用于表位选择的新方法技术
A new method for table selection
The present invention relates to some new methods of selecting the epitope of the antibody. The invention also provides the production of antibodies against protein (e.g. functional antibody) method, the method includes: (I) by means of the identification of protein epitopes by the protein and at least one contact to form at least one protease digestion, deconstruction or truncated versions of the protein and at least one surface exposed to the hydrolysis of the protein peptide protein exposed to restrictive or constraints, the exposed surface of the peptide by the protease cut from the protein, and the exposed surface of the peptide produced based on antigen epitope; and (II) antibody to the antigen epitope of cultivation the. The invention also provides antigen epitopes and antibodies against such epitopes.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于表位选择的新方法
本专利技术涉及某些选择靶蛋白的表位的新方法，该方法用于但不限于抗体(例如功能性抗体)产生。因此，本专利技术在一些方面中涉及用于产生抗体的方法。此类方法典型地包括鉴别抗原表位和培育针对该抗原表位的抗体。本专利技术还涉及抗原表位和结合此类抗原表位的抗体。
技术介绍
由于用例如若干种单克隆抗体(mAb)疗法(包括阿达木单抗(Humira)、贝伐单抗(Avastin)、赫赛汀(Herceptin))所见的临床成功，和例如靶向PCSK9的新型胆固醇下降mAb治疗(阿利库单抗(Alirocumab)和依伏库单抗(Evolocumab))的希望，抗体治疗的发展非常迅速。然而，目前市场上的所有抗体以及所有在晚期临床发展中的抗体通常是针对细胞外靶标，并且这些抗体通常是使用聚焦于亲和力或结合强度的筛选平台进行发现和开发。细胞内作用的抗体的开发和针对“困难靶标(即其中传统抗体发现方法失败的靶标)”的抗体的开发是一项艰巨的挑战，需要新的技术进步来发现和开发有效的抗体。对于细胞内作用的抗体，还需要用于将抗体内化至正确的靶器官中的细胞的新工具。此外，目前的抗体发现和开发...
【技术保护点】
一种产生针对蛋白质的抗体的方法，所述方法包括：(i)通过以下方式鉴别所述蛋白质中的抗原表位：通过使该蛋白质与至少一种蛋白酶接触以形成至少一种消化、解构或截短版本的该蛋白质和至少一种表面暴露的肽来将该蛋白质暴露于限制性的或约束的蛋白水解，该表面暴露的肽通过所述蛋白酶的作用从该蛋白质上切割掉，并且基于所述表面暴露的肽产生抗原表位；和(ii)培育针对该抗原表位的抗体。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.03.31 US 62/140,955;2015.08.21 US 62/283,1181.一种产生针对蛋白质的抗体的方法，所述方法包括：(i)通过以下方式鉴别所述蛋白质中的抗原表位：通过使该蛋白质与至少一种蛋白酶接触以形成至少一种消化、解构或截短版本的该蛋白质和至少一种表面暴露的肽来将该蛋白质暴露于限制性的或约束的蛋白水解，该表面暴露的肽通过所述蛋白酶的作用从该蛋白质上切割掉，并且基于所述表面暴露的肽产生抗原表位；和(ii)培育针对该抗原表位的抗体。2.一种产生针对蛋白质的抗体的方法，所述方法包括：(i)通过使该蛋白质与至少一种蛋白酶接触以形成至少一种消化、解构或截短版本的该蛋白质和至少一种表面暴露的肽来将该蛋白质暴露于限制性的或约束的蛋白水解，该表面暴露的肽通过所述蛋白酶的作用从该蛋白质上切割掉；和(ii)通过鉴别该至少一种表面暴露的肽中的表面暴露的表位来鉴别抗原表位，该表面暴露的肽存在于该蛋白质的区域中，导致当该肽在限制性的或约束的蛋白水解期间从该蛋白质上切割掉或除去时，该蛋白质的生物功能的缺乏或显著改变；或基于该蛋白质的生物功能的生物信息学和/或已知数据来选择该蛋白质内的至少一个靶区域，并通过鉴别该至少一种表面暴露的肽中的表面暴露表位来鉴别抗原表位，该表面暴露的肽存在于所述至少一个靶区域中；和(iii)培育针对该抗原表位的抗体。3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述至少一种蛋白酶在以下条件下使用：导致至多8个或至多7个或至多5个表面暴露的肽、或至多8个或至多7个或至多5个独特的表面暴露的肽通过在蛋白水解消化物质的样品中所述蛋白酶的作用从该蛋白质上切割掉，并且任选地多个样品按顺序或并行地获取或运行，任选地在不同的时间段和/或所述蛋白酶的不同浓度下获取或运行。4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述至少一种蛋白酶在以下条件下使用：导致至多8个或至多7个或至多5个表面暴露的肽通过所述蛋白酶的作用从该蛋白质上切割掉。5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述至少一种蛋白酶的动力学活性减慢到以下：使得所述表面暴露的肽一次一个或一次几个被切割掉，例如在样品中一次至多8个或至多7个或至多5个被切割掉，并且任选地多个样品按顺序或并行地获取或运行。6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述切割的表面暴露的肽基于与所述至少一种蛋白酶接触后的出现顺序排序，其中首先被切割掉或在最低浓度的所述蛋白酶下被切割掉的该表面暴露的肽被定为高等级，并且之后被切割掉或在最高浓度的所述蛋白酶下被切割掉的该表面暴露的肽被定为低等级，并且任选地在其间被切割掉的表面暴露的肽可按照其出现顺序排序。7.如权利要求6所述的方法，其中所述方法包括挑选具有高等级的表面暴露的肽用于抗原表位开发，并培育针对所述抗原表位的抗体。8.如权利要求6所述的方法，其中所述方法包括挑选具有高等级的表面暴露的肽，基于所述表面暴露的肽构建抗原表位，并培育针对所述抗原表位的抗体。9.如权利要求6所述的方法，其中所述方法包括挑选具有高等级的表面暴露的肽，将所述表面暴露的肽与所述蛋白质的限定的生物学特性相关联，基于所述表面暴露的肽构建抗原表位，并培育针对所述抗原表位的抗体。10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中使用单一蛋白酶消化、解构和/或截短所述蛋白质。11.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中使用多种蛋白酶消化、解构和/或截短所述蛋白质。12.如权利要求11所述的方法，其中所述多种蛋白酶按顺序一次一个使用或并行地使用，或者用于多种蛋白酶的单一混合物中。13.如权利要求11或12所述的方法，其中所述多种蛋白酶用于鉴定重叠的、互补的或独特的表面暴露的肽。14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述蛋白酶选自下组，该组由以下各项组成：胰蛋白酶、Arg-C蛋白酶、Asp-N肽链内切酶、梭菌蛋白酶、谷氨酰肽链内切酶、Lys-C、Lys-N、糜蛋白酶、蛋白酶K、嗜热菌蛋白酶、胃蛋白酶、半胱天冬酶1、半胱天冬酶2、半胱天冬酶3、半胱天冬酶4、半胱天冬酶5、半胱天冬酶6、半胱天冬酶7、半胱天冬酶8、半胱天冬酶9、半胱天冬酶10、肠激酶、因子Xa、粒酶B、中性粒细胞弹性蛋白酶、脯氨酸-肽链内切酶、葡萄球菌肽酶I、和凝血酶。15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述蛋白酶是胰蛋白酶。16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述蛋白质是存在于衍生自细胞的蛋白脂质体中的膜蛋白质。17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述蛋白脂质体固定在流动细胞中以产生膜蛋白质的固定相。18.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述蛋白质在含蛋白质的脂质囊泡中，并且所述囊泡是表面结合的或悬浮于溶液中。19.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述蛋白质在完整细胞中，并且所述细胞是表面结合的或悬浮于溶液中。20.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述蛋白质在溶液中。21.如权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述蛋白质是人类蛋白质组的任何蛋白质。22.如权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述蛋白质是膜结合蛋白质、可溶性蛋白质、细胞外蛋白质或细胞内蛋白质。23.如权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述蛋白质是膜蛋白质或膜相关蛋白质。24.如权...
【专利技术属性】
技术研发人员：O·奥尔瓦，C·特尔库利亚，
申请(专利权)人：欧比力克治疗公司，
类型：发明
国别省市：瑞典,SE
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