【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及抗体所键合的糖链的分析方法。
技术介绍
1、抗体上不均匀地键合有结构多样化的糖链，其糖链的种类、比例会对抗体的功能、效力造成影响。因此，对抗体上所键合的糖链加以分析非常重要。
2、作为这样的分析方法，以往一直使用如下方法：将从抗体切下的糖链进行荧光标记化，利用高效色谱进行分析(荧光hplc法)(非专利文献1)。近年来，报道了使用基质辅助激光解吸电离质谱分析法、气相色谱-质谱分析法等的糖链分析方法(非专利文献2)。另外，作为灵敏度非常高的分析方法，报道了毛细管电泳-质谱分析法(非专利文献3)。
3、现有技术文献
4、非专利文献
5、非专利文献1:mabs 7:1,167-179；january/february 2015；published withlicense by taylor&francis group,llc
6、非专利文献2:nature protocols,2007vol.2no.7 1585-1602.
7、非专利文献3:nature communications 2019 10:2137.
技术实现思路
1、专利技术要解决的问题
2、但是，非专利文献1、2的分析方法对于糖链浓度仅能检测到亚皮摩尔水平(例如0.03皮摩尔)，灵敏度不充分。另一方面，非专利文献3的分析虽然能够检测阿托摩尔水平的糖链，但是毛细管电泳的电泳条件设定琐细且困难。因此，作为高灵敏度的糖链分析
3、本专利技术的目的在于，提供简便且高灵敏度地分析抗体的糖链的方法。
4、用于解决问题的方案
5、本专利技术的第1方式的分析方法为对抗体上键合的糖链结构进行分析的方法，其具备：游离工序，对含有抗体的试样添加糖切割酶，使上述抗体上键合的糖链特异性地游离，得到游离糖链；回收工序，通过亲和纯化来回收上述游离糖链；疏水化工序，对上述游离糖链进行疏水化，得到疏水化糖链；和，测定工序，对上述疏水化糖链依次实施超临界液相色谱及串联质谱分析。
6、专利技术的效果
7、根据第1方式的分析方法，能够简便且高灵敏度地对抗体的糖链进行分析。
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1.对抗体上键合的糖链结构进行分析的方法，其具备：
2.根据权利要求1所述的分析工序，其中，所述测定工序包括分析工序，所述分析工序基于通过超临界液相色谱及串联质谱分析而得到的质谱分析数据对抗体上键合的糖链的结构进行分析。
3.根据权利要求1所述的分析方法，其中，所述超临界流体色谱中使用的固定相具有苯基。
4.根据权利要求1所述的分析方法，其中，在所述疏水化工序中，用疏水性化合物对所述游离糖链的羟基进行修饰。
5.根据权利要求1所述的分析方法，其中，所述疏水化为乙酰化。
6.根据权利要求1所述的分析方法，其中，在所述测定工序中，对通过所述超临界液相色谱的固定相后的游离糖链添加含有羧酸或其盐的有机溶剂，接着实施所述串联质谱分析。
7.根据权利要求1所述的分析方法，其中，在所述串联质谱分析中使用三重四极杆质谱分析仪。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.对抗体上键合的糖链结构进行分析的方法，其具备：
2.根据权利要求1所述的分析工序，其中，所述测定工序包括分析工序，所述分析工序基于通过超临界液相色谱及串联质谱分析而得到的质谱分析数据对抗体上键合的糖链的结构进行分析。
3.根据权利要求1所述的分析方法，其中，所述超临界流体色谱中使用的固定相具有苯基。
4.根据权利要求1所述的分析方法，其中，在所述疏水化工...
【专利技术属性】
技术研发人员：植田幸嗣，芳贺淑美，山田真希，
申请(专利权)人：公益财团法人癌研究会，
类型：发明
国别省市：
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