用于缀合可活化抗体的组合物和方法技术

本发明专利技术涉及用于缀合可活化抗体的组合物和方法。本发明专利技术主要涉及用于缀合抗体和可活化抗体的组合物和方法，和在与试剂(例如治疗剂和/或诊断剂)缀合(例如基于巯基的缀合)之前部分地还原抗体和/或可活化抗体的方法。部分地还原抗体和/或可活化抗体的方法。部分地还原抗体和/或可活化抗体的方法。

【技术实现步骤摘要】
用于缀合可活化抗体的组合物和方法
[0001]本申请为分案申请，原申请的申请日为2014年6月4日，申请号为201480043966.1(PCT/US2014/040931)，专利技术名称为“用于缀合可活化抗体的组合物和方法”。
[0002]相关申请本申请要求2013年6月4日提交的美国临时申请号61/830,913和2013年12月23日提交的美国临时申请号61/919,935的权益。其各自的内容通过引用以其整体结合到本文中。
专利

[0003]本专利技术主要涉及用于缀合抗体和可活化抗体的组合物和方法，和在与试剂(例如治疗剂和/或诊断剂)缀合(例如基于巯基的缀合)之前部分地还原抗体和/或可活化抗体的方法。
[0004]专利技术背景基于抗体的疗法已证明有效治疗一些疾病，但在一些情况下，由于广泛的靶标表达导致的毒性限制了其治疗功效。此外，基于抗体的疗法已显示其它局限性，例如在给予后从循环中快速清除。抗体的缀合剂已用于进一步增进基于抗体的疗法的应用。分子例如毒素、放射性核素和药物，包括抗
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癌症药物，已与某些抗体缀合，以产生本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种部分地还原可活化抗体和将试剂与所述可活化抗体缀合，从而产生所述试剂定位的选择性的方法，所述方法包括：用还原剂还原所述可活化抗体中的至少1个二硫键，而不破坏所述可活化抗体中的任何链内二硫键，从而部分还原所述可活化抗体，其中还原剂与可活化抗体的比率在1:1至5:1的范围内，并且还原时间为30分钟至2小时，和将所述试剂与所述部分还原的可活化抗体的至少1个巯基缀合，其中所述可活化抗体包括特异性结合靶标的抗体或其抗原结合片段(AB)、抑制呈未裂解状态的所述可活化抗体的AB与所述靶标结合的与AB偶联的掩蔽部分(MM)、和与AB偶联的可裂解部分(CM)，其中CM是起蛋白酶的底物作用的多肽，其中所述可活化抗体的至少一个链内二硫键在所述MM内。2.权利要求1的方法，其中所述至少1个二硫键是链间二硫键。3.权利要求1的方法，其中所述至少1个二硫键是所述可活化抗体和第二分子之间的二硫键。4.权利要求3的方法，其中所述第二分子是半胱氨酸或谷胱甘肽。5.权利要求1的方法，其中未裂解状态的所述可活化抗体具有如下从N
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端至C
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端的结构排列：MM
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CM
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AB或AB
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CM
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MM。6.权利要求1的方法，其中所述还原剂是TCEP。7.权利要求1的方法，其中所述试剂选自表4中所列的试剂。8.权利要求1的方法，其中所述试剂是毒素或其片段。9.权利要求8的方法，其中所述试剂是微管抑制剂。10.权利要求8的方法，其中所述试剂是核酸破坏剂。11.权利要求8的方法，其中所述试剂是多拉司他汀、阿里他汀或其衍生物、类美登素或其衍生物、倍癌霉素或其衍生物、或卡奇霉素或其衍生物。12.权利要求4的方法，其中所述试剂是阿里他汀E或其衍生物。13.权利要求4的方法，其中所述试剂是单甲基阿里他汀E (MMAE)或单甲基阿里他汀D (MMAD)。14.权利要求4的方法，其中所述试剂是单甲基阿里他汀E (MMAE)。15.权利要求4的方法，其中所述试剂是单甲基阿里他汀D (MMAD)。16.权利要求4的方法，其中所述试剂是DM1或DM4。17.权利要求4的方法，其中所述试剂经过接头与AB缀合。18.权利要求17的方法，其中所述接头是可裂解接头。19.权利要求1的方法，其中所述试剂是可检测部分。20.权利要求19的方法，其中所述可检测部分是诊断剂。21.权利要求1的方法，其中所述靶标选自表1所列的靶标。22.权利要求1的方法，其中AB是或源自选自表2所列的抗体的抗体。23.权利要求1的方法，其中所述其抗原结合片段选自Fab片段、F(ab')2片段、scFv、scAb、dAb、单结构域重链抗体和单结构域轻链抗体。24.权利要求1的方法，其中MM的结合AB的平衡解离常数大于AB对所述靶标的平衡解离常数。
25.权利要求1的方法，其中当所述可活化抗体呈裂解状态时，MM不干扰AB结合所述靶标，或不与AB竞争结合所述靶标。26.权利要求1的方法，其中MM是长度不超过40个氨基酸的多肽。27.权利要求1的方法，其中MM多肽序列不同于所述靶标的序列，和其中MM多肽序列与AB的任何天然结合配偶体具有不超过50%的同一性。28.权利要求1的方法，其中MM与所述靶标不包括超过25%的氨基酸序列同一性。29.权利要求1的方法，其中MM与所述靶标不包括超过10%的氨基酸序列同一性。30.权利要求1的方法，其中CM是长度至多15个氨基酸的多肽。31.权利要求1的方法，其中所述蛋白酶与所述靶标在组织中共定位，和其中当所述可活化抗体暴露于所述蛋白酶时，所述蛋白酶裂解所述可活化抗体中的CM。32.权利要求1的方法，其中所述可活化抗体包含在MM和CM之间的连接肽。33.权利要求1的方法，其中所述可活化抗体包含在CM和AB之间的连接肽。34.权利要求1的方法，其中所述可活化抗体包含第一连接肽(LP1)和第二连接肽(LP2)，和其中呈未裂解状态的所述可活化抗体具有如下从N
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端至C
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端的结构排列：MM
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LP1
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CM
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LP2
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AB或AB
‑
LP2
‑
CM
‑
LP1
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MM。35.权利要求34的方法，其中所述两个连接肽不需要彼此相同。36.权利要求34的方法，其中LP1和LP2中的每一个是长度约1至20个氨基酸的肽。37.权利要求34的方法，其中LP1或LP2的至少1个包含选自以下的氨基酸序列：(GS)
n
、(GGS)
n
、(GSGGS)
n (SEQ ID NO: 21)和(GGGS)
n (SEQ ID NO: 22)、GGSG (SEQ ID NO: 23)、GGSGG (SEQ ID NO: 24)、GSGSG (SEQ ID NO: 25)、GSGGG (SEQ ID NO: 26)、GGGSG (SEQ ID NO: 27)和GSSSG (SEQ ID NO: 28)，其中n是至少1的整数。38.权利要求1的方法，其中CM是选自表3中所示的那些的酶的底物。39.权利要求1的方法，其中呈未裂解状态的所述可活化抗体包含间隔区，其中所述间隔区与MM直接连接，并具有以下从N
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端至C
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端的结构排列：间隔区
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MM
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CM
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AB。40.权利要求1的方法，其中所述可活化抗体的活性和/或效力不被所述可活化抗体的部分还原破坏或损害。41.权利要求40的方法，其中所述可活化抗体...

【专利技术属性】
技术研发人员：AW康拉迪，S辛格，HB洛曼，LR德斯诺耶斯，TW梁，
申请(专利权)人：西托姆克斯治疗公司，
类型：发明
国别省市：