【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本说明书涉及用于对试样样品中含有的活微生物数量计数的方法。本说明书还涉及适于实施此类方法的仪器(器械)。现有技术集落计数，也称为cfu(“集落形成单位”)，是一种对液体样品中含有的能够在特定培养基上生长的活微生物数量计数的标准方法。这种用途非常广泛的方法是测量例如水或牛奶中的细菌数量以确保公共安全、医学样品诸如尿液或血液中的细菌数量以确定感染程度并选择使用的抗微生物剂、微生物实验室中的细菌数量以控制几乎任何实验的结果的标准技术。这种非凡的方法概括在图1a中，是在19世纪80年代微生物学诞生时由r.koch、r.j.petri和f.hesse专利技术的[参考文献1]，并且在过去的130年中一直在使用，几乎没有任何修改。它基于待分析的微生物液体样品20中包含的微生物的单个集落的分离。该方法包括将微生物液体样品的液体液滴21分配到生长培养基11(下文称为“板”，诸如培养皿10中的琼脂)的表面上，然后使用称为“涂布器”的手动工具30将液体样品手动涂布在培养基的表面上。这种操作通常被称为“划线”。在温育适当时间量后，板上倍增的分离细菌形成可见的集落22。然后将细菌浓度估计为n/v，其中n是集落数量，并且v是沉积在生长培养基表面上的液体样品的体积。划线似乎是高度重复的，并且在许多病理学诊断微生物学实验室中通常以非常高的量进行，诸如以每天高达1,000至15,000个板的量。这是一项乏味且费力的工作，因此容易出错和不准确。此外，沉积在琼脂表面处的液体液滴很小，通常在100μl左右，并且可能很难与琼脂表面区分开来。然后，操作员在所有方向上施加各种划线，以使液滴尽可能均
技术介绍
0、现有技术
技术实现思路
1、在下文中，术语“包含”是“包括”和“含有”的同义词(意指相同的)，是包括性和开放性的，并且不排除其他未列举的元素。此外，在本公开中，当提及数值时，术语“约”和“实质上”是包括该数值的80％-120％，优选90％-110％的范围的同义词(意指相同的)。
2、根据第一方面，本说明书涉及一种用于对液体介质中包含所述活微生物的试样样品中含有的活微生物数量计数的方法，其中所述方法包括：
3、提供至少第一基底；
4、用一定体积的所述试样样品填充容器；
5、将所述试样样品推出所述容器，以产生预定体积的液滴，所述预定体积的液滴通过重力脱离并落在所述至少第一基底上；
6、相对于所述至少第一基底移动所述容器，同时将所述试样样品推出所述容器，以将至少第一多个所述液滴滴在所述至少第一基底上；
7、在预定的温育期之后，从在所述至少第一基底上发展出的活微生物集落中确定试样样品中活微生物的初始浓度。
8、与现有技术的方法相比，在根据本说明书的对活微生物数量计数的方法中，试样样品在基底上的沉积是非接触的，这意味着容器和基底之间不需要接触，并且可以使用标准容器作为注射器来进行。此外，通过与容器和基底的相对位移同步地滴下预定体积的试样样品的液滴，可以实现对试样样品在基底上的沉积的完美控制。
9、在本说明书中，注射器被理解为用于流体、液体或气体的容器，并且通常包括其中精确控制流体量的容纳装置(容纳件)和位于容纳装置末端的针。容纳装置中的流体可以通过不同的机制吸入或排出，诸如合适活塞的作用或控制容纳装置(vessel)内压力的泵的作用。
10、根据一种或其他实施方式：
11、试样样品的液体介质包括适于从试样样品中包含的所述活微生物中发展出活微生物集落的营养介质；
12、所述至少第一基底是非润湿固体基底，使得所述第一多个液滴的液滴在所述至少第一基底上产生至少第一多个分离液滴的图案(点阵)；并且
13、从没有发展出集落的空液滴的数量和所述至少第一基底上所述第一多个分离液滴的总数量之间的比率确定试样样品中活微生物的所述初始浓度。
14、在这种方法中，不再通过确定集落数量来进行试样样品中活微生物初始浓度的确定，而是通过确定空液滴(即没有发展出集落的液滴)的数量来进行。这是通过在基底上产生分离液滴而成为可能的，而不是像现有技术方法中的连续液体流那样。通过在试样样品沉积在基底上之前滋养试样样品并使用非润湿固体基底，可能产生分离液滴，而在根据现有技术的方法中，使用琼脂板，这阻止了沉积分离液滴的可能性。
15、非润湿固体基底可以包括玻璃或塑料。例如，它可以由所谓的培养皿制成，但其中没有生长培养基，诸如琼脂。
16、根据一种或其他实施方式，确定两个液滴之间的最小边缘间距离，从而防止相邻液滴之间融合。例如，两个液滴之间的最小边缘间距离为约1mm，更有利地为约2mm。
17、根据一种或其他实施方式，所述第一多个液滴包括最小数量大约50个液滴，有利地，最小数量大约150个液滴，以实现空液滴计数的更好的精度。
18、在一些实施方式中，第一多个液滴可以滴在多个非润湿固体基底上，从而实现更高数量的液滴和更好的精度。
19、根据一种或其他实施方式，所述图案是规则的二维图案。这种规则的二维图案实现了空液滴计数的更好的精度。例如，液滴可以位于二维规则网格的节点处。然而，其他图案也是可能的。
20、根据一种或其他实施方式，方法进一步包括在图案的相同位置处滴下多个液滴，以增加在所述至少第一基底上产生的所述第一多个分离液滴中的所述分离液滴的体积。
21、根据一种或其他实施方式，在所述至少第一基底的第一区域上产生所述第一多个分离液滴，并且方法进一步本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于对液体介质中包含活微生物的试样样品中含有的所述活微生物数量计数的方法，其中，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中：
3.根据权利要求2所述的方法，其中，两个液滴之间的最小边缘间距离(d)为约1mm，有利地为约2mm。
4.根据权利要求2至3中任一项所述的方法，其中，所述图案是规则的二维图案。
5.根据权利要求2至4中任一项所述的方法，进一步包括在所述图案的相同位置处滴下多个液滴，以增加在所述至少第一基底上产生的所述第一多个分离液滴中的所述分离液滴的体积。
6.根据权利要求2至5中任一项所述的方法，其中，在所述至少第一基底的第一区域上产生所述第一多个分离液滴，并且所述方法进一步包括在第二非润湿固体基底上或在所述至少第一基底的不同区域上产生至少第二多个分离液滴，其中所述第一多个分离液滴的分离液滴和所述第二多个分离液滴的分离液滴具有不同的体积。
7.根据权利要求2至6中任一项所述的方法，进一步包括在温育之后用UV光照射所述基底。
8.根据权利要求1所述的方法，其中：
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