一种敲除牛MSTN基因的打靶载体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种敲除牛肌肉生长抑制素MSTN基因的启动子捕获型打靶载体PIII-MSTN，其可敲除牛MSTN基因第一、二外显子的全部和第三外显子的大部分，敲除的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示；PIII-MSTN核苷酸序列如SEQ?ID?NO：3，包含长约1.3kb和6.8kb的牛MSTN基因同源臂序列、无启动子的绿色荧光蛋白基因EGFP和自身带有启动子PGK的新霉素抗性基因Neor表达框架。本发明专利技术的启动子捕获型打靶载体PIII-MSTN可用于培育敲除了MSTN基因的转基因肉用牛。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学及生物
，涉及一种启动子捕获型打靶载体，具体地，涉及一种敲除牛MSTN基因的启动子捕获型打靶载体及其应用。
技术介绍
肌肉生长抑制素(MSTN)是特异性骨骼肌生长发育负调控因子，其活性的丧失或降低，会引起动物肌肉的过度发育，牛MSTN基因的自然突变会引发“双肌”现象。双肌牛比正常牛具有较高的瘦肉率和较好的肉质，且脂肪率低，口感良好，但国内现有品种中缺少“双肌”表型的牛。通过基因敲除技术构建了 MSTN基因突变纯合体小鼠，发现并验证了生长抑素基因突变鼠的体重比正常鼠大30%，而且这种差异在成年鼠中不受年龄和性别的影响(McPherron A C, 1997, Nature 387,83-90)。以双肌现象著称的比利时蓝牛(BelgianBlue)和皮德蒙特牛(piedmontese)就是MSTN基因发生自然突变。比利时蓝牛MSTN基因序列中的第3个外显子上缺失了 11个核苷酸，是导致MSTN基因阅读框发生移位，使MSTN被截短，不能发挥其生物的活性；皮尔蒙特牛则是由于第3个外显子发生了错误突变，导致了在成熟蛋白区内酪氨酸代替了保守的半胱氨酸，而在第I个外本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种敲除牛肌肉生长抑制素MSTN基因的启动子捕获型打靶载体。

【技术特征摘要】
1.一种敲除牛肌肉生长抑制素MSTN基因的启动子捕获型打靶载体。2.按权利要求1所述的打靶载体，其包含MSTN基因上下游同源臂3’同源臂和5’同源臂，所述5’同源臂的最后一个碱基为MSTN第一外显子起始密码子上游最后一个碱基，在同源臂之间还具有标记基因。3.按权利要求2所述的打靶载体，其特征在于，所述5’同源臂核苷酸序列如SEQIDNO:1的8834 10133 ;3’同源臂核苷酸序列如SEQID NO:1的15091 21957。4.按权利要求2所述的打靶载体，其特征在于，所述标记基因包括报告基因EGFP和带有启动子PGK的新霉素抗性选择基因Nec/。5.按权利要求1 4之一所述的打靶载体，其为PII1-MSTN，质粒图谱如图1所示，其核苷酸序列如SEQ ID NO:3o6.一种扩增权利要求1 5之一所述的打靶载体中MSTN基因同源臂的引物，其分别包括5’同源臂和3’同源臂的上游序列和下游序列的两组PCR引物对。7.按权利要求6所述的引物，其特征在于，所述引物为: 5’ 同源臂上游引物:TTTAAGCTTTCATTTGATTAGACCTTGTGGCTCC, 5’ 同源臂下游引物:TTTAAGCTTGGTTTTAAAA TCAATACAATCTTTT ； 3 ’ 同源臂上游引物:GATC...

【专利技术属性】
技术研发人员：李荣凤，赵丽华，李雪玲，梁浩，云亭，
申请(专利权)人：内蒙古大学，
类型：发明
国别省市：