猪博卡病毒1型、2型和3型多重PCR检测方法技术

本发明专利技术公开了同时鉴别检测猪博卡病毒1型、2型和3型的多重PCR方法。多重PCR方法引物包括PBoV1引物对、PBoV2引物对及PBoV3引物对。该方法利用不同引物对扩增出不同大小的病毒核酸片段来达到鉴别诊断的目的。本发明专利技术可同时检测并区分PBoV1、PBoV2和PBoV3，具有特异性强、敏感性高、省时省力等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术专利属于动物病原微生物检测
，具体的说是一种同时鉴别三种不同猪博卡病毒的多重PCR检测方法。
技术介绍
猪博卡病毒(Porcine bocavirus，PBoV)自2009年被首次发现以来，证实存在序列同源性较低的三种基因型(Jiang YH et al，2014，J Gen Virol，95：453-465)，被疑为猪圆环病毒相关性疾病、“猪腹泻病”的重要病原，并在这类病的发生发展上起重要作用，已成为世界各国科研人员的研究热点。猪博卡病毒1型(PBoV1)发现于瑞典患仔猪多系统衰竭综合征的猪体中，其基因组大小约为4786bp(GenBank Number：HQ223038)，核苷酸序列水平上与犬博卡病毒、牛细小病毒、大猩猩博卡病毒和人博卡病毒的同源性分别为52-55％、44-45％、50％和44-48％(AL et al.，2009，Virus Res，146(1-2)：125-129)。基因组结构编码3个主要的开放阅读框(Open reading frames，ORF)，ORF1和ORF3编码非结构蛋白(NS1和NP1)，ORF2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测猪博卡病毒1型、2型和3型多重PCR的引物组合物，其特征在于：所述引物组合物包括PBoV1引物对、PBoV2引物对及PBoV3引物对，其中PBoV1引物对包括PBoV1‑F和PBoV1‑R两条引物，PBoV2引物对包括PBoV2‑F和PBoV2‑R两条引物以及PBoV3引物对包括PBoV3‑F和PBoV3‑R两条引物。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测猪博卡病毒1型、2型和3型多重PCR的引物组合物，其特征在于：所述引物组合物包括PBoV1引物对、PBoV2引物对及PBoV3引物对，其中PBoV1引物对包括PBoV1-F和PBoV1-R两条引物，PBoV2引物对包括PBoV2-F和PBoV2-R两条引物以及PBoV3引物对包括PBoV3-F和PBoV3-R两条引物。
2.如权利要求1所述的引物组合物，所述的引物具体为：
PBoV1-F：TCAATGGTACGTGCCGATAT SEQ ID NO.1
PBoV1-R：TTATTCTGCTTCGCCTGGTT SEQ ID NO.2
PBoV2-F：GAGGTATTCAGCCAGCACAT SEQ ID NO.3
PBoV2-R：AGYTCCTGCGGTTCTGTTTC SEQ ID NO.4
PBoV3-F：TYTTGAACATCCAGGGCTAC SEQ ID NO.5
PBoV3-R：CCATACACCTTBACCGCVTK SEQ ID NO.6。
3.如权利要求1或2所述的引物组合物的应用，所述应用为猪博卡病毒1型、2型和3型多重PCR检测。
4.如权利要求3的应用，所述应用具体为包括以下步骤：配置50μLPCR反应体系：2×Buffer 25μL，PBoV1-F、PBoV1-R、PBoV2-F、PBoV2-R、PBoV3-F和PBoV3-R各0.5μL，PBoV1、PBoV2及PB...

【专利技术属性】
技术研发人员：翟少伦，李小鹏，魏文康，陈琴苓，吕殿红，吴大成，温肖会，
申请(专利权)人：广东省农业科学院动物卫生研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44