用于预防宫腔粘连及子宫内膜损伤修复的细胞制剂及其制备方法技术

本发明专利技术涉及了一种可用于预防宫腔粘连及修复严重子宫内膜损伤的细胞制剂及其制备方法。该制剂由脐带或胎盘间充质干细胞和人重组基质细胞衍生因子‑1α（recombinant human stromal cell‑derived factor‑1α，rhSDF‑1α）以及用于承载所述脐带或胎盘间充质干细胞及rhSDF‑1α并具有缓释和抗炎作用的透明质酸钠凝胶组成。该制剂经注射到宫腔内，可达到促进干细胞及子宫组织自身细胞向损伤部位迁移，减轻内膜组织纤维化，促进子宫内膜再生修复以及物理阻隔预防子宫粘连等疗效。本发明专利技术可以解决干细胞单一应用难于局部定位以及传统子宫粘连及子宫内膜损伤修复方法无法实现严重子宫内膜损伤修复或作用时间短、局部疗效差等问题。本发明专利技术所提供的制剂不仅制备方法简单、易于实施，且更安全有效，可双重提高干细胞在损伤部位的浓度，延长干细胞的作用时间，提高局部疗效。

Cell preparation for preventing intrauterine adhesions and repairing endometrial injuries and preparation method thereof

The invention relates to a cell preparation for preventing intrauterine adhesions and repairing severe endometrial injuries and a preparation method thereof. The preparation consists of the umbilical cord or placenta derived mesenchymal stem cells and recombinant human stromal cell derived factor 1 alpha (recombinant human stromal cell derived factor 1 alpha rhSDF alpha 1,) as well as for sodium hyaluronate gel carrying the umbilical cord or placenta derived mesenchymal stem cells and rhSDF 1 alpha and sustained-release and anti-inflammatory effects. The formulation to the uterine cavity after injection, can promote stem cell and its uterine tissue cell migration to the site of injury, relieve the intimal fibrosis, promote the efficacy of endometrial regeneration and physical barrier preventing uterine adhesion. The invention can solve the single application of stem cells to local positioning as well as traditional uterine adhesions and endometrial repair methods cannot achieve the serious problem of endometrial repair or short action time, the local bad curative effect. The preparation provided by the invention not only has the advantages of simple preparation method, easy implementation, and is safer and more effective, but can double raise the concentration of the stem cell in the injured part, prolong the action time of the stem cell and improve the local curative effect.

【技术实现步骤摘要】
用于预防宫腔粘连及子宫内膜损伤修复的细胞制剂及其制备方法
本专利技术属于妇产科学领域，其涉及用于预防宫腔粘连及修复子宫内膜损伤的细胞制剂及其制备方法。
技术介绍
宫腔粘连(intrauterineadhesions，IUA)又称Asherman综合征，是指由创伤、感染等因素造成的子宫内膜基底层细胞的损伤导致子宫腔内粘连组织形成，引起宫腔变形甚至宫腔完全消失，使患者出现月经异常(闭经或月经量减少等)、不孕、流产、早产及周期性腹痛等异常情况。近年来由于频繁的宫腔操作及宫腔镜手术的普及，子宫粘连的发病率和检出率逐渐上升，而且发病年龄呈年轻化趋势，已成为女性继发不孕的第二大病因。尽管临床医生不断寻求新的治疗方案，子宫粘连的治愈率和妊娠率仍无明显改善，且复发率较高(轻度IUA患者治疗后复发率为33.3％，重度IUA患者治疗后复发率更是高达66.7％)，由此引起的不孕以及反复流产、早产、前置胎盘、胎盘粘连或植入等产科并发症严重威胁着女性的生殖健康。目前临床上针对IUA的治疗主要是采用宫腔镜下宫腔粘连分离术、术后放置宫内节育器或防粘连材料(主要为透明质酸钠凝胶)以及术后应用雌孕激素治疗，但是以上方法存在着治疗周期长、治愈率低下、粘连易复发、妊娠率低、大剂量雌激素应用会增加患者乳腺和子宫内膜肿瘤风险等问题。此外，对于严重的子宫内膜损伤，该治疗方法并不能解决内膜疤痕问题，且无法实现子宫内膜功能性修复及生育功能的恢复。研究报道采用人羊膜植入治疗IUA可促进子宫内膜生长，抑制纤维化瘢痕的形成，可同样对于重度子宫内膜损伤患者来说，该方法也无法实现子宫内膜功能性修复。子宫腔灌注粒细胞集落刺激因子可使部分内膜薄患者内膜厚度增加，但该方法存在作用时间短，局部疗效差，且无法促进疤痕内膜生长等缺陷。骨髓间充质干细胞治疗宫腔粘连，可以促进子宫内膜组织再生，实现子宫内膜功能性修复，但是单一应用骨髓间充质干细胞存在难于局部定位以及修复不稳定、不彻底等问题。胶原支架复合骨髓或脐带间充质干细胞可以治疗严重子宫内膜损伤，促进疤痕子宫内膜修复，恢复患者生育功能，但是此法也存在的一定的局限性，比如细胞制剂制备方法复杂，细胞获取不方便，细胞获取或细胞制剂应用时对患者造成的痛苦大及创伤大等。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，针对现有技术中细胞获取不便、对患者造成的痛苦大、创伤大及采用单一干细胞存在难于局部定位、修复不稳定、不彻底以及传统宫腔粘连及子宫内膜损伤修复方法无法实现严重子宫内膜再生修复、子宫内膜功能性恢复或作用时间短，局部疗效差等问题，提供一种能够高效预防宫腔粘连及修复严重子宫内膜损伤的混合干细胞制剂及其制备方法。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：一种用于预防宫腔粘连及修复子宫内膜损伤的细胞制剂，所述的细胞制剂由间充质干细胞、人重组基质细胞衍生因子-1α(rhSDF-1α)和用于承载间充质干细胞及rhSDF-1α的透明质酸钠凝胶组成，所述的间充质干细胞为脐带间充质干细胞或胎盘间充质干细胞。所述的间充质干细胞的来源为人脐带或胎盘；所述的细胞制剂中，间充质干细胞的浓度为5×106～2×108个/mL；所述的间充质干细胞为原代-第10代的间充质干细胞；优选地，所述的间充质干细胞为原代-第3代的间充质干细胞。所述的细胞制剂中，rhSDF-1α的质量浓度为10-150ng/mL；所述的细胞制剂中，透明质酸钠凝胶的质量浓度为10-100mg/mL；所述的透明质酸钠凝胶的分子量为400000-1000000；所述的透明质酸钠凝胶为医用透明质酸钠凝胶。所述的细胞制剂为混悬液。所述的细胞制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)制备脐带或胎盘间充质干细胞；2)将所述脐带或胎盘间充质干细胞与rhSDF-1α和透明质酸钠凝胶按比例混合，制得。所述的脐带间充质干细胞的制备方法，包括如下步骤：1)取志愿、健康合格孕妇的足月剖宫产的新生儿脐带，充分洗涤去除脐动静脉中的血管；2)将脐带组织剪成块状，加入胶原酶消化液，37℃恒温摇床中振荡消化，完全培养基(DMEM)和10％胎牛血清(FBS)终止消化；3)50目筛网过滤人脐带组织消化后的产物；4)将收集的过滤液离心、分离获得单个核细胞；5)将离心后获得单个核细胞重悬于完全培养基(DMEM+10％FBS)，接种于培养皿中，在37℃，体积分数为5％CO2培养箱中培养；6)待细胞生长至80-90％融合度时，用胰酶消化进行传代培养，即得脐带间充质干细胞；必要时进行冻存待用。所述的胎盘间充质干细胞的制备方法，包括如下步骤：1)取志愿、健康合格孕妇的足月剖宫产胎儿的胎盘，PBS反复冲洗去除胎盘血；2)将胎盘组织剪成块状，加入胶原酶消化液，37℃恒温摇床中振荡消化，完全培养基(DMEM+10％FBS)终止消化；3)50目筛网过滤人胎盘组织消化后的产物；4)将收集的过滤液离心、分离获得单个核细胞；5)将离心后获得单个核细胞重悬于完全培养基(DMEM+10％FBS)，接种于培养皿中，在37℃，体积分数为5％CO2培养箱中培养；6)待细胞生长至80-90％融合度时，用胰酶消化进行传代培养，即得胎盘间充质干细胞；必要时进行冻存待用。本专利技术提供的用于预防宫腔粘连及子宫内膜损伤修复的细胞制剂中，所述细胞制剂中，透明质酸钠凝胶为医用透明质酸钠凝胶，是经CFDA批准可应用于临床妇科及骨科等手术中预防肌腱或宫腔粘连的明质酸钠凝胶。本专利技术提供的细胞制剂可局部注射，制剂经注射至病灶部位后，透明质酸钠凝胶可为间充质干细胞提供定植点，且具有缓释作用，联合rhSDF-1α的趋化作用，间充质干细胞制剂可在宫腔内或病灶区缓释、定植和生长，利用三者的协同作用可以发挥更好的疗效。本专利技术提供的细胞制剂可局部注射，局部注射部位可为子宫宫底、宫腔内、盘腔内及子宫肌瘤剥除术、剖腹产术以及输卵管复通等术后的吻合口部位。本专利技术提供的细胞制剂可用于修复由于各种原因造成的子宫内膜过度损伤，可用于子宫内膜功能性修复和解决内膜疤痕问题以及可用于人流手术、宫腹腔联合手术、剖宫产术及刮宫手术等术后宫腔粘连的预防。本专利技术具有如下技术优势：1)透明质酸钠凝胶是由N-乙酰葡萄糖醛酸反复交替而形成的一种高分子多糖体生物材料，具有高度的黏弹性、可塑性、可降解性以及良好的生物相容性，在预防粘连及修复软组织方面具有明显的作用，其作为间充质干细胞及rhSDF-1α延时缓释载体，不仅为干细胞提供定植点，同时可为干细胞的生长提供合适的三维空间结构及适宜的维环境，在一定程度上可促进干细胞的生长和分泌。此外，透明质酸钠凝胶还具有抗炎、防粘连作用，而且能抑制纤维细胞的渗出，术后宫腔内注入透明质酸钠凝胶，可以起到润滑作用及生物屏障功能，促进组织生理性修复，抑制疤痕形成，从而防止术后再次粘连。2)rhSDF-1α，其具有趋化作用，可通过其受体CXCR4发挥细胞募集作用。研究表明rhSDF-1α可以动员组织自身干细胞以及外源干细胞归巢，提高损伤部位干细胞浓度，延长干细胞的作用时间，从而达到促进受损子宫内膜再生修复，提高局部疗效。此外，rhSDF-1α可诱导损伤部位血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)表达促进新生血管生成，而新生的血管可使局部血液灌本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于预防宫腔粘连及修复子宫内膜损伤的细胞制剂，其特征在于，所述的细胞制剂由间充质干细胞、人重组基质细胞衍生因子‑1α(rhSDF‑1α)和用于承载间充质干细胞及rhSDF‑1α的透明质酸钠凝胶组成，所述的间充质干细胞为脐带间充质干细胞或胎盘间充质干细胞。

【技术特征摘要】
1.一种用于预防宫腔粘连及修复子宫内膜损伤的细胞制剂，其特征在于，所述的细胞制剂由间充质干细胞、人重组基质细胞衍生因子-1α(rhSDF-1α)和用于承载间充质干细胞及rhSDF-1α的透明质酸钠凝胶组成，所述的间充质干细胞为脐带间充质干细胞或胎盘间充质干细胞。2.根据权利要求1所述的细胞制剂，其特征在于：所述的间充质干细胞的来源为人脐带或胎盘；所述的细胞制剂中，间充质干细胞的浓度为5×106～2×108个/mL；所述的间充质干细胞为原代-第10代的间充质干细胞；所述的细胞制剂中，rhSDF-1α的质量浓度为10-150ng/mL；所述的细胞制剂中，透明质酸钠凝胶的质量浓度为10-100mg/mL；所述的透明质酸钠凝胶的分子量为400000-1000000；所述的透明质酸钠凝胶为医用透明质酸钠凝胶。3.根据权利要求2所述的细胞制剂，其特征在于，所述的间充质干细胞为原代-第3代的间充质干细胞。4.根据权利要求2所述的细胞制剂，其特征在于，所述的细胞制剂为混悬液。5.如权利要求1-4所述的细胞制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)制备脐带或胎盘间充质干细胞；2)将所述脐带或胎盘间充质干细胞与rhSDF-1α和透明质酸钠凝胶按比例混合，制得。6.根据权利要求5所述的细胞制剂的制备方法，其特征在于，所述的脐带间充质干细胞的制备方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐妍，陈蕾，郭世磊，魏翠，李红兰，王海亚，
申请(专利权)人：徐妍，
类型：发明
国别省市：江苏,32