一种透性化与超声联用的功能微生物转化方法技术

本发明专利技术公开了一种透性化与超声联用的功能微生物转化方法，采用Decon溶液对微生物细胞进行透性化处理，降低细胞壁和细胞质膜的磷脂含量；在透性化处理的同时，通过向体系添加钙离子，帮助外源DNA沉降和输运；然后施加低频超声波20-80kHz，将欲转化的脱氧核糖核酸和核糖核酸输运至细胞内；采用Decon透性化处理后，超声转化时超声的功率可以相应降低、超声时间缩短，降低了超声对细胞的损伤；通过合理的选择透性转化试剂及确定相应浓度，得到一种同时满足透性化处理与超声转化技术的介质溶液；能够实现对更大范围的宿主菌进行外源核酸分子转化并且提高转化效率，从而为遗传工程改造和新的功能微生物培育提供有效的技术手段，提高效率并降低成本和操作难度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于遗传工程与细胞工程
，，具体涉及。
技术介绍
细菌通过吸收外源DNA而获得新的遗传性状的过程被称为转化。将外源DNA分子如质粒或双链DNA导入细菌细胞是微生物学和分子生物学最基础的技术手段之一，也是对微生物进行遗传工程改造的关键过程之一。经过数十年的研究，对一些模式微生物体系已经有相应的较为高效的DNA转化方法，比如对大肠杆菌体系，制备感受态细胞后通过热应激方法转化效率可以达到10_5或10_6。针对非特异的微生物宿主，也研究和开发了适用面更广的技术，其中高压电穿孔法和接合法是最常见的手段，但两者都有其局限性。接合法需要细菌间的物理接触以形成细胞-菌毛-细胞结合形式，若细胞不具备菌毛结构则无法实现转化。高压电穿孔须要低离子强度的反应体系和几千伏的高电压，条件极为苛刻，对细胞的损伤较大，更不利于更大范围内普及使用，电穿孔仪数十万元的价格也限制了其应用。超声波指频率高于20kHz的声波，具有很强的能量。当超声波作用于溶液时，会产生几百大气压的局部高压以及上千度的局部高温，通常超声波的这种作用称为气穴作用。超声波作用下，细胞壁的穿透性增强。由于上述特点，近十年里有不少本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种透性化与超声联用的功能微生物转化方法，其特征在于：包括如下步骤：1）在液体培养基中培养微生物，使其进入对数生长期，得到菌液；2）对菌液离心，并以透性转化试剂重悬，控制透性转化试剂的用量，使细胞浓度在此过程中浓缩5?20倍，进行细胞透性化处理；3）将经透性化处理的微生物离心后重悬于透性转化试剂，并置于转化用的玻璃瓶；4）在玻璃瓶中加入欲转化的外源核酸分子后，将玻璃瓶置于超声波仪器中，施加频率为20?80kHz的超声，超声采用连续或间歇式；5）微生物复苏，在选择性培养基上进行转化体筛选。

【技术特征摘要】
1.一种透性化与超声联用的功能微生物转化方法，其特征在于:包括如下步骤: 1)在液体培养基中培养微生物，使其进入对数生长期，得到菌液； 2)对菌液离心，并以透性转化试剂重悬，控制透性转化试剂的用量，使细胞浓度在此过程中浓缩5-20倍，进行细胞透性化处理； 3)将经透性化处理的微生物离心后重悬于透性转化试剂，并置于转化用的玻璃瓶； 4)在玻璃瓶中加入欲转化的外源核酸分子后，将玻璃瓶置于超声波仪器中，施加频率为20-80kHz的超声，超声采用连续或间歇式； 5)微生物复苏，在选择 性培养基上进行转化体筛选。2.根据权利要求1所述的透性化与超声联用的功能微生物转化方法，步骤I)所述的微生物为好氧菌或厌氧菌。3.根据权利要求2所述的透性化与超声联用的功能微生物转化方法，所述的厌氧菌包括脱硫弧菌Desulfovibrio vulgaris,好氧菌包括恶臭假单胞菌Pseudomonas putida。4.根据权利要求1所述的透性化与超...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋一之，
申请(专利权)人：宋一之，
类型：发明
国别省市：