抗ADAMTS-5抗体，其衍生物和用途制造技术

本发明专利技术涉及能够识别并结合表位的抗体、其重组或合成的抗原结合片段(所述表位包含于ADAMTS-5的间隔结构域中)、编码同一物质的核酸和表达载体、其生产方法和用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗ADAMTS-5抗体，其衍生物和用途
本专利技术涉及抗ADAMTS-5抗体，所述抗体用于软骨降解相关病症的治疗。具体而言，可在骨关节炎和其他类型的关节炎中观察到这类降解。
技术介绍
骨关节炎(OA)是一组重叠的不同疾病，其具有不同的病因但类似的生物、形态和临床结果。疾病过程不仅影响关节软骨，还涉及整个关节，包括软骨下骨、韧带、关节囊、滑膜和关节周围的肌肉。最终，关节软骨退化并伴随纤颤、裂缝、溃疡和失去关节表面的全部厚度。该病症的特征为邻近病灶区滑膜关节内的关节软骨缺失，与骨的肥大(骨刺和软骨下骨硬化)和关节囊的增厚相关。可将其解释为滑膜关节对损伤的反应。该现象可发生在任何关节中，但在手、脊椎、膝、脚和臀的所选关节中最常见。严重时，该病理性变化会导致辐射变化(失去关节间隙和骨刺)，这被用于流行病学研究以估计在不同关节位点上OA的普遍程度。目前，OA发作的分子和细胞机制仍未知；有假说指出异常的负荷以及外伤可能起一定作用，但似乎可确定基因和遗传因素也涉及其中。若存在，炎症仅次于主要事件。OA是最常见的关节炎形式。世界卫生组织(WHO)估计，在全球范围内超过60岁的人群中9.6％的男性和18％的女性患有症状性OA，并将OA归类为女性残疾的第4大病因和男性残疾的第8大病因。据信膝OA的残疾风险与心脏疾病相同。另一种常见的关节炎形式，类风湿性关节炎(RA)是一种以导致软骨降解、骨侵蚀和疼痛的关节滑膜炎为特征的慢性炎症疾病，导致严重的残疾和过早死亡。虽然OA和RA可由不同的病因引起并根据不同的途径发展，但它们仍共有由软骨基质合成和分解失衡组成的基本过程，使得关节软骨破坏，继而导致关节活动受限、关节不稳定、疼痛和慢性残疾。此外，尽管受OA和RA影响的患者人数令人注目，但对于其病原学、发病机理和发展仍知之甚少。甚至更令人注目的是，对于这些疾病的治疗，只存在很少的疾病改善性抗风湿性药物(DMARD)，且其主要限于RA。对于OA，在不存在疗法的情况下，治疗只能是缓解性的，限于使用COX-2选择性抑制剂(如塞来考昔)，以及传统的非甾体抗炎药(NSAID)(如萘普生和双氯芬酸)，或者甚至更老的用于疼痛控制的药物(如乙酰氨基酚)。其他类型的药物(包括诸如软骨素和硫酸盐葡糖胺的化合物)也是针对OA的治疗选择，但许多医生对其效力仍不确信。关于RA，在过去十年中，通常由NSAID支持的DMARD(尤其是氨甲喋呤和新生物剂的使用)和/或皮质类固醇的优化使用提供了疼痛缓解以及在一定程度上控制了炎症，显著增加了控制的成功率。然而，传统DMARD的起效缓慢且具有促进频繁监控的毒性。此外，传统的NSAID药物的胃肠道副作用以及选择性COX-2抑制剂的心血管和肾副作用使NSAID的使用大为失色。因此，用于防止软骨降解的新治疗剂的研究引起了极大兴趣，原因在于OA和RA影响了全世界数以百万计的人，随着平均人口年龄的增长，预期发病率上升。OA和RA中出现的软骨降解是酶对其结构组分进行切割的结果。软骨主要由软骨细胞和胞外基质(ECM)构成，所述胞外基质由蛋白多糖(主要是蛋白聚糖聚合物)、胶原和水组成。基质中，蛋白聚糖聚合物、透明质酸(HA)和II型胶原之间的相互作用为软骨提供了独特的可压缩性和弹性，用于承重和关节活动功能的生物机械特性。蛋白聚糖聚合物由三个球形区组成：靠近蛋白N末端的G1和G2以及位于C末端的G3。G1和G2区被短的球间结构域(IGD)隔开，而G2和G3区被长的糖胺聚糖(GAG)附着区隔开。通过辅助蛋白，G1结构域构成了蛋白聚糖聚合物与HA的结合区。蛋白聚糖聚合物的GAG附着区提供了结合水所需的高阴离子电荷密度并赋予软骨确保其功能所需的独特渗透特性。因此，对导致蛋白聚糖聚合物切割的生物化学机制的理解有助于开发适用于阻断或控制OA疾病的治疗药物。关节炎中软骨完整性的缺失与蛋白水解切割所导致的蛋白聚糖聚合物完整性的受损相关。最近，蛋白聚糖聚合物酶(主要是蛋白聚糖聚合物酶-2(也称为ADAMTS-5)和蛋白聚糖聚合物酶-1(也称为ADAMTS-4))经鉴定属于软骨降解的关键酶。具体而言，出版物(Glasson等，2005.Nature.434:644-64和Stanton等，2005.Nature.434:648-652)显示ADAMTS-5在与小鼠中OA和RA的两个模型相关的病原性关节变化中起基础作用。ADAMTS-4和-5都是谷氨酰内肽酶(glutamylendopeptidase)并在五个特定位点切割蛋白聚糖聚合物：Glu373-Ala374(球间结构域-IGD)、Glu1545-Gly1546、Glu1714-Gly1715、Glu1819-Ala1820和Glu1919-Leu1920键(人序列)，导致软骨破坏。人ADAMTS-4(图1，SEQ.IDNO:1)和ADAMTS-5(图1，SEQ.IDNO:2)是由细胞分泌至胞外空间的多结构域金属蛋白酶。两种酶均具有类似的结构域排布，由信号序列(SS)、前结构域(Pro)、催化金属蛋白酶结构域(Cat)、去整合素(Dis)结构域、血小板反应蛋白(TS)I型结构域、富半胱氨酸(CysR)结构域和间隔(Sp)结构域组成。此外，ADAMTS-5在间隔结构域后包含额外的TS结构域。上文提到的所有催化结构域外的结构域都在天然蛋白底物的识别和处理过程中其重要作用，称为“外位点”。例如，已证明蛋白聚糖聚合物酶的Sp和CysR结构域包含调节蛋白酶与其底物亲和性的GAG结合基序(Kashiwagi等，2004.JBiolChem.279:10109-10119)；(Gendron等，2007.JBiolChem.282:18294-18306)；(Flannery,Curr.11:614-619)；(Zeng等，2006.BiochimBiophysActa.1760:517-524)。因此，人们对开发用于OA和/或RA治疗的ADAMTS-4和-5抑制剂的兴趣日益增强。已开发了多种金属蛋白酶抑制剂，且一些已经在患有癌症(Zucker等，2000.Oncogene.19:6642-6650)和类风湿性关节炎(Milner和Cawston，2005.CurrDrugTargetsInflammAllergy.4:363-375)的患者中进行临床测试，但这些药物未能显示有效性并表现出副作用(如骨骼肌疼痛和轻度的血小板减少)(Zucker等，2000.Oncogene.19:6642-6650)。这些失败被认为是由于缺少抑制剂的选择性和对生物学上重要的脱靶金属蛋白酶的抑制以及其他副作用。因此，选择性是无毒治疗性抑制剂的前提条件。增加针对特定金属蛋白酶选择性的一种方法是产生变构或外位点结合。结合至酶外位点的抑制剂能够阻断与天然ECM底物的相互作用并可成为有吸引力的激活定点抑制剂的替代选择(因为其具有高度特异性且能够有效地仅阻断针对靶底物的水解)，从而最小化体内副作用(Troeberg等，2008.FasebJ.22:3515-3524)。申请WO2011/002968公开了能够结合人ADAMTS-5催化结构域和粉碎蛋白(desintegrin)结构域的抗体。文件WO01/11074和WO00/5377本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种能够识别并结合表位的抗体、其重组或合成的抗原结合片段，所述表位包含于ADAMTS‑5的SEQ ID No.2的氨基酸732至氨基酸874的区域中。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.04.13 EP 12164107.01.一种能够识别并结合表位的抗体、其重组或合成的抗原结合片段，所述表位包含于ADAMTS-5的SEQIDNo.2的氨基酸732至氨基酸874的区域中，所述抗体、其重组或合成的抗原结合片段包含SEQIDNo.60构成的CDRH1，SEQIDNo.61构成的CDRH2，以及SEQIDNo.62构成的CDRH3，SEQIDNo.27构成的CDRL1，SEQIDNo.28构成的CDRL2，以及SEQIDNo.29构成的CDRL3。2.如权利要求1所述的抗体、其重组或合成的抗原结合片段，所述抗体、其重组或合成的抗原结合片段的轻链可变区由SEQIDNo.3构成，重链可变区由SEQIDNo.4构成。3.如权利要求1或2所述的抗体、其重组或合成的抗原结合片段，所述抗体、其重组或合成的抗原结合片段是单克隆抗体或嵌合或人源化的，或去免疫化的或完全人抗体。4.前述权利要求中任一项所述的抗体、其重组或合成的抗原结合片段用于制备药物的用途，所述药物用于治疗和/或预防软...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·秋萨洛利，M·维辛廷，G·卡塞利，L·C·罗瓦迪，
申请(专利权)人：罗达制药生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：意大利;IT