The invention belongs to the technical field of frozen regeneration, particularly relates to a method for improving Arabidopsis shoot tip regeneration rate after cryopreservation, including Arabidopsis stem apex acquisition, processing, loading plant droplet vitrification, cryopreservation, thawing and unloading handling and recovery training. This method makes up the blank of the related research in the aspects of the cytological changes of cryopreservation, but also for the tip cryopreservation method provides support to improve the regeneration rate of plant stems, have important significance for research of cryopreservation technology.
【技术实现步骤摘要】
一种提高拟南芥茎尖超低温保存后再生率的方法
本专利技术属于冷冻再生
,尤其涉及一种提高拟南芥茎尖超低温保存后再生率的方法。
技术介绍
植物超低温保存(cryopreservation)是在液氮温度下(-196℃)保存植物材料的方法。由于在液氮温度下所有的细胞活动都暂时停止,所以理论上植物材料可以在不发生变化的情况下无限期保存。植物茎尖分生组织具有再生完整植株的能力,是植物超低温保存的主要对象。植物超低温技术发展的一个重要瓶颈是对超低温处理过程细胞水平的研究非常有限。超低温处理的主要对象是离体茎尖(分生组织)等具有再生能力的植物组织。在处理过程中,离体茎尖将经受预培养,渗透保护,脱水,液氮处理,解冻,复水和恢复培养等剧烈的人工处理。上述过程中,植物细胞膜系统和细胞骨架等将发生剧烈的变化和响应,这些变化及其恢复是超低温处理方案成败的关键。但是,植物茎尖超低温保存过程中细胞骨架的变化模式是怎样的,微管结构状态与植物茎尖超低温保存后的再生率的关系等问题尚不清楚。
技术实现思路
针对现有技术中存在的问题,本专利技术的目的是在于提供一种提高拟南芥茎尖超低温保存后再生率的方法,旨在解决超低温保存植物材料的问题。本专利技术以拟南芥茎尖为研究对象,解析了超低温保存过程中细胞的微管变化模式,并通过加入微管稳定剂紫杉醇和促进微管解聚的药物oryzalin来改变微管状态,进而验证微管结构对超低温保存后植株再生率的影响。本专利技术方法弥补了超低温保存技术中有关细胞学变化方面的研究空白,同时为提高植物茎尖超低温保存再生率提供了方法支持,对研究超低温保存技术有重要意义。为了达到上述目 ...
【技术保护点】
一种提高拟南芥茎尖超低温保存后再生率的方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:(1)将消毒处理过的拟南芥种子播种在MS培养基上,经4‑6℃低温处理之后在22‑25℃12h/12h昼夜周期的培养条件下培养一周,随后在解剖镜下切割茎尖;(2)选取90个茎尖,平均分成三组,每组30个茎尖,第一组加入20μmol/L的紫杉醇并处理20分钟,标记为T组;第二组加入20μmol/L的黄草消oryzalin处理20分钟,标记为O组;第三组的茎尖直接标记为C组。(3)加载处理,将T组、O组和C组茎尖同时放在加载溶液中,25℃下处理18‑25分钟;(4)植物微滴玻璃化处理,在加载溶液处理结束以后,将三组茎尖同时转入预冷的PVS2溶液,在冰上处理25‑30分钟;(5)超低温保存,将经过PVS2处理的茎尖转移到无菌铝箔条上并插入液氮中,待不再有气泡产生时将铝箔条转入冻存管,并放置在液氮中保持30分钟;(6)解冻和卸载处理,将铝箔条从液氮中移出并直接转入卸载溶液中,并在25℃下处理20‑30分钟;(7)恢复培养,将解冻后的茎尖转移到恢复培养基上进行恢复培养,恢复培养的前7天为暗培养;暗培养之后,继续在光照下培养 ...
【技术特征摘要】
1.一种提高拟南芥茎尖超低温保存后再生率的方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:(1)将消毒处理过的拟南芥种子播种在MS培养基上,经4-6℃低温处理之后在22-25℃12h/12h昼夜周期的培养条件下培养一周,随后在解剖镜下切割茎尖;(2)选取90个茎尖,平均分成三组,每组30个茎尖,第一组加入20μmol/L的紫杉醇并处理20分钟,标记为T组;第二组加入20μmol/L的黄草消oryzalin处理20分钟,标记为O组;第三组的茎尖直接标记为C组。(3)加载处理,将T组、O组和C组茎尖同时放在加载溶液中,25℃下处理18-25分钟;(4)植物微滴玻璃化处理,在加载溶液处理结束以后,将三组茎尖同时转入预冷的PVS2溶液,在冰上处理25-30分钟;(5)超低温保存,将经过PVS2处理的茎尖转移到无菌铝箔条上并插入液氮中,待不再有气泡产生时将铝箔条转入冻存管,并放置在液氮中保持30分钟;(6)解冻和卸载处理,将铝箔条从液氮中移出并直接转入卸...
【专利技术属性】
技术研发人员:李唯奇,贾艳霞,林亮,袁彬,
申请(专利权)人:中国科学院昆明植物研究所,
类型:发明
国别省市:云南,53
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