The invention relates to a microbial culture technology field, especially relates to a culture medium and a preparation method of adipose derived stem cells, the cultured adipose derived stem cells, including basal medium and additive, the additive comprises the following substances: peptone, sodium chloride, glucose, lactose, phosphorus source, pig bile salt, mannitol, sodium pyruvate, amino acids, vitamins, antibiotics, metal salt, plant polysaccharides, distilled water. The culture medium containing plant polysaccharides, not only can inhibit the removal of adipose derived stem cells other than other cell growth, but also can promote fat stem cell reproduction, help to improve the cell concentration of fatty dry medium, shorten the culture time; through synergies between the components, adequate nutrition and good environment provide the required cell growth and proliferation, can promote cell growth, but also can promote the synthesis of albumin, cell viability long time.
【技术实现步骤摘要】
一种用于培养脂肪干细胞的培养基及其制备方法
本专利技术涉及微生物培养
,尤其涉及一种用于培养脂肪干细胞的培养基及其制备方法。
技术介绍
脂肪干细胞(Adipose-derivedstemcells,ADSCs)是近年来从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞,具有可迅速扩增、不易衰老等一般干细胞的特点。人脂肪干细胞即人体脂肪间充质干细胞是目前广泛应用于组织工程及再生医学领域的一种成体干细胞与骨髓间充质干细胞一样具有多向分化潜能。ADSCs呈成纤维细胞样生长,胞浆和核仁丰富,呈平行或漩涡样排列。细胞周期分析显示G0/G1期的细胞占69%,S期占24%,G2/M期占8%。在胎牛血清的存在条件下传代培养2-3天细胞增殖1倍。多次传代(10-20代)后,细胞增殖速度无明显减慢,在传代6次后细胞群体中出现衰老细胞,第15代细胞群体中衰老细胞约占15%。目前常用的脂肪干细胞培养方法获得脂肪干细胞数有限,脂肪干细胞增殖生长缓慢,经过传代培养3代需要30天以上,得到的脂肪干细胞数量低于108。而且脂肪干细胞传代扩增不能超过5代,否则脂肪干细胞易出现分化和凋亡,细胞增殖和修复的功能明显也下降,具有干细胞特征的细胞显著减少,不能保证脂肪干细胞的活性。所以为保证实验的连续性,必须随时提供大量的实验或组织工程用的种子细胞。因此,对于细胞培养基的需求非常强烈。在现有技术中,脂肪干细胞在体外连续培养后,容易老化,核型发生改变、表面抗原发生变化、且多向分化能力仅局限于向成骨或成骨和成脂肪细胞方向分化,且培养方法复杂,提取的干细胞数量少,纯度不高,继代增殖缓慢,更要紧的是 ...
【技术保护点】
一种用于培养脂肪干细胞的培养基,其特征在于,包括基础培养基和添加剂,以质量份数计,所述添加剂包括以下物质:蛋白胨2~16份,氯化钠1~9份,葡萄糖0.1~5份,乳糖0.2~6份、磷源0.8~3.8份,猪胆盐0.02~0.12份、甘露醇0.2~2.6份,丙酮酸钠0.5~2.6份,氨基酸0.2~2.8份,维生素0.2~3.6份,抗生素0.1~2份,金属盐0.02~0.58份,植物多糖0.01~0.5份,蒸馏水1000份。
【技术特征摘要】
1.一种用于培养脂肪干细胞的培养基,其特征在于,包括基础培养基和添加剂,以质量份数计,所述添加剂包括以下物质:蛋白胨2~16份,氯化钠1~9份,葡萄糖0.1~5份,乳糖0.2~6份、磷源0.8~3.8份,猪胆盐0.02~0.12份、甘露醇0.2~2.6份,丙酮酸钠0.5~2.6份,氨基酸0.2~2.8份,维生素0.2~3.6份,抗生素0.1~2份,金属盐0.02~0.58份,植物多糖0.01~0.5份,蒸馏水1000份。2.根据权利要求1所述的用于培养脂肪干细胞的培养基,其特征在于,以质量份数计,所述添加剂包括以下物质:蛋白胨5~12份,氯化钠2~6份,葡萄糖1~3份,乳糖0.8~5.6份、磷源1.2~2.8份,猪胆盐0.05~0.1份、甘露醇0.3~2.1份,丙酮酸钠0.8~2.0份,氨基酸0.5~2.1份,维生素0.5~2.3份,抗生素0.5~1.2份,金属盐0.12~0.36份,植物多糖0.23~0.44份,蒸馏水1000份。3.根据权利要求2所述的用于培养脂肪干细胞的培养基,其特征在于,以质量份数计,所述添加剂包括以下物质:蛋白胨7份,氯化钠3份,葡萄糖2份,乳糖2.6份、磷源1.8份,猪胆盐0.08份、甘露醇1.6份,丙酮酸钠1.8份,氨基酸2.3份,维生素1.9份,抗生素1.2份,金属盐0.43份,植物多糖0.27份,蒸馏水1000份。4.根据权利要求1~3任意一项所述的用于培养脂肪干细胞的培养基,其特征在于,所述蛋白胨为大豆蛋白胨、血...
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