应Neu5Acα2-3Galβ1-3GlcNAcβ1-3Gal-。2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中，对于DUPAN-2抗原的反应性低于对于NCC-ST-439抗原的反应性的10％。3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中，对于DUPAN-2抗原的反应性低于对于NCC-ST-439抗原的反应性的1％。4.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：三浦知启，宫崎修，
申请(专利权)人：积水医疗株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP