治疗原发性高草酸尿症1型的体内慢病毒基因疗法制造技术

本发明专利技术涉及包含核酸的慢病毒载体(LV)，其中核酸包含转录单元，转录单元从5’至3’包含肝细胞特异性启动子，优选ET启动子，编码优化的丙氨酸‑乙醛酸和丝氨酸‑丙酮酸氨基转移酶蛋白(AGXT‑RHEAM)的核苷酸序列，土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)，优选突变的WPRE，和至少一种miRNA靶序列的至少一个拷贝，优选miRNA‑142。本发明专利技术的慢病毒载体还包含LV执行其功能所需的骨架元件，它们是以下各项中的至少一项：5’长末端重复序列(5’LTR)、引物结合位点(PBS)、psi包装信号、野生型HIV病毒的茎环4(SL4)区、Rev响应元件(RRE)、DNA瓣中央多聚嘌呤区(cPPT)和3’长末端重复序列(3’LTR)或其任何组合。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

本专利技术可包括基因疗法领域，特别是原发性高草酸尿症1型的治疗中。具体而言，本专利技术涉及用于基因疗法的慢病毒载体，其能够治疗原发性高草酸尿症1型。

技术介绍

1、原发性高草酸尿症1型(ph1)(omim#259900)是一种遗传性罕见的常染色体隐性代谢疾病。它是由agxt基因编码的丙氨酸:乙醛酸氨基转移酶(agt；ec 2.6.1.44)酶缺乏引起的。agt活性受限于人类肝脏过氧化物酶体。这种酶只在细胞内有活性，不分泌到细胞外空间。ph1的特点是肝脏中草酸盐产生过量。草酸盐是哺乳动物代谢的终产物，正常通过尿液排出。当大量产生时，由于在泌尿空间(尿石症)和肾组织(肾钙质沉着症)中形成的草酸钙(caox)的聚集，肾脏是首个受影响的器官，导致间质纤维化和肾衰竭。由于肾损伤，肾小球滤过率(gfr)降低，慢性肾脏疾病增加。最终，约60％的ph1患者在40岁时发展为终末期肾病。随后的全身性参与，以及广泛的caox沉淀，称为草酸中毒，使ph1患者的生命处于危险之中(cochat等人，2012；sas等人，2020年)。欧洲高草酸尿症联盟(http://www.oxal本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种包含核酸的慢病毒载体，其中所述核酸包含以下：

2.根据权利要求1所述的慢病毒载体，其中所述丙氨酸-乙醛酸和丝氨酸-丙酮酸氨基转移酶(AGXT-RHEAM)的氨基酸序列由SEQ ID NO:52组成。

3.根据权利要求1或2所述的慢病毒载体，其中所述工程化肝细胞特异性启动子的核苷酸序列由SEQ ID NO:16组成。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的慢病毒载体，其中所述突变的优化的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)的核苷酸序列由SEQ ID NO:21组成。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的慢病毒载体，其中编码所述优化的...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种包含核酸的慢病毒载体，其中所述核酸包含以下：

2.根据权利要求1所述的慢病毒载体，其中所述丙氨酸-乙醛酸和丝氨酸-丙酮酸氨基转移酶(agxt-rheam)的氨基酸序列由seq id no:52组成。

3.根据权利要求1或2所述的慢病毒载体，其中所述工程化肝细胞特异性启动子的核苷酸序列由seq id no:16组成。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的慢病毒载体，其中所述突变的优化的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(wpre)的核苷酸序列由seq id no:21组成。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的慢病毒载体，其中编码所述优化的丙氨酸-乙醛酸和丝氨酸-丙酮酸氨基转移酶(agxt-rheam)蛋白的核苷酸序列由seq id no:29组成。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的慢病毒载体，其中所述至少一种mirna靶序列的至少一个拷贝由mirna-142-3的靶序列的四个拷贝组成，所述mirna-142-3的靶序列与seqid no:22的全长具有至少95％、优选98％的序列同一性。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的慢病毒载体，其中所述核酸还包含以下：

8.根据权利要求1至7中任一项所述的慢病毒载体，其中包含在所述慢病毒载体中的核苷酸还包含：

9.根据权利要求1至8中任一项所述的慢病毒载体，其中所述慢病毒的全长核...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·C·塞戈比亚·桑斯，M·加西亚·布拉沃，A·莫利诺·维森特，A·加西亚·托拉尔巴，V·尼托·罗梅罗，
申请(专利权)人：能源环境和技术研究中心OAMP，
类型：发明
国别省市：