一种基于ITS基因的蔗扁蛾实时荧光PCR检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于ITS基因的蔗扁蛾实时荧光PCR检测方法，包括提取待检样品的DNA，制备成模板，使用上、下游引物和探针进行实时荧光PCR，根据Ct值，确定样品的种类。本方法快速、稳定可靠、灵敏度高，适用于蔗扁蛾不同虫态的检测。该方法为我国的鳞翅目谷蛾科扁蛾属在分子水平上的分类和近缘种的快速鉴定奠定了基础。研究结果可直接应用于进出境植物检疫中蔗扁蛾的检疫鉴定，这对保护我国农林业生产安全及维持生态平衡方面有极为重要的意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种生物物种的分子鉴定方法，特别涉及一种基于ITS基因的蔗扁蛾 实时荧光PCR检测方法。
技术介绍
蔗扁蛾Opogona sacchari (Bojer)为我国新增检疫性有害生物，该虫在欧洲地区 植物保护组织(EPPO)、亚太地区植物保护组织(APPO)和北美地区植物保护组织(NAPPO) 等地区也被列为检疫性昆虫。1997年首次在北京园林植物中发现。该虫寄主广泛，已报 道的有24科46种；可危害香蕉、甘蔗、巴西木Dracaena fragrana (L.)、发财树Pachira macrocarpa等园林植物。据报道，蔗扁蛾最早在毛里求斯发现，然后其附近的马达加斯加 及北部的塞舌尔群岛相继发现该虫。不久，该虫又传入南非。1928年，大西洋上的加纳利 (Canary)群岛开始出现蔗扁蛾，1972年传入荷兰，1974年传入英国和意大利。1975年在 南美首次发现蔗扁蛾，并在巴西的圣保罗定殖。20世纪80年代末，蔗扁蛾在北美有分布报 道，目前在美国的佛罗里达州和夏威夷群岛已有分布。此外，日本和印度也相继发现该虫。 说明该虫的适生范围广，定殖能力强。扁蛾属(Opogona 本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种基于ＩＴＳ基因的蔗扁蛾实时荧光ＰＣＲ检测方法，包括以下步骤：取待检样品，采用ＳＤＳ法提取基因组ＤＮＡ，制备模板ＤＮＡ，－２０℃保存备用；取上游扩增引物ＩＴＳＴＦ４０２：５＇－ＣＴＣＣＡＡＣＣＧＣＣＧＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＡＧＴ－３＇（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：　１）和下游引物ＩＴＳＴＲ５９６：５＇－ＣＣＡＡＧＴＣＧＣＡＴＣＣＧＴＧＡＣＧＧＴＴＣＧ－３＇（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：　２）及探针ＩＴＳ１９４ＴＭ：５＇－ＦＡＭ－ＧＡＡＣＣＧＣＡＣＣＣＧＡＧＣＧＣＧＡＧＡＣＧ－ＴＡＭＲＡ－３＇、Ｐｒｅｍｉｘ　Ｅｘ　Ｔａｑ和ｄｄＨ２Ｏ，加入待检模板ＤＮＡ，配成ＰＣＲ反应体系，反应体系的总体积为２５μｌ，各成分...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：廖力，徐淼锋，张卫东，黄国华，
申请(专利权)人：中华人民共和国珠海出入境检验检疫局，湖南农业大学，
类型：发明
国别省市：44