一种脂肪干细胞分离和体外培养的方法技术

一种脂肪干细胞分离和体外培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：脂肪组织的获取、脂肪干细胞的分离、脂肪干细胞的体外培养。本发明专利技术的有益之处在于：本发明专利技术中的一种脂肪干细胞分离和体外培养的方法与现有技术相比，具有以下优点：1、减少对细胞的伤害和后期临床使用时的风险；2、操作方法简单易行、可重复性强；3、增殖速度快，培养周期比较短。

A method for isolation and culture of fat stem cells in vitro

A method for isolation and in vitro culture of adipose derived stem cells is characterized by the following steps: fat tissue acquisition, isolation of adipose derived stem cells, and in vitro culture of adipose derived stem cells. The invention has the advantages that: compared to a kind of fat in the invention with the existing stem cell separation and in vitro cultivation techniques, has the following advantages: 1, reduce the risk of cell injury and clinical use of late; 2, the operation method is simple and repeatable; 3, increased quickly. A relatively short period of training.

【技术实现步骤摘要】
一种脂肪干细胞分离和体外培养的方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种脂肪干细胞分离和体外培养的方法。
技术介绍
脂肪干细胞(adipose-derivedstemcells，ADSCs)自2001年被发现之后收到很大的重视。经过研究表明，脂肪干细胞具有向脂肪、软骨、成骨、成肌等多向分化潜能。2012年1月，韩国FDA批准的自体脂肪干细胞药物Cuepistem成功上市，用于治疗复杂性克隆氏病并发肛瘘。同年10月，美国FDA批准了CytoriTherapeutics公司脂肪干细胞对心脏衰竭患者有效性的临床试验。脂肪干细胞不仅具有各类干细胞具有的优势，还具有取材方便、创伤小、来源充足，一次可以获得大量新鲜的干细胞，自体使用没有免疫排斥反应等优点，而且避开了胚胎干细胞的伦理学困扰和骨髓干细胞的来源稀缺等麻烦。因此脂肪干细胞具有非常广阔的临床应用前景。目前脂肪干细胞的分离方法多采用机械法处理之后，利用酶消化的方法进行分离，在后期的培养中多添加双抗和血清，虽然对培养有一定的好处，也增加对细胞的伤害和后期临床使用时的风险。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种对细胞的伤害小，且后期临床使用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脂肪干细胞分离和体外培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)脂肪组织的获取：脂肪组织为专业的美容院在无菌条件下通过抽脂获得的脂肪废弃物，抽取之后以2‑8℃保存，储存时间不能超过48小时；(2)脂肪干细胞的分离：对脂肪组织进行1500rpm离心5分钟，弃掉上层油脂和下层血性细胞层，取中间脂肪层，使用PBS清洗脂肪3‑5次，直到清洗液清澈；最后一次清洗所得混合物进行1500rpm离心5分钟，吸取脂肪，记录脂肪体积；得脂肪按照1:1使用消化酶进行消化，37℃恒温摇床150‑280转速消化20‑60分钟；消化结束后，2000rpm离心5分钟，弃掉上层油脂层及消化后的脂肪层，留下层干细胞沉淀及少...

【技术特征摘要】
1.一种脂肪干细胞分离和体外培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)脂肪组织的获取：脂肪组织为专业的美容院在无菌条件下通过抽脂获得的脂肪废弃物，抽取之后以2-8℃保存，储存时间不能超过48小时；(2)脂肪干细胞的分离：对脂肪组织进行1500rpm离心5分钟，弃掉上层油脂和下层血性细胞层，取中间脂肪层，使用PBS清洗脂肪3-5次，直到清洗液清澈；最后一次清洗所得混合物进行1500rpm离心5分钟，吸取脂肪，记录脂肪体积；得脂肪按照1:1使用消化酶进行消化，37℃恒温摇床150-280转速消化20-60分钟；消化结束后，2000rpm离心5分钟，弃掉上层油脂层及消化后的脂肪层，留下层干细胞沉淀及少量的消化液，加入等体积的FBS进行终止；终止后混合物进行1500rpm离心5分钟，收集脂肪干细胞，使用PBS重悬，1500rpm清洗2遍，去除前期使用的双抗和FBS；所得细胞计数；(3)脂肪干细胞的体外培养：使用原代培养基重悬，100um过滤，按照3-5*10e5密度接种于T75培养瓶中，37℃，5％二氧化碳培养箱进行孵育；接种后24-48小时，观察细胞贴壁状态，原代培养基全量换液，去除未贴壁的悬浮细胞；每隔2-3天进行一次原代培养基的换液，至细胞融合度达到80-90％；对融合度达到80-90％的脂肪干细胞进行传代，弃掉原培养液，PBS清洗3遍，细胞消化液进行消化...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚玲玲，杨苗，孟得龙，宋丹，刘得娟，
申请(专利权)人：北京焕生汇生物技术研究院，
类型：发明
国别省市：北京,11