无血清无蛋白细胞培养基制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体来说是一种无血清无蛋白细胞培养基；本发明专利技术的目的是提供一种适合于多种不同细胞生长的无血清无蛋白培养基；其具体技术方案包括氨基酸，维生素，无机盐和微量元素，碳水化合物和其它化学物的成分；本发明专利技术无血清无蛋白细胞培养基制作成本低廉，批次间的质量稳定，活细胞密度和细胞存活率较高，适用于用于重组蛋白和疫苗生产的细胞。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体来说是一种无血清无蛋白细胞培养基。
技术介绍
动物细胞已被广泛用于重组蛋白药物和疫苗的生产，培养基是动物细胞大规模培养的关键技术。用传统的培养基培养细胞，需要在传统培养基中加入5-10％的血清。血清价格昂贵，容易被病毒和支原体感染，每批次间的质量存在差异，血清中含有大量的蛋白质，给重组蛋白细胞产品的分离纯化带来很大的困难。为了克服以上难题，科学家们对血清中各成分在细胞培养中的作用的研究发现，血清中的胰岛素，转铁蛋白和其他生长因子是促进细胞生长的主要成分，研发出用胰岛素、转铁蛋白和其他生长因子替代血清的无血清培养基。由于这些生长因子主要是从血清中提取或者是用基因重组技术生产的，价格昂贵，每批次间的质量也存在差异，大大地限制了此类无血清培养基的大规模生产应用。基于此，无血清无蛋白培养基的研究就成为细胞培养领域中的一项重要课题。无血清无蛋白培养基使培养基的所有成分可以完全实现使用成分界定的无动物源的化学物，保证培养基批次间的质量稳定，大大降低生产成本，简化下游分离纯化的步骤，避免外源传染性海绵状脑病，外源病毒和外源支原体的污染，实现大规模的生产应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种适合于多种不同细胞生长的无血清无蛋白培养基。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：无血清无蛋白细胞培养基，包括氨基酸，维生素，无机盐和微量元素，碳水化合物和其它化学物的成分，所述微量元素尤其包含锌盐和螯合铁。进一步的：所述氨基酸的成分及其在每升培养基中的含量如下：进一步的：所述维生素的成分及其在每升培养基中的含量如下：进一步的：所述无机盐和微量元素的成分及其在每升培养基中的含量如下：进一步的：所述碳水化合物和其它化学物的成分及其在每升培养基中的含量如下：进一步的：所述微量元素中还含有以下3种鋅盐中的任何一种或几种：I.盐酸鋅(ZnCl2)，II.硫酸鋅(ZnSO4-7H2O)，III.硝酸鋅[Zn(NO3)2-6H2O]，其在每升培养基中的含量分别如下:ZnCl21–100μMZnSO4-7H2O1–100μMZn(NO3)2-6H2O1–100μM进一步的：所述微量元素中还含有以下3种螯合铁中的任何一种或几种：I.柠檬酸铁铵(FerricammoniumcitrateorAmmoniumiron(III)citrate)，II.柠檬酸铁(Ferriccitrateoriron(III)citrate)，III.乙二胺四乙酸铁钠盐(EthylenediaminetetraaceticacidIron(III)sodiumsalt)，其在每升培养基中的含量分别如下：柠檬酸铁铵1–500mg/L柠檬酸铁1–500μM乙二胺四乙酸铁钠盐1–500μM进一步的：所述无血清无蛋白细胞培养基还含有脂类和脂类载体。进一步的：所述脂类的成分及其在每升培养基中的含量如下：胆固醇1–20mg/L所述脂类载体是甲基-β-环糊精，其在每升培养基中的含量为1–5000mg/L。本专利技术的有益技术效果是：本专利技术无血清无蛋白细胞培养基所有成分都是化学界定的并且都来自无动物源的化学物。本专利技术无血清无蛋白细胞培养基使用后活细胞密度和细胞成活率明显效果优异，适用于用于重组蛋白和疫苗生产的细胞，尤其是CHO，NS0，Sp2/0，PerC.6，Cap，BHK，HEK293，Expi293，HT1080，Hela，MDCK，Vero细胞，可以很好的提高重组蛋白和疫苗生产的稳定性，降低生产成本，减少污染风险。具体实施方式下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1：无血清无蛋白细胞培养基，包括氨基酸，维生素，无机盐和微量元素，碳水化合物和其他化学物，具体成分浓度含量如下所示：氨基酸的成分及其在每升培养基中的含量：维生素的成分及其在每升培养基中的含量：无机盐和微量元素的成分及其在每升培养基中的含量：其它微量元素及其在每升培养基中的含量：ZnCl21–100μM或者ZnSO4-7H2O1–100μM或者Zn(NO3)2-6H2O1–100μM其它微量元素及其在每升培养基中的含量：柠檬酸铁铵1–500mg或者柠檬酸铁1–500μM或者乙二胺四乙酸铁钠盐1–500μM碳水化合物和其它化学物的成分及其在每升培养基中的含量：实施例2：无血清无蛋白细胞培养基，其具体成分浓度含量如下所示：氨基酸浓缩液：维生素浓缩液：无机盐：微量元素浓缩液：CuSO4-7H2O124.84mg/LMnCl2-4H2O98.955mg/LNa2SeO317.294mg/L其它微量元素浓缩液：ZnCl268.15mg/L或者ZnSO4-7H2O143.78mg/L或者Zn(NO3)2-6H2O148.745mg/L其它微量元素浓缩液：柠檬酸铁铵1g/L或者柠檬酸铁244.94mg/L或者乙二胺四乙酸铁钠盐367.05mg/L碳水化合物和其它化学物：其它化学物浓缩液：次黄嘌呤1.361g/L胸腺嘧啶脱氧核苷242.23mg/L其它化学物浓缩液：氯化胆碱2g/L肌醇500mg/L氯化乙醇胺100mg/L上述实施例2中无血清无蛋白细胞培养基，其具体制备方法为:步骤1：培养基配制，将无血清无蛋白细胞培养基的成分按照不同的组分配制成不同的浓缩液，10倍的氨基酸浓缩液：200倍的维生素浓缩液：1000倍的微量元素浓缩液：CuSO4-7H2O124.84mg/LMnCl2-4H2O98.955mg/LNa2SeO317.294mg/L100倍其它微量元素浓缩液：ZnCl268.15mg/L或者ZnSO4-7H2O143.78mg/L或者Zn(NO3)2-6H2O148.745mg/L100倍其它微量元素浓缩液：柠檬酸铁铵1g/L或者柠檬酸铁244.94mg/L或者乙二胺四乙酸铁钠盐367.05mg/L1倍碳水化合物和其它化学物：100倍其它化学物浓缩液：次黄嘌呤1.361g/L胸腺嘧啶脱氧核苷242.23mg/L100倍其它化学物浓缩液:氯化胆碱2g/L肌醇500mg/L氯化乙醇胺100mg/L步骤2：将以上成分按1倍的用量加入到含有500ml去离子水的1L烧杯中并混匀，再加入去离子水定容至1L；步骤3：用5NNaOH或者5NHCl调节pH至7.30，用NaCl调节渗透压至295mOsm/L；步骤4：:用0.22μM的过滤膜除菌。本实施例无血清无蛋白细胞培养基尤其适用于HEK293细胞，本实施例HEK293细胞在不同配方的无血清无蛋白细胞培养基中的批次悬浮培养及其实验数据见表1和表2。培养条件和实验方法：在125ml的振荡培养瓶中分别加入30ml不同配方的无血清无蛋白细胞培养基，放入37℃含有5％二氧化碳的培养箱中，以每分钟120转摇床培养6天，每天取样用Trypanblue血球计数法记录活细胞密度(x10E6cells/ml)和细胞存活率(％)。表1:表2:实施例3：无血清无蛋白细胞培养基及其制备方法，具体如下：步骤本文档来自技高网...

【技术保护点】
无血清无蛋白细胞培养基，其特征在于，包括氨基酸，维生素，无机盐和微量元素，碳水化合物和其它化学物的成分，所述微量元素尤其包含锌盐和螯合铁。

【技术特征摘要】
1.无血清无蛋白细胞培养基，其特征在于，包括氨基酸，维生素，无机盐和微量元素，碳水化合物和其它化学物的成分，所述微量元素尤其包含锌盐和螯合铁。2.根据权利要求1所述的无血清无蛋白细胞培养基，其特征在于，所述氨基酸的成分及其在每升培养基中的含量如下：。3.根据权利要求1所述的无血清无蛋白细胞培养基，其特征在于，所述维生素的成分及其在每升培养基中的含量如下：。4.根据权利要求1所述的无血清无蛋白细胞培养基，其特征在于，所述无机盐和微量元素的成分及其在每升培养基中的含量如下：。5.根据权利要求1所述的无血清无蛋白细胞培养基，其特征在于，所述碳水化合物和其它化学物的成分及其在每升培养基中的含量如下：。6.根据权利要求1—5任一种所述的无血清无蛋白细胞培养基，其特征在于，所述微量元素中还含有以下3种鋅盐中的任何一种或几种：I.盐酸鋅(ZnCl2)，II.硫酸鋅(ZnSO4-7H2O)，III.硝酸鋅[Zn(NO3)2-6H2O]，其在每升培养基中的含量分别如下:ZnCl21–100μMZnSO4-7H2O1–100...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈少军，陈少敏，
申请(专利权)人：昆明润什生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：云南;53