一种用于培养脂肪干细胞的试剂盒及培养方法技术

本发明专利技术提供一种用于培养脂肪干细胞的试剂盒，包括试剂盒本体、若干试剂瓶和若干冰袋，若干所述试剂瓶内分别盛装有组织保存液、基础培养基、培养基添加剂、生长因子Ⅰ、生长因子Ⅱ、组织分解液、细胞消化液、洗涤液和冻存液。本发明专利技术提供的试剂盒可以从脂肪组织中分离脂肪干细胞，并培养和保存脂肪干细胞，解决了脂肪干细胞分离数量少且纯度低、培养存活率低、培养效率不高、冻存复活率不理想等问题，使脂肪干细胞在理想营养平衡状态下进行多代扩增而不发生分化，为利用脂肪干细胞进行进一步实验研究提供了丰富的来源，非常适用于培养脂肪干细胞。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞
，尤其涉及一种用于培养脂肪干细胞的试剂盒及培养方法。
技术介绍
干细胞是一类具有自我复制和多向分化能力的细胞，可以不断进行自我更新，并在特定条件下转变成为一种或多种构成人体组织或器官的细胞。近年来，干细胞技术被广泛用于多种疾病的临床试验及治疗中，并且表现出良好的应用前景，逐渐成为近年来新的医学研究热点之一。脂肪组织中存在一类具有多向分化潜力的细胞，即脂肪干细胞，其具有较高的分化潜能，可向多个方向进行分化，可以分化为骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、内皮和心肌等组织或器官的细胞，医学价值很高。脂肪干细胞能够在体外稳定增殖且衰亡率低，具有取材容易、不限年龄及时间、少量组织即可获取大量细胞、适宜大规模培养、对机体损伤小等优点，而且脂肪来源广泛，体内储备量大，适宜自体移植，具有广阔的临床应用前景。为满足医学研究的需求，大量培养脂肪干细胞成为重要的研究课题，而试验人员选择的用于分离、培养、保存脂肪干细胞的试剂和方法不够妥当，往往造成了培养的脂肪干细胞的数量和质量无法达到试验的要求，浪费了人力和其他资源，因此研究一种专门用于稳定的大量扩增培养脂肪干细胞的试剂盒具有重要意义。现有技术中也公开了一些用于培养脂肪干细胞的试剂盒，例如CN 104928238A公布了一种用于制备脂肪间充质干细胞的试剂盒，包括脂肪保存液、脂肪洗涤液、脂肪分解液、细胞洗涤液、细胞培养液、细胞消化液、细胞冻存液，但此试剂盒培养脂肪干细胞的效果不够理想，存在试剂安全性、稳定性不高，细胞存活率和增殖率低等问题。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种用于培养脂肪干细胞的试剂盒，包括试剂盒本体、若干试剂瓶和若干冰袋，所述试剂盒本体包括顶端开口的盒体、与所述盒体铰接的盒盖和设置在盒体内的插托，所述插托与所述盒体的底板平行，其上设有若干个用于放置所述试剂瓶的插孔，所述插托下方设有与所述盒体的底板平行的镂空隔板，所述镂空隔板与其下方的所述盒体形成第一空腔，所述第一空腔的侧壁上设有第一开口和与所述第一开口匹配的第一盖板，所述盒盖由盒盖上板、与所述盒盖上板平行的盒盖下板、连接所述盒盖上板和所述盒盖下板的盒盖侧壁组成，所述盒盖下板为镂空结构，所述盒盖上板、所述盒盖下板和所述盒盖侧壁形成第二空腔，所述盒盖侧壁上设有第二开口和与所述第二开口匹配的第二盖板，若干所述冰袋分别放置在第一空腔和第二空腔内,若干所述试剂瓶内分别盛装有组织保存液、基础培养基、培养基添加剂、生长因子Ⅰ、生长因子Ⅱ、组织分解液、细胞消化液、洗涤液和冻存液。进一步的，所述盒体内设有试剂瓶固定装置，所述试剂瓶固定装置包括固定帽、对称设于固定帽两侧的第一固定带和所述第二固定带，所述第一固定带的两端分别与所述固定帽的边沿和所述插托固定连接，所述第二固定带的一端与所述固定帽的边沿固定连接，另一端通过连接结构与所述插托连接。进一步的，所述试剂盒上还设有温度监控装置，所述温度监控装置包括设于试剂盒内的测温仪、与所述测温仪连接的温度控制器以及与所述温度控制器连接的报警装置。进一步的，所述试剂盒外表面设有防撞层。进一步的，所述试剂盒外表面与防撞层之间设有保温层。进一步的，所述盒体与盒盖的连接处设有固定装置，防止运输移动过程中盒盖打开导致试剂瓶滑落摔碎。进一步的，所述基础培养基为α-MEM培养基溶液，所述α-MEM培养基溶液由α-MEM干粉培养基用注射用水溶解而成，每L所述注射用水溶解所述α-MEM干粉培养基30-50g。进一步的，所述生长因子Ⅰ为bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)溶液，所述bFGF溶液由bFGF冻干粉用注射用水溶解而成，每L所述注射用水溶解所述bFGF冻干粉8-12μg。进一步的，所述生长因子Ⅱ为EGF(表皮细胞生长因子)溶液，所述EGF溶液由EGF冻干粉用注射用水溶解而成，每L所述注射用水溶解所述EGF冻干粉8-12μg。进一步的，所述组织分解液为含1％胶原酶I型的PBS缓冲液或基础培养基。进一步的，所述细胞消化液为含0.25％胰酶和0.02％EDTA(乙二胺四乙酸)的PBS缓冲液。进一步的，所述洗涤液为PBS缓冲液。上述PBS缓冲液均为含0.05％吐温-20，pH值为7.4的磷酸盐缓冲液。进一步的，所述组织保存液主要是将α-MEM干粉培养基、青霉素、链霉素、羟甲基纤维素钠、次磷酸钠用注射用水溶解而成，每L所述注射用水分别溶解所述α-MEM干粉培养基30-50g、所述青霉素1×105-2×105U、所属链霉素0.1-0.2g、所述羟甲基纤维素钠8-12g、所述次磷酸钠2-5g。上述组织保存液可以有效保持脂肪干细胞活性、提高脂肪干细胞存活率。进一步的，所述组织保存液中还含有琥珀酸钠和乳糖醇，每L所述注射用水分别溶解所述琥珀酸钠3-8g、所述乳糖醇0.5-1.5g。在组织保存液中添加琥珀酸钠和乳糖醇可以有效提高组织保存液的稳定性，避免组织保存液产生沉淀、分层和变色等问题，减少其中一个成分，或变化其中一个成分，组织保存液的稳定性会减弱。进一步的，所述组织保存液中还含有水杨酸钠和淀粉甘醇酸钠，每L所述注射用水分别溶解所述水杨酸钠2-5g、所述淀粉甘醇酸钠1-3g。在组织保存液中添加水杨酸钠和淀粉甘醇酸钠可以有效提高组织保存液防止细菌、真菌和病毒感染的能力，减少其中一个成分，或变化其中一个成分，都会导致组织保存液抗细菌、真菌和病毒感染的能力减弱。进一步的，所述培养基添加剂包括如下重量份的各成分：胎牛血清蛋白15-20 乙基甲基纤维素8-12木糖醇5-8 甲酸钠1-3。采用上述培养基添加剂与基础培养基和生长因子混合均匀配置的全培养基培养脂肪干细胞的增殖效率高、增殖效果好。进一步的，所述培养基添加剂还包括如下重量份的各成分：肉桂醇3-8 磷酸酯1-3 抗坏血酸钠1-3。在培养基添加剂中增加肉桂醇、磷酸酯和抗坏血酸钠可以有效提高配置的全培养基防止细菌、真菌和病毒感染的能力。进一步的，所述培养基添加剂还包括如下重量份的各成分：甘氨酸钠3-8 D-木糖2-5。在培养基添加剂中增加甘氨酸钠和D-木糖可以有效提高配置的全培养基的稳定性，避免全培养基出现沉淀、分层和变色等问题。进一步的，所述冻存液主要是将α-MEM干粉培养基、人血白蛋白、二甲基亚砜、甘露聚糖、麦芽糊精、生物素用注射用水溶解而成，每L所述注射用水分别溶解所述α-MEM干粉培养基30-50g、所述人血白蛋白40-60g、所述二甲基亚砜3-8g、所述甘露聚糖2-5g、所述麦芽糊精1-3g、所述生物素0.5-1.5g。上述冻存液的冻存性能较好，脂肪干细胞复苏后存活率较高，而且更利于脂肪干细胞冻存前后细胞形态的维持和稳定。进一步的，所述冻存液中还含有山梨酸钾和烟酰胺，每L所述注射用水分别溶解所述山梨酸钾1-3g、所述烟酰胺0.5-1.5g。在冻存液中加入山梨酸钾和烟酰胺可以降低冻存过程中对细胞造成的伤害，进一步提高冻存液的冻存性能。本专利技术还提供一种培养脂肪干细胞的方法，包括如下步骤：(1)无菌收集脂肪组织，放入盛装有所述组织保存液的所述试剂瓶中并密封，将所述试剂盒运输至实验室；(2)将所述基础培养基、所述培养基添加剂、所述生长因子Ⅰ和所述生长因子Ⅱ按照重量份数比为1：0.05：1：1的比例混合均匀本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于培养脂肪干细胞的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括试剂盒本体、若干试剂瓶(1)和若干冰袋，所述试剂盒本体包括顶端开口的盒体(2)、与所述盒体(2)铰接的盒盖(3)和设置在盒体(2)内的插托(4)，所述插托(4)与所述盒体(2)的底板平行，其上设有若干个用于放置所述试剂瓶(1)的插孔，所述插托(4)下方设有与所述盒体(2)的底板平行的镂空隔板，所述镂空隔板与其下方的所述盒体(2)形成第一空腔，所述第一空腔的侧壁上设有第一开口(5)和与所述第一开口(5)匹配的第一盖板(6)，所述盒盖(3)由盒盖上板、与所述盒盖上板平行的盒盖下板(7)、连接所述盒盖上板和所述盒盖下板(7)的盒盖侧壁(8)组成，所述盒盖下板(7)为镂空结构，所述盒盖上板、所述盒盖下板(7)和所述盒盖侧壁(8)形成第二空腔，所述盒盖侧壁(8)上设有第二开口(9)和与所述第二开口(9)匹配的第二盖板(10)，若干所述冰袋分别放置在第一空腔和第二空腔内,若干所述试剂瓶(1)内分别盛装有组织保存液、基础培养基、培养基添加剂、生长因子Ⅰ、生长因子Ⅱ、组织分解液、细胞消化液、洗涤液和冻存液。

【技术特征摘要】
1.一种用于培养脂肪干细胞的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括试剂盒本体、若干试剂瓶(1)和若干冰袋，所述试剂盒本体包括顶端开口的盒体(2)、与所述盒体(2)铰接的盒盖(3)和设置在盒体(2)内的插托(4)，所述插托(4)与所述盒体(2)的底板平行，其上设有若干个用于放置所述试剂瓶(1)的插孔，所述插托(4)下方设有与所述盒体(2)的底板平行的镂空隔板，所述镂空隔板与其下方的所述盒体(2)形成第一空腔，所述第一空腔的侧壁上设有第一开口(5)和与所述第一开口(5)匹配的第一盖板(6)，所述盒盖(3)由盒盖上板、与所述盒盖上板平行的盒盖下板(7)、连接所述盒盖上板和所述盒盖下板(7)的盒盖侧壁(8)组成，所述盒盖下板(7)为镂空结构，所述盒盖上板、所述盒盖下板(7)和所述盒盖侧壁(8)形成第二空腔，所述盒盖侧壁(8)上设有第二开口(9)和与所述第二开口(9)匹配的第二盖板(10)，若干所述冰袋分别放置在第一空腔和第二空腔内,若干所述试剂瓶(1)内分别盛装有组织保存液、基础培养基、培养基添加剂、生长因子Ⅰ、生长因子Ⅱ、组织分解液、细胞消化液、洗涤液和冻存液。2.根据权利要求1所述的用于培养脂肪干细胞的试剂盒，其特征在于：所述组织保存液主要是将α-MEM干粉培养基、青霉素、链霉素、羟甲基纤维素钠、次磷酸钠用注射用水溶解而成，每L所述注射用水分别溶解所述α-MEM干粉培养基30-50g、所述青霉素1×105-2×105U、所属链霉素0.1-0.2g、所述羟甲基纤维素钠8-12g、所述次磷酸钠2-5g。3.根据权利要求2所述的用于培养脂肪干细胞的试剂盒，其特征在于：所述组织保存液中还含有琥珀酸钠和乳糖醇，每L所述注射用水分别溶解所述琥珀酸钠3-8g、所述乳糖醇0.5-1.5g。4.根据权利要求2所述的用于培养脂肪干细胞的试剂盒，其特征在于：所述组织保存液中还含有水杨酸钠和淀粉甘醇酸钠，每L所述注射用水分别溶解所述水杨酸钠2-5g、所述淀粉甘醇酸钠1-3g。5.根据权利要求1所述的用于培养脂肪干细胞的试剂盒，其特征在于：所述培养基添加剂包括如下重量份的各成分：胎牛血清蛋白15-20 乙基甲基纤维素8-12木糖醇5-8 甲酸钠1-3。6.根据权利要求5所述的用于培养脂肪干细胞的试剂盒，其特征在于：所述培养基添加剂还包括如下重量份的各成分：肉桂醇3-8 磷酸酯1-3 抗坏血酸钠1-3。7.根据权利要求5所述的用于培养脂肪干细胞的试剂盒，其特征在于：所述培养基添加剂还包括如下重量份的各成分：甘氨酸钠3-8 D-木糖2-5。8.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：张晓南，吴芳春，陈虎，侍晓云，张斌，
申请(专利权)人：北京昱龙盛世生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11