本发明专利技术涉及miR-125b在红细胞成熟化中的用途。其中，制备成熟红细胞的方法包括：使红细胞前体细胞表达miR-125b，所述miR-125b具有SEQ?IDNO：1所示的核苷酸序列；以及培养所述表达miR-125b的红细胞前体细胞，以便获得成熟红细胞，其中，所述红细胞前体细胞为选自原成红细胞、嗜碱性成红细胞、多染性成红细胞、正染性成红细胞和网织红细胞的至少一种。利用该方法能够有效地制备成熟红细胞。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，更具体的，本专利技术涉及miR-125b在红细胞成熟化中的用途。
技术介绍
战伤救治和常规治疗中，输血都是及其关键的一个环节，我国血液供应长期处于供不应求的状况，近年来，我国多个城市甚至出现“血荒”的说法。要解决血液来源匮乏的问题，开发新的血源已经成为当前医疗中的迫切需要，其中干细胞研究为体外制备红细胞提供了新希望，包括胚胎干细胞、诱导多能干细胞(iPSC)及脐带、骨髓、外周血来源的造血干祖细胞都可能作为种子细胞，通过大量诱导扩增生成可用于移植的红细胞。然而，目前关于成熟红细胞的制备仍有待改进。
技术实现思路
本专利技术旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一或至少提供一种有用的商业选择。为此，本专利技术的一个目的在于提出一种具有能够有效地制备成熟红细胞的手段。本专利技术是基于专利技术人的下列发现而完成的:通过在红细胞前体细胞中引入miR-125b，可以提高红细胞脱核效率。在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种构建体。根据本专利技术的实施例，该构建体包括编码miR-125b的核酸分子，所述miR-125b具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。由此，利用该构建体， 可以有效地将表达miR-125b的核酸分子引入到红细胞前体细胞中，并进一步可以在该细胞中表达miR-125b，从而可以促进该红细胞前体细胞转化为成熟的红细胞。根据本专利技术的实施例，编码miR-125b的核酸分子具有选自SEQ ID NO:2和SEQ IDNO:3的至少一种所示的核苷酸序列。由此，可以进一步提高表达miR-125b的效率，从而进一步提高使得红细胞前体细胞转化为成熟的红细胞的效率。在本专利技术的第二方面，本专利技术提出了一种制备成熟红细胞的方法。根据本专利技术的实施例，该方法包括:使红细胞前体细胞表达miR-125b，所述miR-125b具有SEQ ID N0:1所示的核苷酸序列；以及培养表达miR-125b的红细胞前体细胞，以便获得成熟红细胞，其中，该红细胞前体细胞为选自原成红细胞、嗜碱性成红细胞、多染性成红细胞、正染性成红细胞和网织红细胞的至少一种。由此，通过在红细胞前体细胞中表达miR-125b，可以使得红细胞前体细胞转化为成熟红细胞，从而获得成熟红细胞，实现红细胞的体外成熟化。根据本专利技术的实施例，该制备成熟红细胞的方法，还可以进一步包括下列附加技术特征:根据本专利技术的实施例，使红细胞前体细胞表达miR-125b进一步包括利用前面所述的构建体，将编码miR-125b的核酸分子引入到红细胞前体细胞中。由此，可以进一步提高在红细胞前体细胞中表达miR-125b的效率，从而进一步提高制备成熟红细胞的效率。根据本专利技术的实施例，所述红细胞前体细胞为成红细胞。由此，可以进一步提高制备成熟红细胞的效率。根据本专利技术的实施例，利用添加100ng/ml的SCF、40ng/ml的IGF、5U/ml的ΕΡ0、2mM的L-谷氨酰胺、I μ M的地塞米松、40ng/ml的类脂和100 μ g/m的转铁蛋白的Stem span培养基，培养表达miR-125b的红细胞前体细胞。由此，可以进一步提高将红细胞前体细胞转化为成熟红细胞的效率，进而进一步提高制备成熟红细胞的效率。在本专利技术的第三方面，本专利技术还提出了前面所述的构建体、或者miR_125b在制备成熟红细胞中的用途。在本专利技术的第四方面，本专利技术还提出了一种用于制备成熟红细胞的试剂盒。根据本专利技术的实施例，该试剂盒包括:适于使红细胞前体细胞表达miR-125b的试剂。由此，利用该试剂盒，能够有效地通过红细胞前体细胞表达miR-125b，可以从红细胞前体细胞制备成熟红细胞。根据本专利技术的实施例，该试剂盒还可以具有下列附加技术特征:在本专利技术的一个实施例中，所述适于使红细胞前体细胞表达miR_125b的试剂为前面所述的构建体。由此，可以进一步提高利用该试剂盒使得红细胞前体细胞表达miR-125b的效率，进而可以进一步提高从红细胞前体细胞制备成熟红细胞的效率。在本专利技术的一个实施例中，可以进一步包括:培养基，该培养基为添加100ng/ml的SCF、40ng/ml的IGF、5U/ml的EP0、2mM的L-谷氨酰胺、I μ M的地塞米松、40ng/ml的类脂和100 μ g/m的转铁蛋白的Stem span培养基，其中，该培养基与该适于使红细胞前体细胞表达miR-125b的试剂设置在不同的容器中。由此，可以进一步提高将红细胞前体细胞转化为成熟红细胞的效率，进而进一步提高制备成熟红细胞的效率。本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。附图说明本专利技术的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中:图1显示了根据本专利技术一个实施例，红细胞成熟脱核过程中，miR-125b内源性表达检测的结果，其中，A.脐带血来源的造血干细胞在14天的红系诱导过程中红细胞表面标志⑶71/⑶235表达的检测结果，B.未分化的造血干细胞以及红系分化不同成熟阶段的红细胞的miR-125b表达的检测结果，C.TF-1细胞及其经红系诱导分化体系诱导分化的第一阶段的表面标志⑶71/⑶235的表达检测结果，以及第二阶段的表面标志⑶71阳性/核标志LDS751阴性的表达检测结果，D.TF-1细胞及其经红系诱导分化体系诱导分化的两个阶段的细胞的miR-125b表达的检测结果；图2显示了根据本专利技术一个实施例，红白血病细胞K562中过表达miR_125b对红系分化和脱核影响的实验结果，其中，A.稳定过表达miR-125b的K562细胞经红系诱导分化后的联苯胺染色结果，B.过表达miR-125b的细胞经红系诱导分化后的表面标志⑶71/CD235双阳性细胞的流式细胞 术检测结果，C.流式细胞术检测LDS751阴性/CD71阳性的脱核细胞比例的结果，D.实时定量PCR检测基因修饰的K562细胞系中miR-125b的表达情况，E.实时定量PCR检测过表达miR-125b的K562细胞经红系诱导分化后α和γ血红蛋白的表达情况；以及图3显示了根据本专利技术一个实施例，过表达miR_125b的成红细胞与转染随机对照(NO组进一步诱导成熟后的流式细胞术检测结果。具体实施例方式下面详细描述本专利技术的实施例，这些实施例旨在用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。本专利技术是基于专利技术人对红细胞成熟的深入研究而完成的。专利技术人发现，多种类型的干细胞诱导生成的成红细胞(erythiOblast)，若要在体外环境下成为成熟红细胞，脱核是关键的一步:因为有核红细胞的携氧能力低于脱核红细胞，而且有核红细胞在跨越狭窄的毛细血管时容易发生溶血；此外，由于脱核细胞丢失了染色体和分裂能力，移植后导致受者恶性转化的风险也明显降低。虽然红细胞的脱核成熟对于输注应用意义重大，但是迄今为止在诱导干细胞红系分化的体系中，只有在基质细胞的辅助下诱导造血干祖细胞能实现较为高效的成熟和脱核，而无基质细胞体系、或是以胚胎干细胞、iPSC为起始细胞的诱导体系中，红细胞成熟和脱核效率仍然很低。在生理条件下，造血干细胞向红系定向分化的过程经历了原成红细胞(也称为原始红细胞)(proerythroblast)—嗜碱性成红细胞(也称为早幼红细胞)(ba本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种构建体，其特征在于，包括编码miR?125b的核酸分子，所述miR?125b具有SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列。
【技术特征摘要】
1.一种构建体，其特征在于，包括编码miR-125b的核酸分子，所述miR-125b 具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的构建体，其特征在于，所述编码miR-125b的核酸分子具有选自SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的至少一种所示的核苷酸序列。3.一种制备成熟红细胞的方法，其特征在于，包括:使红细胞前体细胞表达miR-125b，所述miR-125b具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；以及培养表达miR_125b的红细胞前体细胞，以便获得成熟红细胞， 其中， 所述红细胞前体细胞为选自原成红细胞、嗜碱性成红细胞、多染性成红细胞、正染性成红细胞和网织红细胞的至少一种。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，使红细胞前体细胞表达miR-125b进一步包括: 利用权利要求1或2所述的构建体，将编码miR-125b的核酸分子引入到所述红细胞前体细胞中。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述红细胞前体细胞为成红细胞。6.根据权利要求3所述的方法,其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：裴雪涛，岳文，谢小燕，李艳华，姚海雷，习佳飞，周军年，曾泉，房芳，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。