本发明专利技术涉及针对人sPLA2-V的分离抗体以及其用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术涉及针对人sPLA2-V的分离抗体以及其用途。【专利说明】抗-SPLA2-V抗体以及其用途
本专利技术涉及新颖抗体抗-SPLA2-V以及其在诊断和治疗方法中的用途。
技术介绍
分泌型磷脂酶A2(sPLA2)形成催化磷脂的sn-2脂肪酰基键的水解以释放游离 脂肪酸和溶血磷脂的结构相关酶的家族。通过催化此反应，sPLA2酶在多种生物过程中 起着关键作用，所述生物过程包括细胞膜的稳态、脂类消化、宿主防御、信号转导、以及脂 类介质（例如类花生酸和溶血磷脂衍生物）的产生（Valentin等.2000，13;[0011.13;[(^115^· Act. 59-70 ;Lambeau, G.，和 Gelb, Μ· H. 2008, Annu. Rev. Biochem. 77, 495-520)。此家族包 括 11 个成员 / 异形体，称为 sPLA2-IB、sPLA2-IIA、sPLA2-IIC、sPLA2-IID、sPLA2-IIE、 sPLA2-IIF、sPLA2-III、sPLA2-V、sPLA2-X、SPLA2-XIIA 和 SPLA2-XIIB。 在蛋白水平上对特异性异形体的量化被证实存在困难因为类似的酶活性以及异 形体-特异性SPLA2抗体的缺乏。 对于SPLA2-V，Munoz等开发了针对人SPLA2-V、不与其它家族成员交叉反应的单 克隆抗体（Munoz等.2002J. of Immunol.Meth. 262:41-51)。这些抗体获自经纯化的重组 人SPLA2-V免疫的小鼠的杂交瘤并称为MCL-1B7、MCL-2A5和MCL-3G1。Munoz等描述了一 种将MCL-1B7和MCL-2A5用作捕获抗体并将MCL-3G1用作检测抗体的夹心ELISA试验。此 测定被描述以提供2ng/ml灵敏限。但是，此测定不在血清样品中试验。目前，单克隆抗体 MCL-3G1 是由 Cayman Chemical 以目录号 Cat. N° 160510 出售。 Nevalainen等也开发了一种针对SPLA2-V、用于时间分辨荧光免疫测定（TR-FIA) 的抗体。此多克隆抗体是通过使兔子经重组人SPLA2-V蛋白免疫获得。将TR-FIA的分析灵 敏度描述为llng/ml。在来自败血病性休克患者和健康供血者的血清样品中分析SPLA2-V 含量：作者发现在两种样品中的SPLA2-V的血清浓度低于试验的分析灵敏度。 目前，需要可更精确并更灵敏地检测出生物样品（例如血清样品）中SPLA2-V的 针对SPLA2-V的抗体。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是一种针对人SPLA2-V的分离抗体，其中所述抗体具有小于 5. K^M，优选小于2. 510^\1，优选小于1. Κ^Μ的结合人SPLA2-V的Kd。 在本专利技术的一个实施方案中，所述抗体的重链的可变区包括以下⑶R中至少一 个：如下定义的 SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3 和 SEQ ID N0:4。 在本专利技术的另一个实施方案中，所述抗体的轻链的可变区包括以下⑶R中至少一 个：如下定义的 SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6 和 SEQ ID N0:7。 在另一个实施方案中，所述抗体的重链的可变区包括如上定义的⑶R中至少一个 并且轻链的可变区包括如上定义的⑶R中至少一个。 在另一个实施方案中，所述抗体的重链的可变区包括以下⑶R:SEQ ID N0:8(VH-CDR1)、SEQ ID N0:10(VH-CDR2)和 SEQ ID N0:12(VH-CDR3)并且轻链的可变区包 括以下 CDR:SEQ ID N0:5(VL-CDR1)、SEQ ID N0:6(VL-CDR2)和 SEQ ID N0:14(VL-CDR3)。 在另一个实施方案中，所述抗体的重链的可变区包括以下⑶R :SEQ ID N0:9(VH-CDR1)、SEQ ID N0:11(VH-CDR2)和 SEQ ID N0:13(VH-CDR3)并且轻链的可变区包 括以下 CDR:SEQ ID N0:5(VL-CDR1)、SEQ ID N0:6(VL-CDR2)和 SEQ ID N0:15(VL-CDR3)。 在另一个实施方案中，编码重链可变区的氨基酸序列是SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO: 18并且编码轻链可变区的核酸序列是SEQ ID NO: 17或SEQ ID NO: 19。 本专利技术的另一个目的是一种表达载体，其包括SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO :22 和 SEQ ID NO :23 中至少一个。 本专利技术的另一个目的是产生针对人SPLA2-V的抗体的杂交瘤细胞系CNCM 1-4521 和 CNCM 1-4522。 本专利技术的另一个目的是一种组合物，其包含文中如上定义的针对人SPLA2-V的抗 体。 本专利技术的另一个目的是文中如上定义的用于治疗SPLA2-V-相关病症的针对人 SPLA2-V的抗体，其中所述抗体抑制内源性SPLA2-V的活性。 本专利技术的另一个目的是文中如上定义的用于检测生物样品中SPLA2-V的针对人 SPLA2-V的抗体。 本专利技术的另一个目的是一种利用文中如上定义的针对人SPLA2-V的抗体确定生 物样品中SPLA2-V存在的体外诊断或预后测定。 本专利技术的另一个目的是一种试剂盒，其包括文中如上定义的针对人SPLA2-V的至 少一种抗体。 【具体实施方式】 【专利技术者】开发了针对SPLA2-V的新颖抗体，其表现出比现有抗体更佳的SPLA2-V亲 和力并可更精确且更灵敏地检测出生物样本中SPLA2-V，如实施例中所示。 SPLA2-V是sPLA2家族的一种异形体。人SPLA2-V蛋白的完全氨基酸序列（SEQ ID NO: 1) (GenBank 登录号 #NP000920)是： MKGLLPLAWFLACSVPAVQG (信号肽） GLLDLKSMIEKVTGKNALTNYGFYGCYCGWGGRGTPKDGTDWCCWAHDHCYGRLEEKGCNIRTQSYKYR FAWGVVTCEPGPFCHVNLCACDRKLVYCLKRNLRSYNPQYQYFPNILCS(成熟分泌型蛋白）。 如文中所用，术语"抗体"（Ab)包括单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体（例 如，双特异性抗体）、以及抗体片段，只要它们展现出所需的生物活性。在文中，术语"免疫 球蛋白"（Ig)与"抗体"可交换使用。 "分离抗体"是一种从它天然环境的组成中分离和/或回收的抗体。它天然环境的 污染物组成是会干扰抗体的诊断或治疗用途的物质，并可包括酶、激素、以及其它蛋白质类 或非蛋白质类组成。在优选实施方案中，使抗体纯化：（1)纯化到利用Lowry法确定的抗体 的95重量％以上，并最优选地，大于99重量％ ; (2)纯化到足以通过使用旋杯式测序仪获 得N-端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度；或（3)纯化到在还原或非还原条件下 并利用考马斯蓝或优选地，银染色，通过SDS-PAGE所显示的均质。分本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种针对人sPLA2‑V的分离抗体，其中所述抗体具有小于1.10‑10M的结合人sPLA2‑V的Kd。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：G·朗博，E·瓦伦廷，M·雷恩诺，
申请(专利权)人：国家科学研究中心，尼斯大学，
类型：发明
国别省市：法国;FR
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。