源自间充质干细胞的外来体制造技术

本发明专利技术涉及一种源自间充质干细胞的微粒，其具有角膜上皮干细胞和/或角膜上皮细胞的增殖促进活性、角膜上皮干细胞的未分化维持活性或集落形成促进活性、或角膜上皮保护作用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】源自间充质干细胞的外来体
本专利技术涉及一种源自间充质干细胞的微粒，其具有角膜上皮干细胞和/或角膜上皮细胞的增殖促进活性、角膜上皮干细胞的未分化维持活性或角膜上皮干细胞的集落形成促进活性、或角膜上皮保护作用。
技术介绍
角膜上皮干细胞存在于角膜和结膜之间的缘部，在角膜上皮干细胞缺失症、角膜上皮障碍(cornealepitheliumdisorder)、糖尿病角膜症的原因和治疗过程中起到重要的作用。作为这些疾病的现有的治疗法，可举出人工泪液、抗生素的点眼或角膜移植，但存在点眼剂不起作用的情况，另外，异体角膜移植存在排斥反应的危险性和供体不足的问题点。记载有由源自眼表皮细胞的iPS细胞向角膜上皮细胞及角膜上皮干细胞分化诱导的方法(专利文献1)。但是，由iPS细胞分化成的角膜上皮细胞及角膜上皮干细胞在临床上仍处于开发过程中。已知角膜上皮干细胞例如通过以NIH/3T3细胞为饲养细胞的共培养体系等形成集落。另外，作为角膜上皮干细胞的标志物，已知有K14(角蛋白14)、K15(角蛋白15)、p63、N-钙粘着蛋白。另一方面，作为分化后的角膜上皮细胞的标志物，已知有眼组织特异性标志物(例如pax6)、角膜上皮特异性分化标志物(例如K3(角蛋白3)、K12(角蛋白12))等。另一方面，外来体(Exosome，外泌体)为各种细胞所分泌的、由脂质双层膜形成的直径30～150nm左右的小泡。近年获知：在外来体的膜中存在四次跨膜蛋白类(CD63、CD81、CD9等)，另外含有各种各样的蛋白质或mRNA、miRNA。另外，有报道指出：外来体例如可由细胞的培养上清通过超离心分离而得到(非专利文献1)。间充质干细胞(MSC)是系统受限的干细胞，具有仅分化为间充质细胞型、即脂肪细胞系统、软骨细胞系统及骨细胞系统的可能性。间充质干细胞源自骨髄、血液、脂肪及其它体细胞组织等各种各样的起源。在专利文献2中记载有：源自胚胎干细胞的间充质干细胞的外来体可用于含有心脏保护作用的治疗方法。另外，在专利文献3中记载有源自神经干细胞的外来体具有创伤治愈效果、刺激血管新生和轴突伸长。角膜上皮疾病为因任何原因而损伤了角膜上皮的疾病，例如就角膜上皮干细胞缺失症的原因而言，作为先天性原因可列举无虹膜症或强膜化角膜，作为外因性原因可列举碱腐蚀或热灼烧，作为内因性的原因可列举史-约(Stevens-Johnson综合征)或眼类天疱疮，以及特发性的原因。进而，近年来，着眼于角膜上皮干细胞的集落形成促进作用，正在进行角膜上皮干细胞缺失症等的治疗药的研究，但没有报道外来体具有角膜上皮干细胞的集落形成促进作用。(非专利文献2～4)。现有技术文献专利文献专利文献1：WO2012/144582专利文献2：日本特表2011-513217专利文献3：日本特表2015-513906非专利文献非专利文献1:GracaRaposoandWillemStoorvogel,J.CellBiol.Vol.200No.4373-383.非专利文献2:ZhouQ.etal.,TissueEngPartCMethods.2013Jul；19(7):531-7.非专利文献3:Park,K.etal.,Invest.Ophthalmol.Vis.Sci..2006；47(3):892-900.非专利文献4:Zhou,Q.etal.,StemCells(Dayton,Ohio),33(5),1566-76
技术实现思路
专利技术所要解决的问题本专利技术的课题在于，提供一种源自间充质干细胞的微粒，其对角膜上皮疾病的预防和/或治疗是有用的，具有角膜上皮干细胞和/或角膜上皮细胞的增殖促进活性、角膜上皮干细胞的未分化维持活性或角膜上皮干细胞的集落形成促进活性、或角膜上皮保护作用。用于解决问题的技术方案本专利技术人等为了解决所述的课题而重复进行了深入研究，结果发现：源自间充质干细胞的微粒具有角膜上皮干细胞和/或角膜上皮细胞的增殖促进活性、角膜上皮干细胞的未分化维持活性或角膜上皮干细胞的集落形成促进活性、或角膜上皮保护作用，直至完成本专利技术。本专利技术涉及以下专利技术。项1.一种源自间充质干细胞的微粒，其具有角膜上皮干细胞和/或角膜上皮细胞的增殖促进活性、角膜上皮干细胞的未分化维持活性或角膜上皮干细胞的集落形成促进活性、或角膜上皮保护作用。项2.根据项1所述的源自间充质干细胞的微粒，其中，间充质干细胞微粒具有1.13～1.19g/mL的密度，所述密度是利用密度梯度离心法测得的。项3.根据项1或2所述的源自间充质干细胞的微粒，其中，间充质干细胞微粒为外来体。项4.一种角膜上皮干细胞和/或角膜上皮细胞的增殖促进剂、角膜上皮干细胞的未分化维持剂或角膜上皮干细胞的集落形成促进剂、或角膜上皮保护剂，其含有源自间充质干细胞的微粒作为有效成分。项5.一种角膜上皮疾病的预防或治疗剂，其含有源自间充质干细胞的微粒作为有效成分。项6.根据项5所述的角膜上皮疾病的预防或治疗剂，其中，角膜上皮疾病选自由热腐蚀、碱腐蚀、酸腐蚀、药剂毒性、史-约综合征、眼类天疱疮、(复发)翼状胬肉、持续性角膜上皮缺损(persistentepithelialdefect)、角膜穿孔、角膜周边部溃疡、角膜溃疡、准分子激光术后的上皮剥离、放射性角膜病变、无虹膜症、沙眼后角膜浑浊、萨拉兹曼(Salzmann)角膜变性、角膜糜烂、睑球粘连、不明原因的角膜上皮干细胞消失的疾病、缘部肿瘤、移植物抗宿主疾病(GVHD)、角膜炎、浅层点状角膜炎、干眼症、干性角膜结膜炎、角膜上皮干细胞缺失症、角膜营养不良、糖尿病角膜症、及角膜上皮障碍构成的组。项7.根据项5所述的角膜上皮疾病的预防或治疗剂，其中，角膜上皮疾病选自由角膜上皮障碍、浅层点状角膜炎、角膜糜烂、角膜周边部溃疡、持续性角膜上皮缺损、干眼症、准分子激光术后的上皮剥离、热腐蚀、碱腐蚀、酸腐蚀、药剂毒性、糖尿病角膜症、角膜上皮干细胞缺失症、史-约综合征、眼类天疱疮、无虹膜症、不明原因的角膜上皮干细胞消失的疾病、及移植物抗宿主病(GVHD)构成的组。项8.根据项5所述的角膜上皮疾病的预防或治疗剂，其中，角膜上皮疾病为角膜上皮障碍、浅层点状角膜炎、角膜糜烂、角膜周边部溃疡、持续性角膜上皮缺损、干眼症、准分子激光术后的上皮剥离、热腐蚀、碱腐蚀、酸腐蚀、药剂毒性、糖尿病角膜症。项9.根据项8所述的角膜上皮疾病的预防或治疗剂，其中，角膜上皮干细胞缺失症因外在原因、内在原因、先天性缺损、或肿瘤性疾病而引起。项10.一种角膜上皮干细胞的培养方法，其特征在于，在源自间充质干细胞的微粒的存在下进行培养。项11.一种角膜上皮干细胞和/或角膜上皮细胞，其由项10所述的培养方法而得到。项12.一种角膜上皮疾病的预防或治疗剂的筛选方法，其以角膜上皮干细胞的集落形成为指标。本专利技术也涉及以下专利技术。项13.一种用于促进角膜上皮干细胞和/或角膜上皮细胞的增殖、维持角膜上皮干细胞的未分化性、或促进角膜上皮干细胞的集落形成、或保护角膜上皮的组合物，其含有有效量的源自间充质干细胞的微粒。项14.一种角膜上皮疾病的预防或治疗用的药物组合物，其含有治疗有效量的源自间充质干细胞的微粒。项15.源自间充质干细胞的微粒在促进角膜上皮干细胞和/或角膜上皮细胞的增殖、维持角膜上皮干细胞的未分本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种源自间充质干细胞的微粒，其具有角膜上皮干细胞和/或角膜上皮细胞的增殖促进活性、角膜上皮干细胞的未分化维持活性或角膜上皮干细胞的集落形成促进活性、或角膜上皮保护作用。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.08.03 JP 2015-1534121.一种源自间充质干细胞的微粒，其具有角膜上皮干细胞和/或角膜上皮细胞的增殖促进活性、角膜上皮干细胞的未分化维持活性或角膜上皮干细胞的集落形成促进活性、或角膜上皮保护作用。2.根据权利要求1所述的源自间充质干细胞的微粒，其中，间充质干细胞微粒具有1.13～1.19g/mL的密度，所述密度是利用密度梯度离心法测得的。3.根据权利要求1或2所述的源自间充质干细胞的微粒，其中，间充质干细胞微粒为外来体。4.一种角膜上皮干细胞和/或角膜上皮细胞的增殖促进剂、角膜上皮干细胞的未分化维持剂或角膜上皮干细胞的集落形成促进剂、或角膜上皮保护剂，其含有源自间充质干细胞的微粒作为有效成分。5.一种角膜上皮疾病的预防或治疗剂，其含有源自间充质干细胞的微粒作为有效成分。6.根据权利要求5所述的角膜上皮疾病的预防或治疗剂，其中，角膜上皮疾病选自由热腐蚀、碱腐蚀、酸腐蚀、药剂毒性、史-约综合征、眼类天疱疮、(复发)翼状胬肉、持续性角膜上皮缺损、角膜穿孔、角膜周边部溃疡、角膜溃疡、准分子激光术后的上皮剥离、放射性角膜病变、无虹膜症、沙眼后角膜浑浊、萨拉兹曼角膜变性、角膜糜烂、睑球粘连、不明原因的角膜上皮干细胞消失的疾病、缘部肿瘤、移植物抗宿主...

【专利技术属性】
技术研发人员：西田幸二，林龙平，本间阳一，大久保彻，柴田峻，
申请(专利权)人：国立大学法人大阪大学，日本乐敦制药株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP