多功能抗体缀合物制造技术

本发明专利技术涉及多功能抗体缀合物类(MAC)，其包含抗体或其抗原结合部分及接头，所述抗体或其抗原结合部分包含至少轻链κ恒定区(CLκ)的片段，所述片段包含根据Kabat编号的K188，且所述接头包含式X-Y-Z，其中Z是通过K188的侧链与所述抗体共价连接的基团，Y是线性或分支的生物相容性连接链且X是与至少一个效应物部分共价连接的基团。本发明专利技术另提供本发明专利技术的特定MAC化合物及组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多功能抗体缀合物
技术介绍
发展双功能治疗剂具有放大组合式治疗策略的高度潜力。双功能治疗剂可通过ー种治疗实体调节ニ种不同的途径以提供组合式治疗的好处。此外，双功能治疗剂亦可从不同途径之间的协同性获得好处，且相较于单一功能剂显示増加的活性。另外，双功能治疗剂可提供減少制造、储存及运送成本方面的好处，同时减少给予病患的治疗剂数量及简化给药方案。IGFlR是跨膜异四聚体蛋白质，其具有呈ニ硫键接的-a-a-￠)构型的2个胞外a链及2个跨膜P链。IGFlR以高亲和力与IGFl结合。IGFl是70个氨基酸的肽，其主要由肝脏应答生长激素的刺激而生产，但亦可由身体内的几乎任何组织合成并以100至200纳克/毫升的浓度于血清中循环。IGFlR信号转导可能与许多肿瘤类型有夫，特别是肺癌。举例来说，IGFl的血浆量升高是与肺癌的风险增加有关。此外，IGF1、IGF2及IGFlR是由正常肺细胞表达，但由肺癌细胞过表达。IGFlR信号转导亦已被认为与乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌、肉瘤、多发性骨髓瘤及其它恶性病有夫。W002053596、W02005016967、W02005005635及TO2009032145掲示IGFlR抗体及其抗原结合部分。血管生成素I(Angl)及血管生成素2 (Ang2)是内皮细胞受体Tie2的配体，和VEGF及其它血管生成调节剂一起介导血管生成的过程。Angl刺激Tie2的磷酸化，吸引周细胞至新形成的血管并促进周细胞的成熟。已知Ang2具有血管生成性且在许多癌中过表达。Ang2与Angl竞争与Tie2的结合，促进周细胞的脱离并导致不稳定的血管。当VEGF及其它血管生成因子存在时，在这些不稳定血管中的内皮细胞增生并迁移以形成新血管。大约50%的实体肿瘤病患具有增加表达的Ang2，但Ang2于癌组织中的量是高度可变。较高的Ang2表达与不良存活、较晚期疾病和更具侵入性的癌明显相关。Angl和Ang2间的较低的比值已知亦与卵巣癌的不良预后有夫。报告指出Tie2于肝细胞癌、星状细胞瘤、卡波西氏肉瘤、皮肤血 管肉瘤及非小细胞肺癌中的表达被上调。Tie2过表达于许多肿瘤的血管上。表达Tie2的单核细胞导致肿瘤血管的形成。新发表的数据显示特别隔离Ang2可抑制肿瘤生长并造成分期肿瘤的消退。W02008056346掲示Ang2结合肽。在同一治疗中靶向IGFlR及Ang2 二者可能经证实为肿瘤学家在多种治疗设置中使用的有效工具。该等方法已被假设(例如于W02009088805及W02010040508)，但到目前为止尚未有被证实。因此有需要提供以IGR-1R及Ang2 二者为目标的选择性肿瘤治疗。在本说明书中提及任何技术并不是也不应被视为以任何形式承认或建议提及的技术形成普通一般知识的部分。专利技术概述本专利技术提供多功能抗体缀合物(MAC)，该MAC包含与至少ー个效应物部分(Effector Moiety)缀合的抗体或其抗原结合部分,及该MAC的药用可接受的盐、立体异构体、互变异构体、溶剂合物和前药。本专利技术亦提供包含本专利技术的MAC的药物组合物及样品。本专利技术亦提供多功能抗体缀合物(MAC)，该MAC包含与至少ー个Ang2结合肽缀合的抗体或其抗原结合部分。本专利技术提供多功能抗体缀合物(MAC)，该MAC包含与至少ー个Ang2结合肽缀合的抗IGFlR抗体或其抗原结合部分。在一些实施方案中，该至少ー个Ang2结合肽通过接头与抗体的缀合残基的侧链全ヌヌム ロ o在一些实施方案中，效应物部分与抗体或其抗原结合部分的Fab区中的赖氨酸残基的侧链共价连接。在一些实施方案中，效应物部分与重链恒定区(CH)或轻链恒定区(CL)中的赖氨酸残基的侧链共价连接。效应物部分与抗体的CL结构域的反应是特别期望的，以最小化或防止对该抗体的Fe部分与Fe受体(诸如Fe Y R及FcRn)的结合或该抗体与其个别靶的结合的任何干扰。相反地，个别效应物部分与抗体的Fe部分的缀合可能降低该抗体于活体内的半衰期和/或其与该免疫系统相互作用的能力(效应物功能)。效应物部分于抗体的重链可变区(VH)或轻链可变区(VL)中的缀合带来减少该抗体与其同源物结合的风险。在一些实施方案中，效应物部分是与轻链K恒定区(CLk)结构域中的赖氨酸残基的侧链共价连接。效应物部分与CL K结构域的优先缀合通过允许该抗体的CH结构域的同种型转换且不影响该效应物部分与该抗体的缀合部位而简化该MAC同种型的产生。效应物部分可与轻链K结构域恒定区(CLk) (SEQ ID NO: 15,SEQ ID NO:45,SEQID N0:46或SEQ ID NO:47)的K8tl(根据Kabat编号的K188)的侧链共价连接。在一些实施方案中，效应物部分是与SEQ ID NO: 15的K8q共价连接。SEQ ID NO: 15的K8q是位于抗体的重要区域以外,诸如互补位区、FcRn结合结构域、绞链区、FcR结合结构域；这提供好处，即优先地连接这些部位限制当MAC与效应物部分缀合时对抗体-抗原相互作用的干扰量。在某些方面中， 效应物部分与基序K*HK的K*共价连接。该K*HK基序的K*可对应SEQ ID勵:15的1(8°。在某些方面中，效应物部分与位于CL K区的基序K188H的K188共价连接(根据Kabat编号系统)。在某些方面中，CLk区包含SEQ ID NO: 15、45、46或47的至少残基62至103。在某些方面中，CLk区包含SEQ ID NO: 15、45、46或47。在某些方面中，CL K区包含SEQ ID NO: 15的至少残基62至103。在某些方面中，CLk区包含SEQ ID N0:15。在某些方面中，CLk区包含SEQ ID NO:45的至少残基62至103。在某些方面中，CL K区包含SEQ ID NO:45。在某些方面中，CL K区包含SEQ ID NO:46的至少残基62至103。在某些方面中，CL K区包含SEQ ID NO:46。在某些方面中，CLk区包含SEQ ID NO:47的至少残基62至103。在某些方面中，CLk区包含SEQ ID NO:47。在某些方面中，CLk区包含SEQ ID N0:45或47。-CLk区包含部分或完整的SEQ ID NO:45 或 47，X82 可选自 K、R、G、A、V、L、1、S、T、C、M、N、Q、D、E、H、F、W 或 Y。在某些方面中，X82可为G、A、V、L或I。在某些方面中，X82可为K、R、N或Q。在某些方面中，x82可为D或E。在某些方面中，X82可为K、R、G、A、V、L、1、N或Q。在某些方面中，x82可为D或E。在某些方面中，乂82可为1(、1 、6、4、￥、し1、队0、0或￡。在某些方面中，X82可为D或E。在某些方面中，X82可为H、F、W或Y。在某些方面中，X82不是脯氨酸。在某些方面中，(SEQID勵:15、45、46和/或47的)乂82是1 。在某些方面中，K19c1-CL k是R。SEQ ID NO: 45及47包含在CL k中鉴别的多态性；V/A153及L/V191 (根据Kabat编号)。因此，该三种多态性是:Km(I):V153/L191、Km(l，2):A153/L191、及 Km 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.07.12 US 61/363,5071.种多功能抗体缀合物(MAC)及其药用可接受的盐、立体异构体、互变异构体、溶剂合物和前药，所述多功能抗体缀合物包含 (i)抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分包含至少轻链K恒定区(CLk)的片段，所述片段包含根据Kabat编号的K188 ； (ii)接头，其包含式X-Y-Z，其中Z是通过K188的侧链与所述抗体共价连接的基团，Y是线性或分支的生物相容性连接链，且X是与至少ー个效应物部分共价连接的基团。2.利要求1的MAC,其还包含H189-CLK。3.述权利要求中任ー项的MAC，其还包含D151-CLK。4.述权利要求中任ー项的MAC，其中所述CLK区包含SEQ IDNO:15,SEQ ID NO: 45、SEQ ID N0:46 或 SEQ ID NO:47 的至少残基 62 至 103。5.述权利要求中任ー项的MAC，其中所述CLK区包含SEQ IDNO:15,SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO:46 或 SEQ ID NO:47 的至少残基 I 至 106。6.述权利要求中任ー项的MAC，其中所述效应物部分仅与所述MAC在K188CLk处缀ムロ o7.利要求1-5中任ー项的MAC，其中所述效应物部分与所述MAC在至少一条轻链上的K188CL K处和所述抗 体上的另一位置处缀合。8.利要求1-5中任ー项的MAC，其中所述效应物部分与所述MAC在至少一条轻链上的K188CL K处和所述抗体上的另两个位置处缀合。9.述权利要求中任ー项的MAC，其中所述效应物部分与两条轻链上的CLK K188缀合。10.利要求1-8中任ー项的MAC，其中所述效应物部分仅与一条轻链上的CLK K188缀ムロ o11.述权利要求中任ー项的MAC，其中所述效应物部分是治疗剂、蛋白质、肽、核酸、适体、小分子、蛋白质激动剂、蛋白质拮抗剂、代谢调节剂、激素、毒素、生长因子或诊断剂。12.述权利要求中任ー项的MAC，其中所述至少一个效应物部分是蛋白质或肽。13.利要求12的MAC，其中所述接头的X基团与所述蛋白质或肽的氨基端、羧基端或肽连接残基的侧链共价连接。14.利要求13的MAC，其中所述肽连接残基选自K、R、C、T、Y、S、Dap、Dab、K(SH)、K的同系物和C的同系物。15.利要求14的MAC，其中所述连接残基是K。16.述权利要求中任ー项的MAC，其中Y、X-Y、Y-Z或X-Y-Z选自:17.述权利要求中任ー项的MAC，其包含下式:18.述权利要求中任ー项的MAC，其中所述接头的整体长度不超过150个原子。19.利要求18的MAC，其中所述接头的整体长度不超过100个原子。20.利要求19的MAC，其中所述接头的整体长度不超过60个原子。21.述权利要求中任ー项的MAC，其中所述抗体选自利妥昔单抗、西妥昔单抗、英利昔单抗、阿达木单抗、那他珠单抗、奥马珠单抗、雷珠单抗和帕利珠单抗。22.利要求1-20中任ー项的MAC，其中所述抗体是催化醛缩酶抗体。23.利要求22的MAC，其中所述抗体是全长抗体、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、dsFv、scFv、Vh、双价抗体或微型抗体，其包含来自h38c2的Vh及\结构域。24.利要求22的MAC，其中所述抗体包含SEQID NO:51及SEQ IDNO:52，或SEQ IDNO:53 及 SEQ ID NO:54。25.利要求1-19中任ー项的MAC，其中所述抗体包含:含有SEQIDNO: 5的HC区、含有 SEQ ID NO: 6 的 VH 区、含有 SEQ ID NO: 16 的 VL 区及含有 SEQ ID NO: 15,SEQ ID NO: 45、SEQ ID N0:46 或 SEQ ID N0:47 之一的 CL 区。26.利要求25的MAC，其中所述抗体包含SEQID N0:3及SEQ IDN0:4。27.述权利要求中任ー项的MAC，其中所述效应物部分是Ang2结合肽。28.述权利要求中任ー项的MAC，其中所述Ang2结合肽包含选自SEQID NO: 26,SEQID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ IDNO:30, SEQ ID NO:31 和 SEQ ID NO:32 的序列。29.利要求28的MAC，其中所述Ang2结合肽包含SEQID N0:27。30.利要求29的MAC，其中所述肽连接残基是SEQID N0:27的K11。31.利要求30的MAC，其包含以下结构:32.种包含前述权利要求中任ー项的MAC的组合物，其中所述组合物或样品中至少约50%的效应物部分与K188-CL K缀合。33.利要求32的组合物，其中所述组合物或样品中至少约60%的效应物部分与K188-CL K 缀合。34.利要求32的组合物，其中所述组合物或样品中至少约70%的效应物部分与K188-CL K 缀合。35.利要求32的组合物，其中所述组合物或样品中至少约80%的效应物部分与K188-CL K 缀合。36.种包含权利要求1-31中任ー项的MAC的组合物，其中至少约50%的抗体包含与...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·S·巴特，C·W·布拉德肖，O·A·劳伦特，R·R·普雷斯顿，D·图梅尔蒂，L·D·伍德，W·H·于，A·李，
申请(专利权)人：CovX科技爱尔兰有限公司，
类型：
国别省市：