结合表皮生长因子受体的可活化的抗体其使用方法技术

本发明专利技术涉及结合表皮生长因子受体的可活化的抗体其使用方法。本发明专利技术一般性涉及可活化的抗体，其包括掩蔽部分（MM）、可切割的部分（CM）和特异性结合表皮生长因子受体（EGFR）的抗体（AB），以及制造和在多种治疗性、诊断性和预防性适应症中使用这些可EGFR可活化的抗体的方法。

Activated antibodies binding to epidermal growth factor receptor and their use

【技术实现步骤摘要】
结合表皮生长因子受体的可活化的抗体其使用方法相关申请本申请是国际申请日为2013年4月26日的国际申请PCT/US2013/038540进入中国、申请号为201380033414.8的题为“结合表皮生长因子受体的可活化的抗体其使用方法”的专利技术专利申请的分案申请。本申请要求2012年4月27日提交的美国临时申请号61/639,796，2012年6月20日提交的美国临时申请号61/662,204，2013年1月4日提交的美国临时申请号61/749,220，2013年1月7日提交的美国临时申请号61/749,529和2013年2月11日提交的美国临时申请号61/763,237的优先权，其每个通过引用以其整体并入本文。
本专利技术一般性涉及特异性结合表皮生长因子受体（EGFR）的可活化的抗体，特异性结合EGFR的缀合的可活化的抗体，以及在各种治疗性、诊断性和预防性适应症中制备和使用这些抗EGFR可活化的抗体和/或缀合的抗EGFR可活化的抗体的方法。
技术介绍
基于抗体的疗法已证明对于某些疾病的治疗是有效的，但在某些情况下，由于广泛的靶表达导致的毒性已限制了它们的治疗有效性。此外，基于抗体的治疗剂已经表现出其它的限制，例如施用后从循环的快速清除。在小分子治疗剂的领域中，已开发了提供活性化学实体的前药的策略。这样的前药以相对无活性（或活性显著较低）的形式被施用。一旦施用，前药在体内被代谢成活性化合物。这样的前药的策略可以提供药物对其预定靶的增加的选择性，以及降低的副作用。因此，在基于抗体的治疗剂领域对于模仿小分子前药的理想特性的抗体存在持续的需求。
技术实现思路
本专利技术提供可活化的抗体，其包括偶联到掩蔽部分（maskingmoiety，MM）的特异性结合表皮生长因子受体（EGFR）的抗体或其抗原结合片段，使得所述MM的偶联减小了所述抗体或其抗原结合片段结合EGFR的能力。在一个优选的实施方案中，所述MM经由序列偶联，所述序列包括蛋白酶底物，例如，与EGFR共定位于对象中的治疗部位的蛋白酶。本文提供的可活化的抗EGFR抗体在循环中稳定，在意向治疗和/或诊断部位而非正常，即，健康组织，被活化，并且，当被活化时，显示至少与相应的未修饰的抗体相当的对EGFR的结合。本专利技术提供缀合的可活化的抗体，其包括偶联到掩蔽部分的特异性结合表皮生长因子受体（EGFR）的抗体或其抗原结合片段，使得所述MM的偶联减小了所述抗体或其抗原结合片段结合EGFR的能力，并且其中可活化的抗体缀合到一种或多种额外的试剂。在所述缀合的可活化的抗体的一个优选的实施方案中，所述MM经由序列偶联，所述序列包括蛋白酶底物，例如，与EGFR共定位于对象中的治疗部位的蛋白酶。本文提供的缀合的可活化的抗EGFR抗体在循环中稳定，在意向治疗和/或诊断部位而非正常，即，健康组织，被活化，并且，当被活化时，显示至少与相应的未修饰的抗体相当的对EGFR的结合。本专利技术提供了在对象中使用治疗性分子治疗、预防和/或延缓适应症发作或进展，或减轻适应症症状的方法，所述适应症例如，与EGFR的异常表达和/或活性相关的疾病或病症，例如，EGFR相关病症，所述治疗性分子例如，在活化状态结合EGFR的可活化的抗体和/或在活化状态结合EGFR的缀合的可活化的抗体，特别是当活化时结合和中和或以其它方式抑制EGFR的至少一种生物活性和/或EGFR介导的信号传导的可活化的抗体和/或缀合的可活化的抗体。本文所述的可活化的抗体在活化状态结合EGFR并包括（i）特异性结合EGFR的抗体或其抗原结合片段（AB），其中所述AB是或者衍生自西妥昔单抗；（ii）掩蔽部分（MM），其抑制在未切割状态的可活化的抗体的AB对EGFR的结合；和（c）偶联到所述AB的可切割部分（CM），其中所述CM是多肽，其作为蛋白酶的底物发挥作用。在一些实施方案中，MM对于结合AB具有的平衡解离常数大于AB对EGFR的平衡解离常数。在一些实施方案中，MM对于结合AB具有的平衡解离常数不超过AB对EGFR的平衡解离常数。在一些实施方案中，MM不干扰或竞争在切割状态的可活化的抗体的AB结合EGFR。在一些实施方案中，蛋白酶与EGFR在组织中共定位，并且当可活化的抗体暴露于蛋白酶时，蛋白酶切割可活化的抗体中的CM。在一些实施方案中，所述蛋白酶在不显著表达EGFR组织中无活性或者活性显著较低。在一些实施方案中，所述蛋白酶在健康，例如非患病的组织中无活性或者活性显著较低。在一些实施方案中，在未切割状态的可活化的抗体从N末端到C末端具有下列结构安排：MM-CM-AB或AB-CM-MM。在一些实施方案中，可活化的抗体在MM和CM之间包括连接肽。在一些实施方案中，可活化的抗体在CM和AB之间包括连接肽。在一些实施方案中，可活化的抗体包括第一连接肽（LP1）和第二连接肽（LP2），并且其中在未切割状态的可活化的抗体从N末端到C末端具有下列结构安排：MM-LP1-CM-LP2-AB或AB-LP2-CM-LP1-MM。在一些实施方案中，所述两个连接肽不需要彼此相同。在一些实施方案中，所述AB对于结合EGFR具有约100nM或更低的平衡解离常数。在一些实施方案中，所述MM是长度约2-40个氨基酸的多肽，例如，不超过40个氨基酸长。在一些实施方案中，所述MM多肽序列不同于EGFR，并且MM多肽序列与AB的任何天然结合配偶体不超过50%相同。在一些实施方案中，所述CM位于可活化的抗体中使得在未切割的状态，可活化的抗体对EGFR的结合被减少到以比未修饰的AB结合EGFR的平衡解离常数高至少20倍的平衡解离常数发生，并且其中以切割状态的可活化的抗体的AB结合EGFR。在一些实施方案中，所述CM位于可活化的抗体中使得在未切割的状态，可活化的抗体对EGFR的结合被减少到以比未修饰的AB结合EGFR的平衡解离常数高至少100倍的平衡解离常数发生，并且其中以切割状态的可活化的抗体的AB结合EGFR。在一些实施方案中，所述CM位于可活化的抗体中使得在未切割的状态，可活化的抗体对EGFR的结合被减少到以比未修饰的AB结合EGFR的平衡解离常数高至少200倍的平衡解离常数发生，并且其中以切割状态的可活化的抗体的AB结合EGFR。在一些实施方案中，MM的偶联降低AB结合EGFR的能力，使得当偶联MM时AB对EGFR的解离常数（Kd）比当未偶联MM时AB对EGFR的Kd高至少20倍。在一些实施方案中，MM的偶联降低AB结合EGFR的能力，使得当偶联MM时AB对EGFR的Kd比当未偶联MM时AB对EGFR的Kd高至少100倍。在一些实施方案中，MM的偶联降低AB结合EGFR的能力，使得当偶联MM时AB对EGFR的Kd比当未偶联MM时AB对EGFR的Kd高至少1000倍。在一些实施方案中，MM的偶联降低AB结合EGFR的能力，使得当偶联MM时AB对EGFR的Kd比当未偶联MM时AB对EGFR的Kd高至少10,000倍。在一些实施方案中，CM是长度至多达15个氨基酸的多肽。在一些实施方案中，当在体外测定时使用靶置换测定（targetdisplacementassay），在EGFR的存在下，当CM未切割时，相比CM切割时MM使AB结合EGFR的能力减少至少90%，所述靶置换测定诸如，例如本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.可活化的抗体，其在活化的状态下结合表皮生长因子受体（EGFR），包含：特异性结合EGFR的抗体或其抗原结合片段（AB），其中所述AB包含（i）选自SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 30和SEQ ID NO: 34的重链氨基酸序列和包含SEQ ID NO: 68的轻链氨基酸序列；或（ii）选自SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 6和SEQ ID NO: 10的重链氨基酸序列和包含SEQ ID NO: 68的轻链氨基酸序列；掩蔽部分（MM），其抑制在未切割状态的可活化的抗体的AB结合EGFR，其中所述掩蔽部分包含氨基酸序列CISPRGCPDGPYVMY (SEQ ID NO: 14)；和偶联到所述AB的可切割部分（CM），其中所述CM是多肽，其作为蛋白酶的底物发挥作用，并且其中CM包含氨基酸序列LSGRSDNH (SEQ ID NO: 13)；其中在未切割状态的可活化的抗体从N末端到C末端具有下列结构安排：MM‑CM‑AB或AB‑CM‑MM。

【技术特征摘要】
2012.04.27 US 61/639796;2012.06.20 US 61/662204;201.可活化的抗体，其在活化的状态下结合表皮生长因子受体（EGFR），包含：特异性结合EGFR的抗体或其抗原结合片段（AB），其中所述AB包含（i）选自SEQIDNO:26、SEQIDNO:30和SEQIDNO:34的重链氨基酸序列和包含SEQIDNO:68的轻链氨基酸序列；或（ii）选自SEQIDNO:2、SEQIDNO:6和SEQIDNO:10的重链氨基酸序列和包含SEQIDNO:68的轻链氨基酸序列；掩蔽部分（MM），其抑制在未切割状态的可活化的抗体的AB结合EGFR，其中所述掩蔽部分包含氨基酸序列CISPRGCPDGPYVMY(SEQIDNO:14)；和偶联到所述AB的可切割部分（CM），其中所述CM是多肽，其作为蛋白酶的底物发挥作用，并且其中CM包含氨基酸序列LSGRSDNH(SEQIDNO:13)；其中在未切割状态的可活化的抗体从N末端到C末端具有下列结构安排：MM-CM-AB或AB-CM-MM。2.权利要求1的可活化的抗体，其中其抗原结合片段选自Fab片段、F（ab'）2片段、scFv和scAb。3.权利要求1的可活化的抗体，其中所述可活化的抗体包含选自下列的重链和轻链的组合：（a）包含SEQIDNO:26的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:28的...

【专利技术属性】
技术研发人员：HB罗曼，LR德斯诺耶斯，S刘，JW韦斯特，JG萨格特，O瓦西尔杰瓦，EEM梅宁德斯，
申请(专利权)人：西托姆克斯治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国,US