包含反义寡核苷酸的药物组合物及其使用方法技术

本发明专利技术提供了用于反义治疗遗传病、传染病以及多种其他医学疾病的组合物以及相关方法。具体地，本发明专利技术的实施方式是针对包含与带正电荷的聚合物结合的反义寡核苷酸化合物（“ON-PCP”）和带负电荷的聚合物的组合的药物组合物。与包含与带正电荷的聚合物结合的寡核苷酸化合物的组合物相比较，根据本发明专利技术的药物组合物已表现出提高的反义疗效和降低的细胞毒性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
对于遗传病、传染病以及其他紊乱，反义治疗是有前景的治疗形式，其中互补核酸(DNA、RNA或者化学类似物)的链用来结合到DNA或者RNA链(如信使RNA CmRNA))的目标序列上，从而激活目标基因。通过诱导突变基因中的外显子跳跃，反义治疗还用于恢复基因功能。在反义治疗上，寡聚物(包括天然寡核苷酸和化学修饰寡聚物)显示了特别的潜力。当前，正在研究寡聚物用于治疗癌症(包括肺癌、结肠癌、胰腺癌、恶性胶质瘤和恶性黑色素瘤)、糖尿病、ALS、迪谢内肌营养不良以及多种疾病(如具有炎症成分的哮喘和关节炎)。寡聚物在病毒和细菌感染的治疗中也显示出前景。使反义寡核苷酸化合物与带正电荷的聚合物结合已经显示增加了对于可以将这些分子导入细胞中的有效性。然而，与带正电荷的聚合物的结合与毒性增加联系在一起。在反义寡核苷酸的有效治疗窗接近LD50剂量(50%的实验动物死亡的剂量)的情况下，这是特别成问题的。因此，限制了反义寡核苷酸的使用。如此，仍然存在对于反义寡核苷酸给药的改善配制品的需要。
技术实现思路
本专利技术提供了用于反义治疗遗传病、传染病以及多种其他医学疾病的组合物以及相关方法。具体地，本专利技术的实施方式是针对包含与带正电荷的聚合物结合的反义寡核苷酸化合物(“ON-PCP”)和带负电荷的或者两性的聚合物的组合的药物组合物。与包含与带正电荷的聚合物结合的寡核苷酸化合物的组合物相比较，根据本专利技术的药物组合物表现出了提高的反义疗效和减少的细胞毒性。在一个具体实施方式中，本专利技术是针对包含与带正电荷的聚合物结合的反义磷酸二酰胺吗啉代寡聚物(PMO) (“PM0-PCP”)和带负电荷或者两性的聚合物的组合的药物组合物。可以使用的其他反义寡核苷酸包括肽核酸聚合物(PNA)。本专利技术的专利技术人惊奇地发现，通过使ON-PCP化合物与带负电荷的聚合物或者两性的聚合物结合，可以显著地降低通常与寡核苷酸并且特别地是与带正电荷的聚合物结合的PMO寡聚物的治疗相关联的细胞毒性。还意外地发现通过使用带负电荷的聚合物和与带正电荷的聚合物结合的寡聚物化合物结合，可以提高将反义寡核苷酸化合物(如PMO寡聚物)递送到目标RNA/DNA链上的效率。通常，普遍认为PMO-PCP或者PNA-PCP的有效性看起来与结合的聚合物的正电荷有联系，并且增强的递送是由于带正电荷的聚合物结合到细胞膜上。这样，常规的想法预测带负电荷的聚合物与ON-PCP的结合将导致中和了带正电荷的聚合物的增强效果。令人惊奇地，与预测相反，专利技术人发现通过使ON-PCP与带负电荷的聚合物结合，可以降低细胞毒性同时仍然提供增强的反义寡聚物化合物递送到细胞上。在一些实施方式中，发现带负电荷的聚合物与ON-PCP的组合实际上可以增强反义作用。根据本专利技术的药 物配制品可以用来治疗多种多样的医学疾病包括细菌和病毒感染、癌症、糖尿病和遗传病(如肌肉营养不良症)。在一个实施方式中，根据本专利技术的药物配制品可以用来治疗病毒感染如乙型肝炎、丙型肝炎、流感病毒、埃博拉病毒和马尔堡热。附图说明本专利或申请文件包括彩色制作的至少一个图。当提出要求并且支付必须的费用时，专利局可以提供具有彩图的本专利或专利申请公开的复本。现在参考附图(所述附图并非必须按比例绘制)，大体上描述本专利技术，其中:图1是正常小鼠的肌肉组织(C57)、对照营养不良的mdx肌肉(用对目标肌营养不良premRNA非特异性的混杂PPMO序列处理，从左起第二列)和用PPMO处理的mdx肌肉(从左起第三列)和用PPMO和DNA寡核苷酸配制品处理的mdx肌肉(右列)的免疫组织化学染色。PPMO相对于DNA的比例是4:1。在肌肉组织中红色的肌肉纤维膜染色表示肌营养不良蛋白表达,在未处理的mdx小鼠中缺少这种现象。标记为30mg/kg PPM0+DNA的右列显示在不同组织中肌营养不良蛋白诱导的水平与仅用PPMO处理的小鼠组织相同，或者明显地高于(在心脏中)仅用PPMO处理的相同组织(从左起第三列)。红色的膜染色表示肌营养不良蛋白。图2是在120mg/kg PPM0+DNA处理之后，在mdx小鼠组织中肌营养不良蛋白表达的免疫组织化学检测的图像。深红色的膜染色表明在所有肌肉中肌营养不良蛋白接近正常水平。在单次静脉注射PPM0/DNA配制品之后2周，检测组织。图3是比较带负电荷的聚合物结合到已经与带正电荷的多肽结合的寡聚物上的琼脂糖凝胶图像。图像表明PPMO、VivoPMO和富含精氨酸的肽(Arg肽)的核酸结合特性。VivoPMO最强地结合到二氧甲基 硫代磷酸酯RNA寡聚物(20MePS)上。PM0E23和PPM0E23是靶向小鼠肌营养不良蛋白外显子23的寡聚物序列。较低强度的条带是溴化乙锭染色的20MePS寡聚物。具体实施例方式现在参考附图在下文中将更全面地描述本专利技术，其中，显示了一些但不是全部的本专利技术的实施方式。实际上，这些专利技术能够以许多不同形式体现，并且不应该理解为限制在此提出的实施方式；而是，提供了这些实施方式使得本公开可以满足适用的法律要求。贯穿全文类似的数字指示类似的元件。本专利技术提供了用于反义治疗遗传病、传染病以及多种其他医学疾病的组合物以及相关方法。具体地，本专利技术的实施方式是针对包含与带正电荷的聚合物结合的反义寡核苷酸化合物(“ON-PCP”)和带负电荷的聚合物或者两性聚合物的组合的药物组合物。与包含与带正电荷的聚合物结合的寡核苷酸化合物的组合物相比较，根据本专利技术的药物组合物已表现出提闻的反义疗效和减少的细胞毒性。本专利技术的专利技术人惊奇地发现，通过使ON-PCP化合物与带负电荷的聚合物结合，可以显著地降低通常与带正电荷的聚合物结合的寡核苷酸化合物的治疗相关联的细胞毒性。还意外地发现通过使用带负电荷的聚合物和与带正电荷的聚合物结合的寡核苷酸化合物结合，可以提高将寡核苷酸递送到目标RNA/DNA链上的效率。通常，普遍认为ON-PCP的有效性看起来与结合的聚合物的正电荷有联系，并且增强的递送是由于带正电荷的聚合物结合到细胞膜上。这样，常规的想法预测带负电荷的聚合物与ON-PCP结合会导致中和了带正电荷的聚合物的增强作用。令人惊奇地，与预测相反，专利技术人发现通过使ON-PCP与带负电荷的聚合物结合，可以降低细胞 毒性，同时仍然提供增强的反义寡核苷酸化合物递送到细胞中，(尤其在体内和全身性的情况下)。在一些实施方式中，发现带负电荷的聚合物与ON-PCP的组合实际上可以增强反义作用。根据本专利技术的药物配制品可以用来治疗多种多样的医学疾病，包括细菌和病毒感染、癌症、糖尿病和遗传病，如肌肉营养不良症。在一个实施方式中，根据本专利技术的药物配制品可以用来治疗病毒感染如乙型肝炎、丙型肝炎、流感病毒、埃博拉病毒和马尔堡热。根据本专利技术能够靶向的细菌的实例在美国专利号7，625，873中得以描述。本专利技术可以使用各种各样的反义寡核苷酸化合物，用于反义治疗。术语“反义寡核苷酸”和“反义寡聚物”可以互换地使用，并且是指允许通过Watson-Crick碱基配对使反义寡聚物与目标核酸(例如，RNA/DNA)序列杂交从而在目标序列内形成核酸:寡聚物异源双链的核苷酸碱基序列以及亚基-亚基主链。通常，这样的寡聚物长度为8至大约50个核苷酸亚基，并且更通常地长度为大约12至25个核苷酸亚基。寡聚物可以具有与目标本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.05.13 US 12/800,3761.一种药物组合物，包含以下的混合物: 与带正电荷的聚合物结合的反义寡核苷酸；以及 带负电荷的聚合物或者两性聚合物，其中所述组合物表现出提高的反义疗效和/或降低的细胞毒性。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述反义寡核苷酸包含吗啉代寡聚物或者具有大约15至40个碱基对单元(单体)的PNA寡聚物。3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述吗啉代寡聚物包括磷酸二酰胺连接的吗啉代寡聚物。4.根据权利要求1、2和3中任一项所述的组合物，其中所述带正电荷的聚合物选自由肽、阳离子聚合物和树枝状八胍聚合物组成的组中。5.根据上述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述带负电荷的聚合物包括具有大约2至50个碱基对的RNA或者DNA链。6.根据权利要求1所述的组合物，其中所述带负电荷的聚合物选自由多糖和2’-O-甲基硫代磷酸酯寡核苷酸组成的组中。7.根据上述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述带负电荷的聚合物以离子键结合到与反义寡核苷酸结合的带正电荷的聚合物上。8.根据上述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述带负电荷的聚合物相对于与带正电荷的聚合物结合的所述反义寡聚物的比例为大约1:100至100:1。9.根据权利要求 1所述的组合物，其中所述组合物包括包含以下的药物组合物: 与带正电荷的聚合物结合的磷酸二酰胺连接的吗啉代寡聚物； 带负电荷的聚合物；以及 载体，其中所述组合物表现出提高的反义疗效和/或降低的毒性。10.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述反义寡聚物和所述带负电荷的聚...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆其龙，吴波，
申请(专利权)人：夏洛特梅克伦堡医院管理局DBA卡罗莱纳医学中心，
类型：
国别省市：