一种脂肪间充质干细胞组合物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及医学领域，公开了一种脂肪间充质干细胞组合物及其应用。本发明专利技术所述组合物包括脂肪间充质干细胞、透明质酸或其药用盐、生理盐水、人血白蛋白、胰岛素生长因子。本发明专利技术组合物选择脂肪间充质干细胞、透明质酸或其药用盐、生理盐水、人血白蛋白、胰岛素生长因子作为治疗骨关节炎的成分，组合物组成简单，脂肪间充质干细胞为自体细胞，取材不受限制，并且在治疗复发率上明显低于其他干细胞制剂，具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医学领域，具体的说是涉及一种脂肪间充质干细胞组合物及其应用。
技术介绍
骨性关节炎是一种以关节软骨的变性、破坏及骨质增生为特征的慢性关节病，发病率高，在老年人口中十分常见，60岁以上的人群中患病率可达50％，75岁以上的人群中则达80％。骨关节炎患者的关节疼痛常使患者难以忍受，患者发病后致残率高。骨关节炎常发生软骨缺损，但软骨的自身修复能力有限，通常可以将软骨修复作为骨关节炎治疗的最重要评价指标。现有的治疗骨关节炎的药物能在一定程度上延缓病程、改善患者症状，缓解患者疼痛，但不能逆转病理过程，不能根治骨关节炎，且大部分药物副作用明显。而外科手术治疗主要通过关节镜(窥镜)、开放手术或人工关节置换，虽然能暂时缓解疼痛，但长远效果(10年左右)并不理想。干细胞等细胞治疗法是目前最有希望彻底解决骨关节炎治疗的新方法。近十年来，干细胞移植治疗骨关节炎已有大量研究报道。干细胞注入骨关节炎关节后，能发挥免疫调节作用，炎症反应调节作用，减少疼痛；分泌抗凋亡因子和抗纤维化因子抑制病情进展；分泌TGF-β、BMP-4等因子，促进内源性干细胞软骨修复；还能分化为软骨细胞帮助修复软骨。中国专利CN105796600A公开了使用干细胞治疗骨关节炎的方法和组合物，该组合物包括间充质干细胞、透明质酸或其药用盐、氯化钠和水，虽然其记载了冻存后细胞存活率较好的有益效果，但是采用该组合物治疗骨关节炎的效果却具有一定的缺陷，主要是治疗后复发率较高。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于一种脂肪间充质干细胞组合物及其应用，使得所述组合物对骨关节炎有显著的疗效，且治疗后复发率较低。为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种脂肪间充质干细胞组合物，包括脂肪间充质干细胞、透明质酸或其药用盐、生理盐水、人血白蛋白、胰岛素生长因子。针对现有间充质干细胞制剂在治疗骨关节炎方面存在复发率较高的问题，本专利技术选用脂肪间充质干细胞、透明质酸或其药用盐、生理盐水、人血白蛋白、胰岛素生长因子组成新型组合物，对骨关节炎具有较为显著的疗效并且复发率较低。其中，作为优选，脂肪间充质干细胞浓度为(1-2)×106个/mL，透明质酸或其药用盐体积百分比为5-10％，人血白蛋白体积百分比10-15％，胰岛素生长因子体积百分比为5-10％，其余为生理盐水。在本专利技术具体实施过程中，所述组合物中各成分组成可任意选择如下：(1)脂肪间充质干细胞浓度为1.5×106个/mL，透明质酸或其药用盐体积百分比为8％，人血白蛋白体积百分比10％，胰岛素生长因子体积百分比为8％，其余为生理盐水；(2)脂肪间充质干细胞浓度为2×106个/mL，透明质酸或其药用盐体积百分比为5％，人血白蛋白体积百分比13％，胰岛素生长因子体积百分比为10％，其余为生理盐水；(3)脂肪间充质干细胞浓度为1×106个/mL，透明质酸或其药用盐体积百分比为10％，人血白蛋白体积百分比15％，胰岛素生长因子体积百分比为5％，其余为生理盐水；本专利技术所述脂肪间充质干细胞的分离培养可按照常规方法进行，在具体制备时可采用患者自体脂肪进行分离培养，本专利技术提供了如下方法：抽取30ml新鲜脂肪，将脂肪转移到无菌储液瓶中用等体积PBS剧烈摇晃，静止分层弃去下层液体，重复一次；将清洗好的脂肪转移到50ml离心管中补加加PBS至体积50ml，用1500rpm离心5分钟，离心后用移液管将上层脂肪油和下层液体弃置，再加入等体积的I型胶原酶，盖上盖子封口；转移到恒温震荡仪中以37度、200转每分进行消化，大概30-50分钟，至脂肪完全消化，再转移到离心机中以1500rpm离心5分钟；用移液管吸掉上层脂肪油，倒弃剩余液体，再用40mlPBS重悬细胞沉淀，继续以1500rpm离心5分钟；倒弃液体，用Lonza无血清完全培养基重悬，分到3个10cm的培养皿中，每个皿10ml，再在每个皿中加入EGF调整后EGF为10ng/ml，放置37度、5％二氧化碳、湿度95％的二氧化碳培养箱中培养；培养2天后，给细胞换液，每天观察细胞，待细胞贴壁汇合度达到80％给细胞传代。作为优选，本专利技术所述脂肪间充质干细胞选择传代5代以内的细胞。作为优选，所述人血白蛋白的浓度为20％。本专利技术组合物在治疗兔骨关节炎的实验中，破坏的软骨表层恢复完好，软骨正常未发生空泡样变性，成熟软骨细胞柱状线恢复；软骨含量、TNF-α含量和Mankin评分结果与正常组无显著差异，表明本专利技术组合物对骨关节炎具有显著的疗效。同时以本专利技术所述组合物为试验对象，以现有专利CN105796600A实施例8的脐带间充质干细胞组合物为第一组对照，同时在其基础上用脂肪间充质干细胞替换脐带间充质干细胞设置第二组对照，分别治疗按临床标准划分为相同程度的骨关节炎疾病志愿者，结果显示，采用本专利技术组合物治疗的志愿者，复发率只有36％，而另外两组对照组的复发率均为68％，此外其中一组还有1例无效。基于上述优异的技术效果，本专利技术提供了所述组合物在制备治疗骨关节炎产品中的应用。由以上技术方案可知，本专利技术组合物选择脂肪间充质干细胞、透明质酸或其药用盐、生理盐水、人血白蛋白、胰岛素生长因子作为治疗骨关节炎的成分，组合物组成简单，脂肪间充质干细胞为自体细胞，取材不受限制，并且在治疗复发率上明显低于其他干细胞制剂，具有广阔的应用前景。附图说明图1所示为正常兔关节石蜡切片图；图2所示为骨关节炎兔模型关节石蜡切片图；图3所示为经过本专利技术组合物治疗后的骨关节炎兔模型关节石蜡切片图。具体实施方式本专利技术实施例公开了一种脂肪间充质干细胞组合物及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术内。本专利技术产品和应用已通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的产品和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。本专利技术所述组合物将各组分按照要求的比例轻微振荡混匀即可获得所述组合物。在本专利技术兔骨关节炎的实验中，脂肪来源为模型兔自体脂肪，同样，在骨关节炎志愿者临床治疗实验中，脂肪来源为志愿者自体脂肪，所用脂肪间充质干细胞均经过流式细胞仪检测细胞表面标志物符合要求，实施方式中采用传代至第4代的细胞。以下就本专利技术所提供的一种脂肪间充质干细胞组合物及其应用做进一步说明。实施例1：脂肪间充质干细胞的分离培养抽取30ml新鲜脂肪，将脂肪转移到无菌储液瓶中用等体积PBS剧烈摇晃，静止分层弃去下层液体，重复一次；将清洗好的脂肪转移到50ml离心管中补加加PBS至体积50ml，用1500rpm离心5分钟，离心后用移液管将上层脂肪油和下层液体弃置，再加入等体积的I型胶原酶，盖上盖子封口；转移到恒温震荡仪中以37度、200转每分进行消化，大概30-50分钟，至脂肪完全消化，再转移到离心机中以1500rpm离心5分钟；用移液管吸掉上层脂肪油，倒弃剩余液体，再用40mlPBS重悬细胞沉淀，继续以1500rpm离心5分钟；倒弃液体，用Lonza无血清完全培养基重悬，分到3个10cm的培养皿中，每个皿10ml，再在每个皿中加入EGF调整后EGF为10ng/ml，放置37度、5％二氧化碳、湿度95本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脂肪间充质干细胞组合物，其特征在于，包括脂肪间充质干细胞、透明质酸或其药用盐、生理盐水、人血白蛋白、胰岛素生长因子。

【技术特征摘要】
1.一种脂肪间充质干细胞组合物，其特征在于，包括脂肪间充质干细胞、透明质酸或其药用盐、生理盐水、人血白蛋白、胰岛素生长因子。2.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，脂肪间充质干细胞浓度为.(1-2)×106个/mL，透明质酸或其药用盐体积百分比为5-10％，人血白蛋白体积百分比10-15％，胰岛素生长因子体积百分比为5-10％，其余为生理盐水。3.根据权利要求2所述组合物，其特征在于，脂肪...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛啸虎，陈海佳，王一飞，陈育广，王小燕，
申请(专利权)人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44