一种肌肉卫星细胞的分离培养方法技术

本发明专利技术公开了一种肌肉卫星细胞的分离培养方法，包括以下步骤：无菌条件下剪去腿部皮肤，取腿部肌肉，浸入缓冲液中；去除脂肪、骨骼及肌腱，用缓冲液反复清洗肌肉组织；在无菌条件下将肌肉组织剪成小块，用胶原酶消化，使细胞分离；加入等体积的培养基，吹打后过滤，收集滤液，离心，弃上清，用培养基重悬细胞；将细胞悬液加入到培养皿中，细胞培养箱中培养；差速贴壁法进行细胞纯化培养；待细胞汇合程度达到80％时，用胰蛋白酶消化传代培养。细胞汇合程度达到90％以上时，进行细胞冻存。本申请分离培养方法培养的鸡肌肉卫星细胞，活力更高，数量更多、更易贴壁，可传代性更强，分化率更高，且培养方法，方法简单，方便操作，省时省力。

【技术实现步骤摘要】
一种肌肉卫星细胞的分离培养方法
本专利技术涉及生物
，特别是一种肌肉卫星细胞的分离培养方法。
技术介绍
胚胎和成人体内都存在肌肉干细胞，而肌肉中存在的肌肉卫星细胞非常多。随着组织工程技术的发展，应用肌组织工程技术，以手术方法修复动力性瘫痪，以其特有的优点开创了一个崭新的研究前景。尤其是肌肉干细胞因直接参与分化骨骼肌而备受世人关注。尽管发现肌肉卫星细胞的存在已经有50多年的历史了，并在体外进行了一些尝试，但是，肌肉卫星细胞的分离与鉴定的方法仍然具有不确定性。肌卫星细胞是小的单核梭形细胞，是源于胚胎层的干细胞。是骨骼肌中位于肌细胞膜和基膜之间的具有增殖分化潜力的肌源性细胞。它们在一般情况下是处于静息状态的。在肌肉正常发育过程中，附着于肌肉纤维的卫星细胞跨越肌纤维的基底膜，形成并行的肌纤维并参与附近肌细胞的增殖。在肌肉损伤或再生过程中，卫星细胞被激活，具有增殖分化、融合成肌管、再形成肌细胞的能力，并替代损伤的肌纤维。但至今人们对肌肉干细胞的理解尚不统一。但目前对肌肉卫星细胞的分离培养尚不成熟。因此，探索一种能提高肌肉卫星本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肌肉卫星细胞的分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤(1)、无菌条件下剪去腿部皮肤，取腿部肌肉，浸入缓冲液中；/n步骤(2)、去除脂肪、骨骼及肌腱，用缓冲液反复清洗肌肉组织；/n步骤(3)、在无菌条件下将肌肉组织剪成小块，用胶原酶消化，使细胞分离；/n步骤(4)、加入等体积的培养基，吹打后过滤，收集滤液，离心，弃上清，用培养基重悬细胞；将细胞悬液加入到培养皿中，细胞培养箱中培养；/n步骤(5)、差速贴壁法进行细胞纯化培养；/n步骤(6)、待细胞汇合程度达到80％时，用胰蛋白酶消化传代培养。/n步骤(7)、细胞汇合程度达到90％以上时，进行细胞冻存；/n所述步骤(1)-步骤(7...

【技术特征摘要】
20200814 CN 20201081871151.一种肌肉卫星细胞的分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤(1)、无菌条件下剪去腿部皮肤，取腿部肌肉，浸入缓冲液中；
步骤(2)、去除脂肪、骨骼及肌腱，用缓冲液反复清洗肌肉组织；
步骤(3)、在无菌条件下将肌肉组织剪成小块，用胶原酶消化，使细胞分离；
步骤(4)、加入等体积的培养基，吹打后过滤，收集滤液，离心，弃上清，用培养基重悬细胞；将细胞悬液加入到培养皿中，细胞培养箱中培养；
步骤(5)、差速贴壁法进行细胞纯化培养；
步骤(6)、待细胞汇合程度达到80％时，用胰蛋白酶消化传代培养。
步骤(7)、细胞汇合程度达到90％以上时，进行细胞冻存；
所述步骤(1)-步骤(7)按照顺序依次进行。


2.根据权利要求1所述的一种肌肉卫星细胞的分离培养方法，其特征在于，步骤(1)中腿部肌肉为0.8-1.4mm3大小，缓冲液为PBS缓冲液，用量为20ml。


3.根据权利要求1所述的一种肌肉卫星细胞的分离培养方法，其特征在于，(3)中剪碎的肌肉组织，用含2.0-3.0mmol/L氯化钙的0.8-1.2％胶原酶消化，35-38℃，45min-90min，每15min吹打一次，使细胞分离。


4.根据权利要求1所述的一种肌肉卫星细胞的分离培养方法，其特征在于，步骤(4)中培养基为DMEM/F12培养基，含有5-15％FBS。


5.根据权利要求1所述的一种肌肉卫星细胞的分离培养方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：张晓南，吴芳春，谷涌泉，侍晓云，张斌，
申请(专利权)人：北京昱龙盛世生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11