一种蛋白质表达质粒及其在将蛋白展示在细胞表面并自动释放出来方面的应用制造技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，具体涉及到一种蛋白质表达质粒，该质粒能够将表达的外源蛋白展示在细胞表面，并且能够将表达的外源蛋白从细胞表面自动释放出来。该质粒在商品质粒pET20b的多克隆位点插入INP基因和Intein基因，并在Intein基因3’端构建了多克隆位点（MCS，包括Nco?I，Xba?I，EcoR?I和Xho?I）。将外源蛋白基因插入到质粒pINP-Intein多克隆位点后，获得重组表达载体；再转入大肠杆菌表达宿主，经诱导表达后，插入到质粒多克隆位点的外源蛋白基因不但能够展示在细胞表面，而且能够在Intein的剪切作用下从细胞表面释放出来。该表达质粒在蛋白质及多肽文库的筛选、酶和抗体的制备以及全细胞生物催化等方面具有潜在的应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程
，具体涉及到一种蛋白质表达质粒，该质粒能够将表达的外源蛋白展示在细胞表面，并且能够将表达的外源蛋白从细胞表面自动释放出来。
技术介绍
细胞表面展示技术是以细胞表面蛋白为运载蛋白，通过基因工程手段将外源蛋白与细胞表面蛋白进行融合表达，通过细胞表面蛋白的携带将外源蛋白展示在细菌或者酵母菌的细胞表面，从而使完整细胞具有了新的功能。自上个世纪八十年代中期第一个细菌细胞表面展示体系建立以来，细胞表面展示技术在活体疫苗、肽库筛选、抗体生产、生物吸附、 全细胞催化、生物传感器和酶定向进化等生物领域得到了广泛应用。在各种运载蛋白中， 冰核蛋白(Ice Nucleation Protein, INP)是载运能力最大的运载蛋白，运载蛋白的分子量最高可达到100kD。假单胞菌属(Pseudomonas)、黄杆菌属(Xanthomonas)和欧文氏菌属 (Erwinia)中的某些细菌，其细胞表面包含INP，在过冷条件下INP能催化水生成冰晶。研究表明，天然INP具有三个结构域，N端结构域与磷脂层的外层相互作用，C端结构域高度亲水并暴露于外膜，中间是重复序列，作为冰晶核模板起到本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛋白质表达质粒pINP?Intein，其特征在于：是在质粒pET20b的多克隆位点插入序列如SEQ?ID?NO.9所示的基因片段，其结构如下所示，FDA00002695254100011.jpg

【技术特征摘要】
1.一种蛋白质表达质粒pINP-1ntein,其特征在于是在质粒pET20b的多克隆位点插入序列如SEQ ID NO. 9所示的基因片段，其结构如下所示，2.权利要求1所述的一种蛋白质表达质粒pINP-1ntein在将蛋白展示在细胞表面并自动释放出来方面的应用。3.如权利要求2所述的一种蛋白质表达质粒pINP-...

【专利技术属性】
技术研发人员：张作明，高文英，张红，周余来，陈彦彦，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：