用于红薯源性成分检测的引物探针及方法和试剂盒技术

本发明专利技术涉及用于红薯源性成分检测的寡核苷酸引物与探针。本发明专利技术还涉及用于测定红薯源性成分的实时荧光PCR检测方法，所述方法包括使用针对红薯源性成分的特异性寡核苷酸引物和探针。本发明专利技术还涉及用于快速检测红薯源性成分的实时荧光PCR检测试剂盒，所述试剂盒包括用于实时荧光PCR检测红薯源性成分的特异性寡核苷酸引物和探针。本发明专利技术还涉及针对红薯源性成分的特异性寡核苷酸引物和探针在检测红薯源性成分中的应用。使用本发明专利技术的实时荧光PCR检测方法和试剂盒，能够特异、灵敏、准确地测定淀粉、粉丝、粉条、薯片、糕点等样品中是否含有红薯源性成分。

【技术实现步骤摘要】
用于红薯源性成分检测的引物探针及方法和试剂盒
本专利技术属于生物
，具体而言，本专利技术涉及用于红薯源性成分检测的寡核苷酸引物和探针，用于测定红薯源性成分的实时荧光PCR检测方法，用于快速检测红薯源性成分的实时荧光PCR检测试剂盒以及红薯源性成分的特异性寡核苷酸引物和探针在检测样品中红薯源性成分中的应用。
技术介绍
红薯原名番薯（Ipomoeabatatas），又名甘薯、蕃薯、番芋、地瓜、红苕、线苕、白薯等。红薯富含蛋白质、淀粉、果胶、纤维素、氨基酸、维生素及多种矿物质，有“长寿食品”之誉。红薯淀粉是农作物中营养种类多，综合营养价值高的食品之一。红薯淀粉一方面用于制备淀粉糖浆和葡萄糖，另外一方面，主要用于粉丝和粉条的加工，尤其是河北、河南、山东地区，淀粉深加工呈现规模化，有些产品已出口日本、韩国等国家。由于红薯淀粉的价格高于玉米淀粉,一些红薯淀粉生产企业在红薯淀粉中掺入玉米淀粉进行销售，谋取利润。2007年，湖南质监部门查处利用玉米淀粉制作的红薯粉丝。在粉条加工中，由于生产厂家收购的红薯淀粉中混掺有玉米淀粉，致使粉条质量急剧下降，碎粉率高达30%以上，严重影响粉条的销售额。2011年12月，新浪网报道，河南许昌出现木薯淀粉冒充的红薯粉丝，并用明胶增强粉条劲力。以上淀粉掺假事件不仅损害了消费者的利益，扰乱了淀粉市场，而且对淀粉应用产生很大负面影响,如粉条的口感、耐煮性显著变差等。鉴于此，有学者基于玉米淀粉与红薯淀粉组成结构的不同，致使两种淀粉遇碘制剂呈现不同的显色等原理，建立了确定红薯淀粉中是否混掺玉米淀粉的检测方法，而且利用分光光度计测定混合淀粉试液的吸光率值，可确定混合淀粉中玉米淀粉的含量。另有研究表明，采用扫描电镜、激光粒度分析仪、快速黏度分析仪和Ｘ-射线衍射仪通过分析红薯淀粉中加入不同比例玉米淀粉后的性质变化，可快速测定红薯淀粉中玉米淀粉含量。现代生物技术以其方便、快速、准确等特点，从基因水平分析原料和产品的来源与特性，特异性强、灵敏度高，在食品种类鉴别、产地溯源等食品真伪鉴别研究中得到了广泛应用。但是，分子生物学技术，特别是实时荧光PCR技术在食用淀粉掺假鉴别应用较少，在红薯淀粉鉴伪中尚未见过报道。近几年，有关肉制品、果汁、蜂产品、水产品等食品的鉴伪研究大量采用实时荧光PCR技术。目前，国内外尚未见报道能够快速、简便、特异且灵敏地检测淀粉、粉丝、粉条、薯片、糕点等样品中红薯源性成分的方法和试剂盒。因此，本领域需要一种快速、特异性好、灵敏度高的红薯源性成分的检测方法，进行淀粉、粉丝、粉条、薯片、糕点等样品中红薯源性成分的检测。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于，提供准确检测红薯源性成分的特异性寡核苷酸引物和探针。本专利技术的另一个目的在于，提供准确测定红薯源性成分的实时荧光PCR检测方法。本专利技术的另一个目的在于，提供准确测定红薯源性成分的实时荧光PCR检测试剂盒。本专利技术的还一个目的在于，提供红薯源性成分的特异性寡核苷酸引物和探针在准确检测红薯源性成分中的应用。针对上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术的专利技术人根据红薯g3pdh基因（glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase，甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因）设计了能特异性鉴别红薯源性成分的寡核苷酸引物对和探针，能从样品DNA中高效特异扩增出一段较短的红薯特异性基因片段。根据本专利技术的一个实施方案，本专利技术提供用于实时荧光PCR方法检测红薯源性成分的特异性寡核苷酸引物对和荧光标记探针，所述引物对和探针是根据g3pdh基因序列在不同物种中具有差异性的特点而设计的。所述引物对由上游引物和下游引物组成，所述上游引物为Sweetpotato-F：CAAAAGCACGGCACTAGTCA（SEQIDNo.1），所述下游引物为Sweetpotato-R：AGTGAGACAGGGGAAGTGGA（SEQIDNo.2）；所述探针为Sweetpotato-P：CCCAGCAACCGCTCTTTATA（SEQIDNo.3），在探针的3’端连接有一个荧光淬灭基团TAMAR，5’端连接有一个荧光报告基团FAM。在一个实施方案中，本专利技术提供的红薯特异性检测组合物，所述组合物包含特异性寡核苷酸引物对和探针。在一个优选的实施方案中，本专利技术提供了用于实时荧光PCR方法定性检测红薯源性成分的组合物，所述组合物包含红薯特异性寡核苷酸引物对和探针，其中所述红薯特异性引物对由上游引物和下游引物组成，所述上游引物的碱基序列为SEQIDNo.1，所述下游引物的碱基序列为SEQIDNo.2；所述探针的碱基序列为SEQIDNo.3，在探针的3’端连接有一个荧光淬灭基团TAMAR，5’端连接有一个荧光报告基团FAM。根据本专利技术的另一个实施方案，本专利技术提供红薯源性成分的实时荧光PCR定性检测方法，所述方法包括使用针对红薯源性成分的特异性寡核苷酸引物对和探针，所述引物对和探针是根据g3pdh基因序列在不同物种中具有差异性的特点而设计的。在一个实施方案中，本专利技术的红薯源性成分的实时荧光PCR定性检测方法中，所使用的红薯特异性寡核苷酸引物对由上游引物和下游引物组成，所述上游引物的碱基序列为SEQIDNo.1，所述下游引物的碱基序列为SEQIDNo.2；所述探针的碱基序列为SEQIDNo.3，在探针的3’端连接有一个荧光淬灭基团TAMAR，5’端连接有一个荧光报告基团FAM。在一个实施方案中，所述的PCR扩增条件为95℃，10min；95℃15s，60℃1min，共40个循环。根据本专利技术的另一个实施方案，本专利技术提供用于准确定性检测红薯源性成分的试剂盒，所述试剂盒包括本专利技术用于实时荧光PCR方法检测红薯源性成分的特异性寡核苷酸引物对以及探针和使用说明书。在本专利技术的试剂盒优选实施方案中，本专利技术的红薯源性成分定性检测特异性寡核苷酸引物对是根据g3pdh基因序列在不同物种中具有差异性的特点而设计的。在一个实施方案中，所述试剂盒的红薯特异性寡核苷酸引物对由上游引物和下游引物组成，所述上游引物的碱基序列为SEQIDNo.1，所述下游引物的碱基序列为SEQIDNo.2；所述试剂盒中探针的碱基序列为SEQIDNo.3，在探针的3’端连接有一个荧光淬灭基团TAMAR，5’端连接有一个荧光报告基团FAM。根据本专利技术的另一个实施方案，本专利技术提供用于准确定性检测红薯源性成分的试剂盒，所述试剂盒包括本专利技术的用于实时荧光PCR方法鉴别红薯源性成分的特异性寡核苷酸引物对和探针以及使用说明书。在试剂盒的一个优选实施方案中，所述试剂盒中包含红薯特异性寡核苷酸引物对SEQIDNo.1、SEQIDNo.2和红薯特异性探针SEQIDNo.3，在红薯g3pdh基因探针的3’端连接有一个荧光淬灭基团TAMAR，5’端连接有一个荧光报告基团FAM。在优选的实施方案中，所述试剂盒的使用说明书中包括对用于快速检测红薯源性成分的实时荧光PCR扩增条件的描述。在一个优选的实施方案中，所述试剂盒的说明书中给出的PCR扩增条件是95℃，10min；95℃15s，60℃1min，共40个循环。在一个具体的实施方案中，本专利技术用于红薯源性成分定性检测的试剂盒还包括对照品。优选地，对照品包括阴性对照品和阳性对照品。在一个实施方案中，本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于实时荧光PCR方法检测红薯源性成分的特异性寡核苷酸引物对和探针组合物，其中所述引物对为Sweet potato‑F：CAAAAGCACGGCACTAGTCA，所述下游引物为Sweet potato‑R：AGTGAGACAGGGGAAGTGGA；所述探针为Sweet potato‑P：CCCAGCAACCGCTCTTTATA。

【技术特征摘要】
1.用于实时荧光PCR方法检测红薯源性成分的特异性寡核苷酸引物对和探针组合物，其中所述引物对为Sweetpotato-F：CAAAAGCACGGCACTAGTCA，所述下游引物为Sweetpotato-R：AGTGAGACAGGGGAAGTGGA；所述探针为Sweetpotato-P：CCCAGCAACCGCTCTTTATA。2.根据权利要求1所述的组合物，其中在探针的3’端连接有一个荧光淬灭基团TA...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈颖，韩建勋，吴亚君，黄文胜，杨艳歌，刘鸣畅，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：北京,11