用于检测施马伦贝格病毒的荧光RT-PCR引物、探针及试剂盒制造技术

技术编号:11211553 阅读:130 留言:0更新日期:2015-03-26 21:23
本发明专利技术公开了一种用于检测施马伦贝格病毒的荧光RT-PCR引物、探针及试剂盒。所述引物与探针的序列如SEQ ID NO.1~6所示。所述试剂盒中含有引物、探针、反转录酶、DNA聚合酶、RNA提取试剂、荧光PCR反应试剂、施马伦贝格病毒阳性对照和阴性对照。本发明专利技术建立的施马伦贝格病毒荧光RT-PCR试剂盒及检测方法具有特异、敏感、重复性好、快速、费用低廉,是施马伦贝格病毒快速检测的良好方法。

【技术实现步骤摘要】
用于检测施马伦贝格病毒的荧光RT-PCR引物、探针及试剂 合 Sl
本专利技术属于分子生物学检测领域,特别涉及一种用于检测施马伦贝格病毒的荧光 RT-PCR引物、探针及试剂盒。
技术介绍
施马伦贝格病(Schmallenberg,SB)是2011年11月在德国北莱茵-威斯特法伦 州施马伦贝格镇牛羊中发现的一种新的病毒性动物传染病,该病的主要临床特征是:受感 染母羊流产、死胎,新生羔羊畸形、成活率下降,感染牛表现为腹泻、发热、产奶量下降等,对 畜牧业造成了较大危害。 目前SB的实验室诊断方法主要包括细胞培养分离病毒等病原检测方法,以及酶 联免疫吸附试验(ELISA)、间接免疫荧光试验(IFA)和中和试验(NT)等血清学方法。病毒分 离通常是确诊疫病的金标准,但由于成年患病动物常不表现临床症状,难以掌握病毒血症 的具体时期,且费时费力,因此病毒分离的实施受到一定的限制,不适应快速检测的需要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于检测施马伦贝格病毒的荧光RT-PCR引物组及试 剂盒。 本专利技术的另一个目的在于提供上述荧光RT-PCR引物组及试剂盒在检测施马伦贝 格病毒上的应用。 本专利技术所采取的技术方案是: 用于检测施马伦贝格病毒的荧光RT-PCR引物和探针,所述引物是根据施马伦贝格病 毒核衣壳蛋白基因序列的高度保守区域设计的。其核苷酸序列如下所示: 60F :5' - GCTTGCCTGGGCCAAAT -3'(SEQ ID NO. 1), 60R:5' - CGAATTGCTGCAAGAAGGTTCT -3' (SEQ ID N0.2), 60P :Fam-5' - TGGATTCTCTCCTGCTGC -3' -Eclipse (SEQ ID NO. 3); 一种用于检测施马伦贝格病毒的荧光RT-PCR试剂盒,其含有以上所述的引物和探针, 还含有反转录酶、DNA聚合酶、RNA提取试剂、荧光PCR反应试剂、施马伦贝格病毒阳性对照 和阴性对照。 所述施马伦贝格病毒阳性对照为施马伦贝格病毒CDNA的质粒,所述阴性对照为 无菌采取澳洲进口牛血清,经检测BSV、BTV、EHDV、AKV、BVDV、IBRV为阴性。 以上所述的试剂盒在施马伦贝格病毒检测中的应用。 本专利技术的有益效果是: 本专利技术建立的施马伦贝格病毒荧光RT-PCR试剂盒及检测方法具有特异、敏感、重复性 好、快速、费用低廉,是施马伦贝格病毒快速检测的良好方法。 【附图说明】 图1为RT-PCR电泳结果图(M :DNA Marker DL-2000 ;P :阳性对照;1 :引物60扩增 pMD-SBV ;N:阴性对照); 图2为SBV荧光RT-P CR检测结果; 图3为SBV荧光RT-PCR特异性试验; 图4为阳性质粒稀释敏感性试验; 图5为SBV荧光RT-PCR标准曲线图。 【具体实施方式】 下面结合实施例对本专利技术作进一步的说明,但并不局限于此。 实施例1引物设计 从Genebank下载多个施马伦贝格病毒(SBV)的核衣壳蛋白基因序列,用DNASTAR 5. 07 软件进行比对,寻找高度保守的区域,然后选取适当的核衣壳蛋白基因序列分别设计2套 特异性检测SBV核衣壳蛋白基因的引物、Taqman探针,送大连宝生物技术有限公司合成, 用DEPC处理水溶解,-80°C避光保存。引物、探针见表1 : 表I SBV荧光RT-PCR引物、探针本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于检测施马伦贝格病毒的荧光RT‑PCR引物和探针,其特征在于,所述引物是根据施马伦贝格病毒核衣壳蛋白基因序列的高度保守区域设计的。

【技术特征摘要】
1. 用于检测施马伦贝格病毒的荧光RT-PCR引物和探针,其特征在于,所述引物是根据 施马伦贝格病毒核衣壳蛋白基因序列的高度保守区域设计的。2. 根据权利要求1所述的用于检测施马伦贝格病毒的荧光RT-PCR引物和探针,其特征 在于,其核苷酸序列如下所示: 60F :5' - GCTTGCCTGGGCCAAAT -3'(SEQ ID NO. 1), 60R:5, - CGAATTGCTGCAAGAAGGTTCT -3, (SEQ ID NO. 2), 60P :Fam-5, - TGGATTCTCTCCTGCTGC -3, -Eclipse (SEQ ID N0.3)。3. -种用于检测施...

【专利技术属性】
技术研发人员:杨素陶旻陈轩黄海超徐海聂沙才华廖秀云罗宝正薄清如
申请(专利权)人:中华人民共和国珠海出入境检验检疫局
类型:发明
国别省市:广东;44

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