具有改变的功能活性的Fc突变体制造技术

本发明专利技术涉及包含突变的Fc区并具有Fc区介导的功能活性的多肽，所述活性与亲本多肽的相比是改变的，所述多肽的特征在于所述Fc区包含至少2个突变的组合，所述组合选自：(i)选自326E、326T、352L、378V、378T、396L、397M、421T、334N、334R、307N和394P的一个突变；和(ii)选自226Y、227S、230S、231V、234P、243I、243L、246R、246E、247T、248E、253F、254F、255W、259A、261R、262A、263A、266M、267N、267G、274E、274R、276S、278H、379A、282A、283G、284L、286I、286Y、287T、288E、288R、290E、298N、302A、305A、307P、308A、308I、308G、309P、312G、315D、316D、319H、320T、320R、320M、322E、323I、325S、333G、339T、349S、325S、334N、334R、336T、340E、343S、345G、349H、350A、352S、359A、361H、362R、363I、366A、373D、375R、377T、378V、378T、380G、383R、385R、389S、389T、392R、393A、393I、394P、396L、397I、397M、398P、405V、405L、410R、412M、414R、421T、423L、423Y、423S、423P、428T、431V、431T、434K、434S、435R、436H、439R、440G、440N、442F、442P和447N的至少一个突变，编号是EU索引或Kabat等价体系的编号，条件是：突变(i)与突变(ii)不发生在相同氨基酸上。本发明专利技术还涉及所述多肽的用途，包含所述多肽的组合物和用于制备所述多肽的方法。

Fc mutants with altered functional activity

\u672c\u53d1\u660e\u6d89\u53ca\u5305\u542b\u7a81\u53d8\u7684Fc\u533a\u5e76\u5177\u6709Fc\u533a\u4ecb\u5bfc\u7684\u529f\u80fd\u6d3b\u6027\u7684\u591a\u80bd\uff0c\u6240\u8ff0\u6d3b\u6027\u4e0e\u4eb2\u672c\u591a\u80bd\u7684\u76f8\u6bd4\u662f\u6539\u53d8\u7684\uff0c\u6240\u8ff0\u591a\u80bd\u7684\u7279\u5f81\u5728\u4e8e\u6240\u8ff0Fc\u533a\u5305\u542b\u81f3\u5c112\u4e2a\u7a81\u53d8\u7684\u7ec4\u5408\uff0c\u6240\u8ff0\u7ec4\u5408\u9009\u81ea\uff1a(i)\u9009\u81ea326E\u3001326T\u3001352L\u3001378V\u3001378T\u3001396L\u3001397M\u3001421T\u3001334N\u3001334R\u3001307N\u548c394P\u7684\u4e00\u4e2a\u7a81\u53d8\uff1b\u548c(ii)\u9009\u81ea226Y\u3001227S\u3001230S\u3001231V\u3001234P\u3001243I\u3001243L\u3001246R\u3001246E\u3001247T\u3001248E\u3001253F\u3001254F\u3001255W\u3001259A\u3001261R\u3001262A\u3001263A\u3001266M\u3001267N\u3001267G\u3001274E\u3001274R\u3001276S\u3001278H\u3001379A\u3001282A\u3001283G\u3001284L\u3001286I\u3001286Y\u3001287T\u3001288E\u3001288R\u3001290E\u3001298N\u3001302A\u3001305A\u3001307P\u3001308A\u3001308I\u3001308G\u3001309P\u3001312G\u3001315D\u3001316D\u3001319H\u3001320T\u3001320R\u3001320M\u3001322E\u3001323I\u3001325S\u3001333G\u3001339T\u3001349S\u3001325S\u3001334 N, 334R, 336T, 340E, 343S, 345G, 349H, 350A, 352S, 359A, 361H, 362R, 363I, 366A, 373D, 375R, 377T, 378V, 378T, 380G, 383R, 385R, 389S, 389T, 392R, 393A, 393I, 394P, 396L, 397I, 397M, 398P, 405V, 405L, 410R, 412M, 414R, 421T, 423L, 423Y, 423S, 423P, 428T, 431V, 431T, 434K, 434S, 435R, 436H, 439R, 440G, 440N, 442F, 442P and 447N at least one mutation, the number is EU or Kabat equivalent index system number, condition mutation (I) and mutation (II) does not occur in the same amino acid. The invention also relates to the use of the polypeptide, a composition containing the polypeptide and a method for preparing the polypeptide.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有改变的功能活性的Fc突变体
本专利技术涉及包含突变的Fc区并具有Fc区介导的功能活性的多肽，所述活性与亲本多肽的相比是改变的。
技术介绍
抗体由重链和轻链的四聚物形成。两条轻链是相同的，且两条重链是相同的并且由二硫桥键连接。存在五种类型的重链(α、γ、δ、ε、μ)，这决定了免疫球蛋白类别(IgA、IgG、IgD、IgE、IgM)。轻链基团包括两个亚型：λ和κ。IgG是可以在血液和其他体液中找到的可溶性抗体。IgG是具有150kDa的大概分子量的Y-型糖蛋白，由两条重链和两条轻链组成。每条链的特征在于恒定区和可变区。重链的两个羧基末端结构域形成Fc片段，而重链和轻链的氨基末端结构域识别抗原并且称为Fab片段。通过将抗体Fc片段与提供针对给定治疗靶标的特异性的蛋白结构域组合，可以形成Fc融合蛋白。实例是Fc片段与所有类型的治疗性蛋白或其片段的组合。治疗性抗体和Fc融合蛋白目前用于治疗各种疾病，如类风湿性多关节炎、牛皮鲜、多发性硬化和各种形式的癌症。治疗性抗体可以是单克隆或多克隆抗体。单克隆抗体获自独特的抗体细胞产生系，其呈现出针对单个抗原的相同特异性。治疗性Fc融合蛋白被用作或开发为对抗自身免疫疾病的医学产品，例如，etanercept(Amgen的Enbrel，连接Fc片段的TNF受体)或Alefacept(Biogenldec的Amevive：连接人IgG1的Fc部分的LFA-3)。抗体和Fc融合蛋白能够发挥其作用，Fc片段必须具有可能的最佳活性(例如，抗体依赖性细胞毒性、补体依赖性细胞毒性、或抗体依赖性细胞吞噬作用)，即，对其进行优化。所述优化将允许获得具有改善的活性和/或功效和/或降低的副作用的蛋白。申请人自此已经研发了具有改善的活性的特定Fc片段。这些片段可以用于治疗，以赋予含有其的产品提高的功效。
技术实现思路
本专利技术因此提供了亲本多肽的变体，所述变体具有与Fc区介导的功能活性相关的优化性质。本专利技术涉及包含突变的Fc区并具有Fc区介导的功能活性的多肽，所述功能活性与亲本多肽的相比是改变的，所述Fc区包含至少一个选自以下的突变：G316D，K326E，N315D，N361H，P396L，T350A，V284L，V323I，P352S，A378V，Y436H，V266M，N421T，G385R，K326T，H435R，K447N，N434K，K334N，V397M，E283G，A378T，F423L，A431V，F423S，N325S，P343S，K290E，S375R，F405V，K322E，K340E，N389S，F243I，T307P，N389T，S442F，K248E，Y349H，N286I，T359A，S383R，K334R，T394P，V259A，T393A，P352L，Q418P，V302A，L398P，F423P，S442P，V363I，S383N，S254F，K320E，G402D，I253F，V284A，A431T，N315H，Y319H，C226Y，F405L，T393I，N434S，R255W，A287T，N286Y，A231V，K274R，V308G，K414R，M428T，E345G，F243L，P247T，Q362R，S440N，Y278H，D312G，V262A，V305A，K246R，V308I，E380G，N276S，K439Q，S267G，F423Y，A231T，K320R，L410R，K320M，V412M，T307N，T366A，P230S，Y349S，A339T，K246E，K274E，A231P，I336T，S298N，L234P，S267N，V263A，E333G，V308A，K439R，K392R，S440G，V397I，I336V，Y373D，K288E，L309P，P227S，V379A，K288R，K320T，V282A，I377T，N421S和C261R，编号是EU索引编号或Kabat等同编号。所述多肽在本申请中称为“本专利技术的多肽”。更具体地，本专利技术涉及包含突变的Fc区并具有Fc区介导的功能活性的多肽，所述功能活性与亲本多肽的相比是改变的，所述Fc区包含至少2个突变的组合，所述组合选自：(i)一个突变选自307N、326E、326T、334N、334R、352L、378V、378T、394P、396L、397M和421T；(ii)至少一个突变选自226Y、227S、230S、231V、234P、243I、243L、246R、246E、247T、248E、253F、254F、255W、259A、261R、262A、263A、266M、267N、267G、274E、274R、276S、278H、282A、283G、284L、286I、286Y、287T、288E、288R、290E、298N、302A、305A、307P、308A、308I、308G、309P、312G、315D、316D、319H、320T、320R、320M、322E、323I、325S、333G、334N、334R、336T、339T、340E、343S、345G、349S、349H、350A、352S、359A、361H、362R、363I、366A、373D、375R、377T、378V、378T、379A、380G、383R、385R、389S、389T、392R、393A、393I、394P、396L、397I、397M、398P、405V、405L、410R、412M、414R、421T、421S、423L、423Y、423S、423P、428T、431V、431T、434K、434S、435R、436H、439R、440G、440N、442F、442P和447N，编号是EU索引编号或Kabat等同编号，条件是：突变(i)与突变(ii)不发生在相同氨基酸上。优选，突变(i)选自378V、396L和397M。优选，多肽还可以包括选自248E、326T、333G和423Y的突变。优选，本专利技术的突变(ii)选自226Y、227S、230S、231V、234P、243I、243L、246R、246E、247T、248E、253F、254F、255W、259A、261R、262A、263A、266M、267G、274E、274R、276S、278H、282A、283G、284L、286I、286Y、287T、288E、288R、290E、298N、302A、305A、307P、308A、308I、308G、309P、312G、316D、319H、320T、320R、320M、322E、323I、325S、333G、334N、334R、336T、339T、340E、343S、345G、349S、349H、350A、352S、359A、361H、362R、363I、366A、373D、375R、377T、378T、379A、380G、383R、385R、389S、389T、392R、393A、393I、394P、396L、397I、398P、405V、405L、410R、412M、414R、421T、421S、423L、423Y、423S、423P、428T、431本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含突变的Fc区并具有Fc区介导的功能活性的多肽，所述活性与亲本多肽的相比是改变的，所述多肽的特征在于所述Fc区包含至少2个突变的组合，所述组合选自：(i)选自307N、326E、326T、334N、334R、352L、378V、378T、394P、396L、397M和421T的一个突变；和(ii)选自以下的至少一个突变：226Y、227S、230S、231V、234P、243I、243L，246R，246E，247T，248E，253F，254F，255W，259A，261R，262A，263A，266M，267N，267G，274E，274R，276S，278H，282A，283G，284L，286I，286Y，287T，288E，288R，290E，298N，302A，305A，307P，308A，308I，308G，309P，312G，315D，316D，319H，320T，320R，320M，322E，323I，325S，333G，334N，334R，336T，339T，340E，343S，345G，349S，349H，350A 352S，359A，361H，362R，363I，366A，373D，375R，377T，378V，378T，379A，380G，383R，385R，389S，389T，392R，393A，393I，394P，396L，397I，397M，398P，405V，405L，410R，412M，414R，421T，421S，423L，423Y，423S，423P，428T，431V，431T，434K，434S，435R，436H，439R，440G，440N，442F，442P和447N，编号是EU索引或Kabat等价体系的编号，条件是：突变(i)与突变(ii)不发生在相同氨基酸上。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.05.07 FR 15541011.包含突变的Fc区并具有Fc区介导的功能活性的多肽，所述活性与亲本多肽的相比是改变的，所述多肽的特征在于所述Fc区包含至少2个突变的组合，所述组合选自：(i)选自307N、326E、326T、334N、334R、352L、378V、378T、394P、396L、397M和421T的一个突变；和(ii)选自以下的至少一个突变：226Y、227S、230S、231V、234P、243I、243L，246R，246E，247T，248E，253F，254F，255W，259A，261R，262A，263A，266M，267N，267G，274E，274R，276S，278H，282A，283G，284L，286I，286Y，287T，288E，288R，290E，298N，302A，305A，307P，308A，308I，308G，309P，312G，315D，316D，319H，320T，320R，320M，322E，323I，325S，333G，334N，334R，336T，339T，340E，343S，345G，349S，349H，350A352S，359A，361H，362R，363I，366A，373D，375R，377T，378V，378T，379A，380G，383R，385R，389S，389T，392R，393A，393I，394P，396L，397I，397M，398P，405V，405L，410R，412M，414R，421T，421S，423L，423Y，423S，423P，428T，431V，431T，434K，434S，435R，436H，439R，440G，440N，442F，442P和447N，编号是EU索引或Kabat等价体系的编号，条件是：突变(i)与突变(ii)不发生在相同氨基酸上。2.根据权利要求1的多肽，其特征在于突变(i)选自378V、396L和397M。3.根据权利要求1或2的多肽，其特征在于其进一步包含选自248E、326T、333G和423Y的突变。4.根据权利要求1至3之一的多肽，其特征在于所述Fc区介导的功能活性选自抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、补体依赖性细胞毒性(CDC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)，以及这些活性中的至少两种的组合。5.根据权利要求1至4之一的多肽，其特征在于其具有Fc区介导的功能活性，该功能活性与亲本多肽的相比提高。6.根据权利要求1至5之一的多肽，其特征在于其具有Fc区介导的功能活性，该功能活性与亲本多肽的相比提高至少2倍，优选5倍以上，优选10倍以上，优选15倍以上，优选20倍以上，优选25倍以上，和优选30倍以上。7.根据权利要求1至4之一的多肽，其特征在于其具有Fc区介导的功能活性，该功能活性与亲本多肽的相比降低。8.根据权利要求1至4或7之一的多肽，其特征在于其具有Fc区介导的功能活性，该功能活性与亲本多肽的相比降低至少2倍，优选5倍以上，优选10倍以上，优选15倍以上，优选20倍以上，优选25倍以上，和优选30倍以上。9.根据权利要求1至8之一的多肽，其特征在于所述的突变Fc区对于至少一种Fc区受体(FcR)具有改变的亲合力，所述受体选自C1q补体、FcgRIIIa(CD16a)、FcgRIIa(CD32a)和FcgRIIb(CD32b)受体。10.根据权利要求9的多肽，其特征在于所述的突变Fc区对于至少一种Fc区受体(FcR)具有提高的亲合力，所述受体选自C1q补体以及FcgRIIIa(CD16a)、FcgRIIa(CD32a)和FcgRIIb(CD32b)受体。11.根据权利要求9的多肽，其特征在于所述的突变Fc区对于至少一种Fc区受体(FcR)具有降低的亲合力，所述受体选自C1q补体以及FcgRIIIa(CD16a)、FcgRIIa(CD32a)和FcgRIIb(CD32b)受体。12.根据权利要求1至11之一的多肽，其特征在于所述突变的Fc区与亲本多肽相比包含2至20个突变，优选2至10个突变。13.根据权利要求1至10或12之一的多肽，其特征在于所述的突变Fc区对于C1q补体具有提高的亲合力，并且包含至少2个突变的组合，所述组合包含：i)选自378V、378T、396L、421T、334R和326E的一个突变；和ii)选自361H、290E、316D、248E、410R、421T、334R、394P、307P、447N、378V、284L、421T、396L、286I、315D和397M的至少一个突变，编号是EU索引或Kabat等价体系的编号，并且条件是：突变(i)与突变(ii)不发生在相同氨基酸上。14.权利要求1至10或12之一的多肽，特征在于所述的突变Fc区对FcgRIIIa受体(CD16a)具有提高的亲合力，并且包括至少2个突变的组合，所述组合包括：i)选自378V、326E、397M、334N和396L的一个突变；和ii)选自316D、397M、334N、248E、231V、246R、336T、421T、361H、366A、439R、290E、394P、307P、378V、378T、286I、286Y和298N的至少一个突变，编号是EU索引或Kabat等价体系的编号，并且条件是：突变(i)与突变(ii)不发生在相同氨基酸上。15.根据权利要求1至10或12之一的多肽，特征在于所述的突变Fc区对FcgRIIa受体(CD32a)具有提高的亲合力，并且包括至少2个突变的组合，所述组合包括：i)选自378V、326E、397M、307N、394P、326T、396L和334N的一个突变；和ii)选自316D、334R、334N、323I、231V、246R、336T、378T、286Y、286I、352S、383R、359A、421T、361H、315D、366A、290E、307P和439R的至少一个突变，编号是EU索引或Kabat等价体系的编号，并且条件是：突变(i)与突变(ii)不发生在相同氨基酸上。16.根据权利要求1至10或12之一的多肽，特征在于所述的突变Fc区对FcgRIIb受体(CD32b)具有提高的亲合力，并且包括至少2个突变的组合，所述组合包括：i)选自326E、326T、378V、397M、352L、394P、396L和421T的一个突变；和ii)选自316D、334R、248E、334N、418P、231V、320E、402D、359A、383R、421T和361H的至少一个突变，编号是EU索引或Kabat等价体系的编号，并且条件是：突变(i)与突变(ii)不发生在相同氨基酸上。17.根据权利要求1至6或12之一的多肽，特征在于所述的突变Fc区具有提高的CDC活性，并且包括至少2个突变的组合，所述组合包括：i)选自378V、378T、396L、421T、334R和326E的一个突变，和ii)选自361H、290E、316D、248E、410R、421T、334R、394P、307P、447N、378V、284L、421T、396L、286I、315D和397M的至少一个突变，编号是EU索引或Kabat等价体系的编号，并且条件是：突变(i)与突变(ii)不发生在相同氨基酸上。18.根据权利要求1至6或12之一的多肽，特征在于所述的突变Fc区具有提高的ADCC活性，并且包括至少2个突变的组合，所述组合包括：i)选自378V、326E、397M、334N和396L的一个突变；和ii)选自316D、397M、334N、248E、231V、246R、336T、421T、361H、366A、439R、290E、394P、307P、378V、378T、286I、286Y和298N的至少一个突变，编号是EU索引或Kabat等价体系的编号，并且条件是：突变(i)与突变(ii)不发生在相同氨基酸上。19.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·莫内，P·蒙东，A·丰泰纳，C·德罗默夫，
申请(专利权)人：法国血液分割暨生化制品实验室，
类型：发明
国别省市：法国,FR