携带PAP抗原基因的重组腺相关病毒载体及构建方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种携带前列腺酸性磷酸酶(PAP)抗原基因的重组腺相关病毒载体(rAAV)及其构建方法与其应用。该rAAV载体是将腺相关病毒载体中的腺相关病毒的结构基因替换为PAP抗原基因得到。本发明专利技术的rAAV的病毒载体可将其携带的PAP抗原基因输送入单核细胞‑树突状细胞系中，被用于刺激免疫系统的效应细胞。实验证明，被本发明专利技术的rAAV的病毒载体感染的DC所诱导的CTL在体外或患者体内可有效地抑制PAP抗原阳性的恶性肿瘤细胞的生长或者杀灭肿瘤细胞。本发明专利技术的重组腺相关病毒载体或其相关产品可被用于制备治疗抗PAP抗原阳性的前列腺癌的药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物领域中的载体及其应用，特别是涉及一种携带前列腺酸性磷酸酶(prostatic acid phosphatase，PAP)抗原基因的重组腺相关病毒载体及其构建方法以及其在制备抗PAP阳性的前列腺癌药物中的应用。
技术介绍
腺相关病毒(adeno-associated virus，AAV)的基因结构已经被鉴定。1983年，Samulski等人描述了AAV的末端重复片段(上游5’端片段，下游3’端片段)(Samulski RJ,Srivastava A,Berns KI,Muzyczka N.Rescue of adeno-associated virus from recombinant plasmids:gene correction within the terminal repeats of AAV.Cell.33:135-143.)。1984年，Hermonat等人描述了AAV的低感染颗粒(lip)基因和包膜(cap)基因(Hermonat PL,Labow MA,Wright R,Berns KI,Muzyczka N.Genetics of adeno-a本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种携带前列腺酸性磷酸酶(PAP)抗原基因的重组腺相关病毒载体，其特征在于：将腺相关病毒载体中的腺相关病毒的结构基因替换为PAP抗原基因得到的重组腺相关病毒载体。

【技术特征摘要】
2015.06.17 CN 20151033670891.一种携带前列腺酸性磷酸酶(PAP)抗原基因的重组腺相关病毒载体，其特征在于：将腺相关病毒载体中的腺相关病毒的结构基因替换为PAP抗原基因得到的重组腺相关病毒载体。2.根据权利要求1所述的重组腺相关病毒载体，其特征在于：所述重组腺相关病毒载体中的启动子为AAV p5启动子、巨噬细胞病毒启动子、β-肌动蛋白启动子或SV40早期启动子中的一种。3.一种携带PAP抗原基因的重组腺相关病毒载体的构建方法，其特征在于：在腺相关病毒载体中，将腺相关病毒的结构基因剔除，在剔除的位置上插入PAP抗原基因，得到重组腺相关病毒载体。4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于：还包括以下步骤：将所述腺相关病毒的p5启动子替换为下述三种启动子中的一种：巨噬细胞病毒启动子、β-肌动蛋白启动子、SV40早期启动子。5.根据权利要求3或4所述的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：1)获取PAP cDNA；2)将已构建的携带有启动子的AAV 2型pBR322质粒和步骤1)得到的PAP cDNA进行限制性内切酶反应，然后进行DNA连接反应，得到携带有启动子和PAP cDNA的重组腺相关病毒载体。6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于：所述步骤1)中包括以下步骤：11)从前列腺癌组织中提取PAP的总mRNA，由总mRNA进行逆转录反应，合成总cDNA；12)以所述总cDNA为模板，在引物1：CATGAGAGCTGCACCCCTCC和引物2：CTAATCTGTACTGTCCTCAGT的引导下进行PCR扩增，得到所述PAP cDNA。7.一种与携带PAP抗原基因的重组腺相关病毒载体相关的产品，其特征在于：所述产品为PAP重组腺相关病毒的质粒载体、PAP重...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘勇，史鹏燕，董文娟，高洪吉，李帆，冯雪，
申请(专利权)人：深圳益世康宁生物科技有限公司，刘勇，
类型：发明
国别省市：广东;44