含有可活化抗体的组合物制造技术

本发明专利技术提供包含完整的可活化抗体及其经修剪的变体的组合物、将完整的可活化抗体的经修剪的变体与完整的可活化抗体分离的方法以及包括用于在组合物生产工艺中确定或监测可活化抗体及其经修剪的变体的相对百分比的方法在内的相关方法。法在内的相关方法。法在内的相关方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含有可活化抗体的组合物
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年4月9日提交的美国临时申请第63/007,776号的优先权权益，所述申请的整个内容通过引用方式并入本文。
[0003]对序列表的引用
[0004]本申请包括以电子格式提交的序列表。该序列表的名称为“CYTX
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056
‑
PCT_ST25.txt”，创建于2021年3月31日，并且大小为88,000字节。电子格式的序列表中的信息是本申请的一部分，并通过引用方式以其整体并入本文。


[0005]本公开涉及与完整的可活化抗体及其经修剪的变体有关的组合物和方法，包括组合物和用于制备、纯化、测量、监测和使用所述组合物的方法。

技术介绍

[0006]单克隆抗体是一类不断增长的治疗性化合物，每一类都被设计为结合至多种临床适应症中的任何一种涉及的靶抗原。迄今为止，存在大量处于研究阶段或批准作为新药的单克隆抗体产品。虽然该产品类别的迅速增长导致用于制造它们的工艺取得了重大进展，但产品聚集仍然是每个新单克隆抗体药物的制造工艺开发过程中必须解决的重要问题。Varsha,等人BioPharm International第26卷，第3期。产品聚集是不想要的，因为它导致药物产品的产量降低，并且如果不从药物产物组合物中去除的话会导致潜在的安全问题。同上。例如，聚集可能会导致亚可见颗粒形成，这些颗粒可能会暴露正常情况下未暴露的表位，如果施用于患者可能会导致免疫原性增加。同上。
[0007]聚集体通常是在细胞培养中的产品表达过程中、下游处理中的产品纯化过程中或储存过程中不可逆地形成的大的、缠结的变性抗体分子簇。同上。多种因素可能有助于聚集体的形成。已经寻求基于抗体的疗法的安全性和/或功效的改进，并且在某些情况下，通过修饰分子的结构实现了基于抗体的疗法的安全性和/或功效的改进。然而，在某些情况下，这些结构变化给纯化的基于抗体的疗法的制造引入了另外的挑战。
[0008]因此，非常需要用于制造基于抗体的治疗性化合物的新工艺。

技术实现思路

[0009]在一个方面，本公开包括组合物，其包含完整的可活化抗体及其经修剪的变体，其中所述经修剪的变体以减少的量存在。在一些方面，其经修剪的变体包含抗原结合结构域(AB)和可切割部分(CM)的至少一部分。在一些方面，经修剪的变体缺少来自至少一个前结构域的掩蔽部分(MM)。
[0010]在一些方面，所述组合物包含如通过还原性SDS
‑
cGE所测量的至少约90％的完整的可活化抗体、如通过还原性SDS
‑
cGE所确定的小于约10％的经修剪的变体、如通过SE
‑
HPLC所确定的小于约5％的高分子量物质(HMWS)以及如通过相应的HCP ELISA所确定的小
于约150ppm的宿主细胞蛋白(HCP)。在一些方面，所述组合物包含大于95％的完整可活化抗体和0.05％至5％的经修剪的变体。在一些方面，所述组合物包含大于90％的完整可活化抗体、0.05％至5％的经修剪的变体、小于150ppm的宿主细胞蛋白(HCP)和/或小于5％的HMWS。在一些方面，所述组合物包含大于96％的完整可活化抗体、0.05％至4％的经修剪的变体、小于150ppm的HCP和/或小于5％的HMWS。在一些方面，所述组合物包含大于97％的完整可活化抗体、0.05％至3％的经修剪的变体、小于150ppm的宿主细胞蛋白(HCP)和/或小于5％的HMWS。在一些方面，所述组合物包含大于98％的完整可活化抗体、0.05％至2％的经修剪的变体、小于150ppm的宿主细胞蛋白(HCP)和/或小于5％的HMWS。在一些方面，所述组合物包含大于99％的完整可活化抗体、0.05％至1％的经修剪的变体、小于150ppm的宿主细胞蛋白(HCP)和/或小于5％的HMWS。在一些方面，本公开包括装有所述组合物的容器、小瓶、注射器或注射器装置。
[0011]在一个方面，本公开包括用于生产组合物的工艺，所述组合物包含：(A)大于95％的完整可活化抗体，其包含MM、CM和AB；(B)0.05％至5％的其经修剪的变体，所述方法包括将包含水、(A)、(B)和第一盐的水性原料加载到色谱柱上，其中所述色谱柱包括固定相，所述固定相包括支持基质和与其结合的疏水性配体，并用包含水和第二盐的洗脱液洗脱色谱柱以获得组合物。在一个方面，所述工艺包括将工艺流中的经修剪的变体的量减少75％至90％。在一个方面，所述工艺包括将工艺流中的HCP的量减少75％至90％。在一个方面，所述工艺包括将工艺流中的HMWS的量减少75％至90％。在一个方面，所述工艺包括将工艺流中的经修剪的变体、HCP和HMWS的量减少70％至95％。
[0012]在一个方面，本公开包括将完整的可活化抗体与其经修剪的变体分离的方法，所述其经修剪的变体与完整的可活化抗体的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的氨基酸序列，所述方法(i)将包含水、完整的可活化抗体、其经修剪的变体和第一盐的水性原料加载到色谱柱，其中所述色谱柱包括固定相，所述固定相包含支持基质和与其结合的疏水性配体，和(ii)用包含水和第二盐的洗脱液洗脱色谱柱以获得组合物，其中所述工艺流中所述经修剪的变体的量减少至少70％。在一些实施方案中，所述工艺流中所述经修剪的变体的量减少至少75％、80％、85％或90％。
[0013]在一个方面，本公开包括组合物和用于制备组合物的工艺，所述组合物具有至少90重量％、91重量％、92重量％、93重量％、94重量％、95重量％、96重量％、97重量％、98重量％或99重量％的完整的可活化抗体形式的组合物中总蛋白，并且0.1重量％至10重量％的其聚集的和经修剪的变体形式的总蛋白。
[0014]在一个方面，本公开包括用于生产药物组合物的方法，所述药物组合物包含完整的可活化抗体和小于5％的其经修剪的变体、小于5％的其聚集体、小于150ppm的HCP或它们的组合，所述方法包括将包含水、(A)、(B)和第一盐的水性原料加载到色谱柱上，其中所述色谱柱包括固定相，所述固定相包含支持基质和与其结合的疏水性配体，并用包含水和第二盐的洗脱液洗脱色谱柱以获得所述组合物。
[0015]在一些方面，本公开包括将本文公开的组合物施用于有需要的受试者，例如，患有癌症、炎性疾病、自身免疫性疾病或其组合的患者。在一些方面，本公开包括施用含亚毒性剂量的可活化抗体的经修剪的变体和一定剂量的在疾病微环境中被活化的可活化抗体的本文公开的组合物。在一些方面，本公开包括通过施用本公开的组合物来扩大治疗受试者
的治疗窗。
[0016]在一个方面，本专利技术提供用于生产完整的可活化抗体的纯化组合物的工艺，所述工艺包括：
[0017](a)将包含水、完整的可活化抗体、经修剪的杂质和第一盐的水性原料加载到色谱柱上，
[0018]其中所述色谱柱包括固定相，所述固本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种组合物，其包含完整的可活化抗体及其经修剪的变体，其中所述组合物包含如通过SDS
‑
cGE所确定的至少95％的完整的可活化抗体和0.05％至5％其经修剪的变体，其中所述完整的可活化抗体和所述其经修剪的变体的百分比总计100％。2.如权利要求1所述的组合物，其中所述经修剪的变体包含抗原结合结构域(AB)和可切割部分(CM)的至少一部分。3.如权利要求1或2所述的组合物，其还包含如通过相应的HCP ELISA所确定的小于150ppm的宿主细胞蛋白(HCP)和/或如通过SE
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HPLC所确定的0.1％至5％的高分子量物质(HMWS)。4.如权利要求1所述的组合物，其还包含如通过相应的HCP ELISA所确定的约0.5ppm至100ppm的宿主细胞蛋白(HCP)和如通过SE
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HPLC所确定的0.1％至3％的HMWS。5.如权利要求1所述的组合物，其包含如通过SDS
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cGE所确定的至少97％的完整的可活化抗体、约0.05％至3％的经修剪的变体、如通过相应的HCP ELISA所确定的约0.5ppm至100的宿主细胞蛋白(HCP)和如通过SE
‑
HPLC所确定的0.1％至3％的HMWS，其中所述完整的可活化抗体及所述其经修剪的变体的百分比总计100％。6.如权利要求1所述的组合物，其包含如通过SDS
‑
cGE所确定的至少97％的完整的可活化抗体、0.05％至3％的经修剪的变体和如通过SE
‑
HPLC所确定的0.1％至3％的HMWS，其中所述完整的可活化抗体和所述其经修剪的变体的百分比总计100％。7.一种水性组合物，其包含完整的可活化抗体及其经修剪的变体和选自Cl
‑
、Br
‑
、H2PO4‑
、I
‑
、NO3‑
、ClO4‑
和SCN
‑
的阴离子，选自N(CH3)
4+
、NH
4+
、Ba
+
、Ca
2+
、Mg
2+
、Cs
+
、Rb
+
、K
+
、Na
+
的阳离子，或者所述阴离子和所述阳离子的组合。8.如权利要求1
‑
7中任一项或组合所述的组合物，其包含2
‑
(N
‑
吗啉代)乙磺酸(MES)、MOPS、HEPES、(NH4)2SO4、Na2SO4、Na3PO4、K3PO4、NaCl、KCl和CH3COONH4或它们的组合。9.如权利要求1
‑
9中任一项或组合所述的组合物，其包含10mM至100mM的阴离子、阳离子、MES、MOPS、HEPES、(NH4)2SO4、Na2SO4、Na3PO4、K3PO4、NaCl、KCl和CH3COONH4或它们的组合。10.如权利要求1
‑
7中任一项或组合所述的组合物，其包含精氨酸、色氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、赖氨酸、组氨酸、丝氨酸、脯氨酸或它们的盐。11.如权利要求10所述的组合物，其包含10mM至150mM的精氨酸、色氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、赖氨酸、组氨酸、丝氨酸、脯氨酸或它们的盐。12.如权利要求1
‑
11中任一项或组合所述的组合物，其中所述组合物是具有约5.0至约8.0、或约5.0至约7.5、或约5.0至约7.0、或约5.5至约6.5的pH的水性组合物。13.如权利要求1
‑
12中任一项或组合所述的组合物，其中所述组合物是具有110至150mS/cm、115至145mS/cm、120至140mS/cm、125至135mS/cm或约130mS/cm的电导率的水性组合物。14.如权利要求1
‑
7中任一项或组合所述的组合物，其中所述组合物不含缓冲剂。15.如权利要求1
‑
7中任一项或组合所述的组合物，其中所述组合物具有存在于所述组合物中的缓冲剂的缓冲能力之外的pH。16.如权利要求1
‑
13中任一项或组合所述的组合物，其包含具有6.0至9.0的pKa的缓冲剂。17.一种容器、小瓶、注射器或注射器装置，其装有权利要求1
‑
16中任一项或组合所述
的组合物。18.一种用于HIC或MMC色谱柱的水性原料，其包含水、完整的可活化抗体、如通过SDS
‑
cGE所确定的至少2％的所述完整的可活化抗体的经修剪的变体、如通过相应的HCP ELISA所确定的至少10ppm的HCP和如SE
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HPLC所确定的至少1％的HMWS。19.如权利要求18所述的用于HIC或MMC色谱柱的水性原料，其包含如通过SDS
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cGE所确定的至少90％的完整的可活化抗体、如通过SDS
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cGE所确定的至少2％至15％的所述完整的可活化抗体的经修剪的变体、如通过ELISA所确定的至少10ppm的HCP和如通过SE
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HPLC所确定的1％至6％的HMWS。20.一种如权利要求18或权利要求19所述的水性原料的HIC洗脱物，其包含如通过SDS
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cGE所确定的至少95％的完整的可活化抗体、如通过SDS
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cGE所确定的小于2％的所述完整的可活化抗体的经修剪的变体、如通过ELISA所确定的小于5ppm的HCP和如通过SE
‑
HPLC所确定的小于1％的HMWS，其中所述完整的可活化抗体和所述经修剪的变体的百分比总计100％。21.如权利要求20所述的HIC洗脱物，其包含如通过SDS
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cGE所确定的至少97％的完整的可活化抗体、如通过SDS
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cGE所确定的小于1％的所述完整的可活化抗体的经修剪的变体、如通过ELISA所确定的小于2ppm的HCP和如通过SE
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HPLC所确定的小于0.5％的HMWS，其中所述完整的可活化抗体和所述经修剪的变体的百分比总计100％。22.一种如权利要求18或权利要求19所述的水性原料的MMC洗脱物，其包含如通过SDS
‑
cGE所确定的至少97％的完整的可活化抗体、如通过SDS
‑
cGE所确定的小于1％的所述完整的可活化抗体的经修剪的变体、如通过ELISA所确定的小于6ppm的HCP和如通过SE
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HPLC所确定的小于1％的HMWS，其中所述完整的可活化抗体和所述经修剪的变体的百分比总计100％。23.如权利要求22所述的MMC洗脱物，其包含如通过SDS
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cGE所确定的至少98％的完整的可活化抗体、如通过SDS
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cGE所确定的小于0.5％的所述完整的可活化抗体的经修剪的变体、如通过ELISA所确定的小于5ppm的HCP和如通过SE
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HPLC所确定的小于0.5％的HMWS，其中所述完整的可活化抗体和所述经修剪的变体的百分比总计100％。24.如权利要求20或21所述的HIC洗脱物或如权利要求22或权利要求23所述的MMC洗脱物，其具有产率为权利要求18或权利要求19所述的水性原料中存在的所述完整的可活化抗体的至少75％的所述完整的可活化抗体。25.如权利要求20或21所述的HIC洗脱物或如权利要求22或权利要求23所述的MMC洗脱物，其中所述水性原料中经修剪的变体的相对量与所述洗脱物中经修剪的变体的相对量相比的减少水平介于2倍至20倍之间。26.如权利要求20或21所述的HIC洗脱物或如权利要求22或权利要求23所述的MMC洗脱物，其中所述水性原料中经修剪的变体的相对量与所述洗脱物中经修剪的变体的相对量相比的减少水平介于2倍至10倍之间。27.如权利要求20或21所述的HIC洗脱物或如权利要求22或权利要求23所述的MMC洗脱物，其中所述水性原料中经修剪的变体的相对量与所述洗脱物中经修剪的变体的相对量相比的减少水平介于5倍至10倍之间。28.一种用于生产组合物的工艺，所述组合物包含：(A)大于95％的完整的可活化抗体，
其包含MM、CM和AB；和(B)如通过SDS
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cGE所确定的0.05％至5％的其经修剪的变体，所述工艺包括：(i)将包含水、(A)、(B)和第一盐的水性原料加载到色谱柱上，其中所述色谱柱包括固定相，所述固定相包含支持基质和与其结合的疏水性配体；以及(ii)用包含水和第二盐的洗脱液洗脱所述色谱柱以获得所述组合物。29.如权利要求28所述的工艺，其包括将所述工艺流中经修剪的变体的相对量减少75％至90％。30.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：西托姆克斯治疗公司，
类型：发明
国别省市：