评估病毒载体效力的方法技术

本公开涉及用一体积浓度的病毒载体转导的用于免疫疗法的T细胞及其方法。另一方面，本公开涉及用于转导T细胞的最佳慢病毒载体浓度的评估。本公开进一步提出了透过本文所述方法产生的T细胞群。

Methods for evaluating the efficacy of viral vectors

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】评估病毒载体效力的方法相关申请的交叉引用这是专利合作条约下的国际申请，要求享有2018年1月17日提交的美国临时申请序列号62/618,295和2018年1月17日提交的德国申请102018100967.4的权益，其内容是本文通过引用整体并入。背景1.
本公开涉及用一体积浓度的病毒载体转导的用于癌症免疫疗法的T细胞及其方法。一方面，本公开涉及用于转导T细胞的最佳慢病毒载体浓度的评估。另一方面，本公开进一步提出了透过本文所述方法产生的T细胞群。2.技术背景藉由治疗目的用之病毒载体或病毒递送基因的挑战是临床剂型的制备和精确定量。病毒疫苗、使用病毒载体的重组蛋白和病毒抗原的生产都需要量化病毒来不断调整和监测过程，以优化产量并回应不断变化的需求和应用。病毒滴度测定或病毒定量涉及计数特定体积的病毒数量以确定病毒浓度。传统方法包括病毒噬斑测定(确定病毒样本中噬斑形成单位(pfu)的数量)和组织培养感染剂量(TCID50)或荧光活性感染剂量(FAID50)(测量感染性病毒滴度)。该TCID50测定法可定量杀死50％受感染宿本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.权利要求内容为： /n一种转导用于免疫治疗之T细胞的方法，包括/n(a)从至少一个个体中获得T细胞，/n(b)用抗CD3抗体和抗CD28抗体激活T细胞，/n用多个体积浓度的病毒载体转导活化的T细胞，/n(c)扩增转导的T细胞，/n(d)测量在多个体积浓度下表达转基因的扩增T细胞的数量和/或每个扩增T细胞中整合转基因的拷贝数，/n(e)确定体积浓度，其产生最大平均数量的表达转基因的扩增T细胞和/或在来自至少一个个体的每个扩增T细胞中不超过五个拷贝的整合转基因之最大平均拷贝数的整合转基因，以及/n(f)以确定的体积浓度用病毒载体转导来自至少一个个体的T细胞以用于免疫治疗。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180117 DE 102018100967.4;20180117 US 62/618,2951.权利要求内容为：
一种转导用于免疫治疗之T细胞的方法，包括
(a)从至少一个个体中获得T细胞，
(b)用抗CD3抗体和抗CD28抗体激活T细胞，
用多个体积浓度的病毒载体转导活化的T细胞，
(c)扩增转导的T细胞，
(d)测量在多个体积浓度下表达转基因的扩增T细胞的数量和/或每个扩增T细胞中整合转基因的拷贝数，
(e)确定体积浓度，其产生最大平均数量的表达转基因的扩增T细胞和/或在来自至少一个个体的每个扩增T细胞中不超过五个拷贝的整合转基因之最大平均拷贝数的整合转基因，以及
(f)以确定的体积浓度用病毒载体转导来自至少一个个体的T细胞以用于免疫治疗。


2.权利要求1所述的方法，其中病毒载体是表达T细胞受体(TCR)的逆转录病毒载体。


3.权利要求1或2所述的方法，其中病毒载体是表达TCR的慢病毒载体。


4.权利要求1-3任一项中所述的方法，其中多个体积浓度选自由每0.5ml转导混合物含约0.01μl至约1ml、每1.0ml转导混合物含约0.01μl至约1ml、每2.5ml转导混合物含约0.01μl至约1ml、和每5ml转导混合物含约0.01μl至约1ml组成的群。


5.权利要求4所述的方法，其中转导混合物包含细胞浓度为约0.1x106个细胞/ml至约1.0x106个细胞/ml、约0.5x106个细胞/ml至约1.0x106个细胞/ml、约1.0x106个细胞/ml至约1.0x107个细胞/ml、约5.0x106个细胞/ml至约1.0x107个细胞/ml、约1.0x107个细胞/ml至约1.0x108个细胞/ml或约5.0x107个细胞/ml至约1.0x108个细胞/ml。


6.权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述T细胞获自多个健康个体。


7.权利要求1-6中任一项所述的方法，包括扩增转导的T细胞。


8.权利要求1-7中任一项所述的方法，其中确定在来自至少一个个体的扩增T细胞中产生最大平均数量的表达转基因的转导T细胞的体积浓度。


9.权利要求1-8中任一项所述的方法，其中确定在来自至少一个个体的扩增T细胞中产生最大平均拷贝数的整合转基因的体积浓度。


10.权利要求1-9中任一项所述的方法，其中确定的体积浓度为选自由每0.5ml转导混合物含约1μl至约50μl、每0.5ml转导混合物含约5μl至约15μl、和每0.5ml转导混合物含约8μl至约12μl组成的组。


11.权利要求1-10中任一项所述的方法，其中待治疗的个体是癌症患者。


12.权利要求11所述的方法，其中所述癌症选自由肝细胞癌(HCC)、结直肠癌(CRC)、胶质母细胞瘤(GB)、胃癌(GC)、食道癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、胰腺癌(PC)、肾细胞癌(RCC)、良性前列腺增生(BPH)、前列腺癌(PCA)、卵巢癌(OC)、黑色素瘤、乳腺癌、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、梅克尔细胞癌(MCC)、小细胞肺癌(SCLC)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性骨髓性白血病(AML)、胆囊癌和胆管癌(GBC、CCC)、膀胱癌(UBC)、急性淋巴母细胞白血病(ALL)和子宫癌(UEC)组成的组。


13.权利要求1-12中任一项所述的方法，其中从所述至少一个供体、患者或个体获得的T细胞是CD8+T细胞。


14.一种治疗患者的方法，包括给予患者以体积浓度病毒载体转导的T细胞，
其中T细胞从患者身上获得，
其中体积浓度由以下确定：
(a)从多个健康供体获得T细胞，
(b)用抗CD3抗体和抗CD28抗体激活步骤(a)中获得的T细胞，用多个体积浓度的病毒载体转导活化的T细胞，
(c)扩增步骤(b)中获得的转导T细胞，
(d)测量在多个体积浓度下表达转基因的扩增T细胞的数量和/或在步骤(c)中获得的每个扩增T细胞中整合转基因的拷贝数，
(e)确定体积浓度，其产生最大平均数量的表达转基因的扩增T细胞和/或步骤(d)中测量的不超过五个拷贝的整合转基因之最大平均拷贝数的整合转基因，以及
(f)以步骤(e)所确定的体积浓度用病毒载体转导从患者中获得的T细胞。


15.权利要求14所述的方法，其中病毒载体是表达T细胞受体(TCR)的逆转录病毒载体。


16.权利要求14或15所述的方法，其中病毒载体是表达TCR的慢病毒载体。


17.权利要求14-16任一项中所述的方法，其中多个体积浓度选自由每0.5ml转导混合物含约0.01μl至约1ml、每1.0ml转导混合物含约0.01μl至约1ml、每2.5ml转导混合物含约0.01μl至约1ml、和每5ml转导混合物含约0.01μl至约1ml组成的群。


18.权利要求17所述的方法，其中转导混合物包含细胞浓度为约0.1x106个细胞/ml至约1.0x106个细胞/ml、约0.5x106个细胞/ml至约1.0x106个细胞/ml、约1.0x106个细胞/ml至约1.0x107个细胞/ml、约5.0x106个细胞/ml至约1.0x107个细胞/ml、约1.0x107个细胞/ml至约1.0x108个细胞/ml或约5.0x107个细胞/ml至约1.0x108个细胞/ml。

<...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·卡拉，A·勃艮第，A·穆罕默德，S·沃尔特，
申请(专利权)人：伊玛提克斯美国公司，
类型：发明
国别省市：美国;US