【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开涉及能够共表达t细胞受体(“tcr”)连同cd8多肽的t细胞及其在过继细胞疗法中的用途。本公开进一步提供经修饰的cd8序列、载体、组合物、转化的t细胞及其相关联的方法。专利技术背景cd8和cd4是不同t淋巴细胞群的跨膜糖蛋白特征，它们的抗原应答分别受i类和ii类mhc分子的限制。它们在胸腺发育期间t细胞的分化和选择中以及在响应于抗原呈递细胞的成熟t淋巴细胞的活化中均起主要作用。cd8和cd4两者均为免疫球蛋白超家族蛋白质。它们通过在与呈递抗原肽的区域不同的界面上结合至mhc分子来确定抗原限制，但它们相似的功能的结构基础似乎差异极大。它们的序列相似性低，并且cd4在细胞表面上作为单体表达，而cd8则作为αα同源二聚体(例如，图55c)或αβ异源二聚体(例如，图55a)表达。在人体内，该cd8αα同源二聚体可以在功能上取代cd8αβ异源二聚体。cd8接触i类mhc的α3结构域中的酸性环，从而增加t细胞对其靶标的亲合力。cd8还通过其α链胞质尾与酪氨酸激酶p56lck的缔合参与导致ctl活化的磷酸化事件。期望开发制造用于免疫疗法的具有增强的、特异性细胞毒活性的t细胞的方法。
技术介绍
技术实现思路
1、在一个实施例中，本文所述的cd8多肽可包含cd8α免疫球蛋白(ig)样结构域、cd8β区、cd8α跨膜结构域和cd8α胞质结构域。在另一个实施例中，cd8β区为cd8β柄区或结构域。
2、在一个实施例中，本文所述的cd8多肽可包含(a)免疫球蛋白(ig)样结构域，该免疫球蛋白样结构域
3、在一个实施例中，本文所述的cd8多肽与seq id no:5的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。
4、在一个实施例中，本文所述的cd8多肽与seq id no:7的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。
5、在一个实施例中，本文所述的cd8多肽可包含与融合至本文所述的cd8多肽的n末端或c末端的seq id no:6、seq id no:293或seq id no:294中任一者的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的信号肽。
6、在一个实施例中，本文所述的cd8多肽可包含(a)seq id no:1，该序列包含一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代；(b)seq id no:2，该序列包含一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代；(c)seq id no:3，该序列包含一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代；以及(d)seq id no:4，该序列包含一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代。
7、在一个实施例中，本文所述的cd8多肽可为cd8α或经修饰的cd8α多肽。
8、在一个实施例中，本公开提供了编码本文所述的多肽的核酸。
9、在一个实施例中，载体可包含编码本文所述的cd8多肽的核酸。
10、在一个实施例中，载体可包含编码包含α链和β链的t细胞受体(tcr)的核酸。在另一个实施例中，载体可包含编码car-t的核酸。
11、在一个实施例中，tcrα链和tcrβ链可选自以下各项：seq id no:15和16；17和18；19和20；21和22；23和24；25和26；27和28；29和30；31和32；33和34；35和36；37和38；39和40；41和42；43和44；45和46；47和48；49和50；51和52；53和54；55和56；57和58；59和60；61和62；63和64；65和66；67和68；69和70；71和303；304和74；75和76；77和78；79和80；81和82；83和84；85和86；87和88；89和90；以及91和92。
12、在一个实施例中，载体可包含编码cd8β多肽的核酸。
13、在一个实施例中，cd8β多肽可包含seq id no:8、9、10、11、12、13或14中任一者的氨基酸序列。
14、在一个实施例中，载体可包含位于编码经修饰的cd8α多肽的核酸与编码cd8β多肽的核酸之间的编码2a肽或内部核糖体进入位点(ires)的核酸。
15、在一个实施例中，载体可包含位于编码tcrα链的核酸与编码tcrβ链的核酸之间的编码2a肽的核酸。
16、在一个实施例中，2a肽可选自p2a(seq id no:93)、t2a(seq id no:94)、e2a(seqid no:95)或f2a(seq id no:96)。
17、在一个实施例中，ires可选自由以下各项组成的组：来自小核糖核酸病毒的ires、来自黄病毒的ires、来自瘟病毒的ires、来自逆转录病毒的ires、来自慢病毒的ires、来自昆虫rna病毒的ires和来自细胞mrna的ires。
18、在一个实施例中，载体可进一步包含选自以下各项的转录后调节元件(pre)序列：土拨鼠pre(wpre)及其变体、乙型肝炎病毒(hbv)pre(hpre)或它们的组合。
19、在一个实施例中，载体可进一步包含选自以下各项的启动子：巨细胞病毒(cmv)启动子、磷酸甘油酸激酶(pgk)启动子、髓鞘碱性蛋白(mbp)启动子、胶质纤维酸性蛋白(gfap)启动子、经修饰的包含骨髓增殖性肉瘤病毒增强子(mndu3)的momulv ltr、泛素c启动子、ef-1α启动子、鼠干细胞病毒(mscv)启动子或它们的组合。
20、在一个实施例中，载体可为病毒载体或非病毒载体。
21、在一个实施例中，载体可选自以下各项：腺病毒、痘病毒、甲病毒、沙粒病毒、黄病毒、弹状病毒、逆转录病毒、慢病毒、疱疹病毒、副黏病毒、小核糖核酸病毒或它们的组合。
22、在一个实施例中，载体可用选自以下各项的病毒的包膜蛋白假本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种分离的核酸，所述分离的核酸包含以下核酸序列，所述核酸序列编码：(a)包含α分离的链和β链的T细胞受体(TCR)以及包含α链和β链的CD8多肽，或(b)包含α链和β链的TCR以及包含α链而不包含β链的CD8多肽，其中TCRα链和TCRβ链选自SEQ ID NO:15和16、17和18、19和20、21和22、23和24、25和26、27和28、29和30、31和32、33和34、35和36、37和38、39和40、41和42、43和44、45和46、47和48、49和50、51和52、53和54、55和56、57和58、59和60、61和62、63和64、65和66、67和68、69和70、71和303、304和74、75和76、77和78、79和80、81和82、83和84、85和86、87和88、89和90以及91和92，其中CD8α链为SEQ ID NO:7、258、259、262或其变体，并且其中CD8β链为SEQ ID NO:8、9、10、11、12、13或14。
2.根据权利要求1所述的分离的核酸，其中所述TCRα链和所述TCRβ链选自SEQ ID
3.根据权利要求1或2所述的分离的核酸，其中所述核酸序列包含与SEQ ID NO:267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、295、297、299或301的核酸序列至少80％相同的核酸。
4.根据权利要求3所述的分离的核酸，其中所述核酸序列与SEQ ID NO:267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、295、297、299或301的核酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的分离的核酸，其中所述核酸包含SEQ ID NO:267的核酸序列。
6.根据权利要求1至4中任一项所述的分离的核酸，其中所述核酸包含SEQ ID NO:279的核酸序列。
7.一种分离的多肽，所述分离的多肽由根据权利要求1至6中任一项所述的核酸编码。
8.一种分离的多肽，所述分离的多肽包含与SEQ ID NO:268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、296、298、300或302的氨基酸序列至少约80％相同的氨基酸序列。
9.根据权利要求8所述的分离的多肽，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO:268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、296、298、300或302的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同。
10.根据权利要求7至9中任一项所述的分离的多肽，其中所述氨基酸包含SEQ ID NO:268的氨基酸序列。
11.根据权利要求7至9中任一项所述的分离的多肽，其中所述氨基酸包含SEQ ID NO:280的氨基酸序列。
12.一种载体，所述载体包含根据权利要求1至6中任一项所述的核酸。
13.根据权利要求12所述的载体，其中所述载体进一步包含位于编码所述CD8α链的核酸与编码所述CD8β链的核酸之间的编码2A肽或内部核糖体进入位点(IRES)的核酸。
14.根据权利要求12或13所述的载体，其中所述载体进一步包含位于编码所述TCRα链的核酸与编码所述TCRβ链的核酸之间的编码2A肽或IRES的核酸。
15.根据权利要求14所述的载体，其中所述2A肽为P2A(SEQ ID NO:93)、T2A(SEQ IDNO:94)、E2A(SEQ ID NO:95)或F2A(SEQ ID NO:96)。
16.根据权利要求12至15中任一项所述的载体，其中所述载体进一步包含选自以下各项的转录后调节元件(PRE)序列：土拨鼠PRE(WPRE)、土拨鼠PRE(WPRE)突变体1、土拨鼠PRE(WPRE)突变体2或乙型肝炎病毒(HBV)PRE(HPRE)。
17.根据权利要求16所述的载体，其中所述转录后调节元件(PRE)序列为包含SEQ IDNO:256的氨基酸序列的土拨鼠PRE(WPRE)突变体1。
18.根据权利要求16所述的载体，其中所述转录后调节元件(PRE)序...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种分离的核酸，所述分离的核酸包含以下核酸序列，所述核酸序列编码：(a)包含α分离的链和β链的t细胞受体(tcr)以及包含α链和β链的cd8多肽，或(b)包含α链和β链的tcr以及包含α链而不包含β链的cd8多肽，其中tcrα链和tcrβ链选自seq id no:15和16、17和18、19和20、21和22、23和24、25和26、27和28、29和30、31和32、33和34、35和36、37和38、39和40、41和42、43和44、45和46、47和48、49和50、51和52、53和54、55和56、57和58、59和60、61和62、63和64、65和66、67和68、69和70、71和303、304和74、75和76、77和78、79和80、81和82、83和84、85和86、87和88、89和90以及91和92，其中cd8α链为seq id no:7、258、259、262或其变体，并且其中cd8β链为seq id no:8、9、10、11、12、13或14。
2.根据权利要求1所述的分离的核酸，其中所述tcrα链和所述tcrβ链选自seq id no:15和16、57和58、59和60、61和62、63和64、65和66、67和68、69和70以及71和303。
3.根据权利要求1或2所述的分离的核酸，其中所述核酸序列包含与seq id no:267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、295、297、299或301的核酸序列至少80％相同的核酸。
4.根据权利要求3所述的分离的核酸，其中所述核酸序列与seq id no:267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、295、297、299或301的核酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的分离的核酸，其中所述核酸包含seq id no:267的核酸序列。
6.根据权利要求1至4中任一项所述的分离的核酸，其中所述核酸包含seq id no:279的核酸序列。
7.一种分离的多肽，所述分离的多肽由根据权利要求1至6中任一项所述的核酸编码。
8.一种分离的多肽，所述分离的多肽包含与seq id no:268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、296、298、300或302的氨基酸序列至少约80％相同的氨基酸序列。
9.根据权利要求8所述的分离的多肽，其中所述氨基酸序列与seq id no:268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、296、298、300或302的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同。
10.根据权利要求7至9中任一项所述的分离的多肽，其中所述氨基酸包含seq id no:268的氨基酸序列。
11.根据权利要求7至9中任一项所述的分离的多肽，其中所述氨基酸包含seq id no:280的氨基酸序列。
12.一种载体，所述载体包含根据权利要求1至6中任一项所述的核酸。
13.根据权利要求12所述的载体，其中所述载体进一步包含位于编码所述cd8α链的核酸与编码所述cd8β链的核酸之间的编码2a肽或内部核糖体进入位点(ires)的核酸。
14.根据权利要求12或13所述的载体，其中所述载体进一步包含位于编码所述tcrα链的核酸与编码所述tcrβ链的核酸之间的编码2a肽或ires的核酸。
15.根据权利要求14所述的载体，其中所述2a肽为p2a(seq id no:93)、t2a(seq idno:94)、e2a(seq id no:95)或f2a(seq id no:96)。
16.根据权利要求12至15中任一项所述的载体，其中所述载体进一步包含选自以下各项的转录后调节元件(pre)序列：土拨鼠pre(wpre)、土拨鼠pre(wpre)突变体1、土拨鼠pre(wpre)突变体2或乙型肝炎病毒(hbv)pre(hpre)。
17.根据权利要求16所述的载体，其中所述转录后调节元件(pre)序列为包含seq idno:256的氨基酸序列的土拨鼠pre(wpre)突变体1。
18.根据权利要求16所述的载体，其中所述转录后调节元件(pre)序列为包含seq idno:257的氨基酸序列的土拨鼠pre(wpre)突变体2。
19.根据权利要求12至18中任一项所述的载体，其中所述载体进一步包含选自以下各项的启动子：巨细胞病毒(cmv)启动子、磷酸甘油酸激酶(pgk)启动子、髓鞘碱性蛋白(mbp)启动子、胶质纤维酸性蛋白(gfap)启动子、经修饰的包含骨髓增殖性肉瘤病毒增强子(mndu3)的momulv ltr、泛素c启动子、ef-1α启动子或鼠干细胞病毒(mscv)启动子。
20.根据权利要求12至19中任一项所述的载体，其中所述载体为病毒载体或非病毒载体。
21.根据权利要求20所述的载体，其中所述载体为病毒载体。
22.根据权利要求21所述的载体，其中所述病毒载体选自以下各项：腺病毒、痘病毒、甲病毒、沙粒病毒、黄病毒、弹状病毒、逆转录病毒、慢病毒、疱疹...
【专利技术属性】
技术研发人员：G·巴杰瓦，M·卡拉，M·马塔，
申请(专利权)人：伊玛提克斯美国公司，
类型：发明
国别省市：
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