用于调节SOD‑1表达的组合物制造技术

本文公开了用于降低SOD‑1 mRNA和蛋白质表达的反义化合物和方法。此类方法、化合物和组合物适用于治疗、预防或改善SOD‑1相关疾病、病症和病状。此类SOD‑1相关的疾病包括肌萎缩性硬化(ALS)。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】序列表本申请连同序列表一起以电子格式提交。序列表提供为在2015年3月30日创建的名称为BIOL0240WOSEQ_ST25.pdf的文件，所述文件的大小为320Kb。电子格式的序列表中的信息以引用的方式整体并入本文。领域提供用于降低动物中可溶的超氧化物歧化酶1(SOD-1)mRNA和蛋白质的表达的组合物和方法。此类方法适用于通过抑制动物中SOD-1的表达来治疗、预防或改善神经退行性疾病，包括肌萎缩性侧索硬化(ALS)。背景可溶的SOD-1酶(也称为Cu/Zn超氧化物歧化酶)是通过催化超氧化物歧化为过氧化氢(H2O2)提供针对生物分子的氧化损伤的防御的超氧化物歧化酶之一(Fridovich,Annu.Rev.Biochem.,1995,64,97-112)。超氧阴离子(O2-)是主要由线粒体中氧化磷酸化的错误产生的潜在的有害细胞副产物(Turrens,J.Physiol.2003,552,335-344)。SOD-1基因突变与肌萎缩性侧索硬化(ALS，也称作卢伽雷氏病(LouGehrig’sdisease))的显性遗传形式有关，是特征为上下运动神经元的选择性退化的病症(Rowland,N.Engl.J.Med.2001,344,1688-1700)。在家族性ALS和SOD1基因的错义突变之间有紧密的遗传连锁(Rosen,Nature,1993,362,59-62)。据信突变SOD1的毒性是从减少免受活性酶的核保护(在细胞核中的功能损失)的初始错误折叠(功能增加)中产生，是可能涉及ALS的发病机制的过程(Sau,Hum.Mol.Genet.2007,16,1604-1618)。ALS是在任何给定时间影响多达三万美国人的破坏性的进行性神经退行性疾病。ALS中运动神经元的进行性退化，最终导致死亡。当运动神经元死亡时，大脑发起和控制肌肉运动的能力丧失。随着自主肌肉动作逐渐受到影响，患者在疾病的后期阶段可能变成完全瘫痪。目前缺乏的是用于治疗此类神经退行性疾病的可以接受的选择。因此本文的目的在于提供用于治疗此类疾病的方法。概述本文提供用于调节可溶的超氧化物歧化酶1(SOD-1)mRNA和蛋白质的表达的方法、化合物和组合物。在某些实施方案中，可用于调节SOD-1mRNA和蛋白质的表达的化合物为反义化合物。在某些实施方案中，反义化合物为修饰寡核苷酸。在某些实施方案中，可在细胞或组织中进行调节。在某些实施方案中，细胞或组织处于动物体内。在某些实施方案中，动物为人。在某些实施方案中，SOD-1mRNA水平降低。在某些实施方案中，SOD-1蛋白质水平降低。此类降低可以时间依赖性方式或以剂量依赖性方式出现。还提供适用于预防、治疗和改善疾病、病症和病状的方法、化合物和组合物。在某些实施方案中，此类SOD-1相关疾病、病症和病状为神经退行性疾病。在某些实施方案中，此类神经退行性疾病、病症和病状包括肌萎缩性侧索硬化(ALS)。此类疾病、病症和病状可共同具有一个或多个风险因素、成因或结果。产生ALS的某些风险因素和成因包括逐渐变老、有个人或家族病史或遗传易感性。然而，大多数的ALS病例是散发性的，并且已知没有已知的危险因素。与ALS的产生相关的某些症状和结果包括但不限于：肌束震颤、绞痛、紧张和僵硬的肌肉(痉挛)、影响手臂或腿的肌无力、口齿不清和鼻腔讲话、行走困难、咀嚼或吞咽困难(吞咽困难)、说话或形成语句困难(构音困难)、无力或萎缩、痉挛、过度反射(反射亢进)和巴彬斯奇征(Babinski’ssign)的出现。随着ALS进展，包括其他肢体的无力的症状和结果，可能伴有颤搐、肌肉绞痛和过度和更快的反射，可能出现咀嚼、吞咽、呼吸和流涎的问题，最终瘫痪和死亡。在某些实施方案中，治疗方法包括向有需要的个体施用SOD-1反义化合物。在某些实施方案中，治疗方法包括向有需要的个体施用SOD-1修饰寡核苷酸。详述应理解，以上概述和以下详述二者都仅为示例性和解释性的，并且不限制要求保护的本专利技术。在本文中，除非另外确切说明，否则单数的使用包括复数。如本文所使用，除非另外说明，否则“或”的使用意指“和/或”。除非另外说明，否则本文所用的“和”的使用意指“和/或”。此外，术语“包括(including)”以及其他形式诸如“包括(includes)”和“包括(included)”的使用不是限制性的。另外，除非另外确切说明，否则术语如“元件”或“组分”既涵盖包含一个单元的元件和组分，又涵盖包含多于一个子单元的元件和组分。另外，除非另外说明，否则本文描述的所有序列从5’至3’列出。本文所用的章节标题仅出于组织目的，并且不应解释为限制所述主题。本公开中引用的所有文件或文件部分，包括但不限于专利、专利申请、公开的专利申请、文章、书籍、论文和GENBANK登录号和可通过数据库如国家生物技术信息中心(NCBI)获得的相关序列信息和在本公开通篇所涉及的其他数据针对本文中所论述的文件部分以及其全部内容以引用的方式在此明确并入。定义除非提供具体定义，否则关于本文所述的分析化学、合成有机化学和医学和药物化学所用的命名以及本文所述的分析化学、合成有机化学和医学和药物化学的工序和技术为本领域中熟知且常用的。标准技术可用于化学合成和化学分析。除非另外指出，否则以下术语具有以下含义：“2'-脱氧核苷”(又为2'-脱氧核糖核苷)意指包含2'-H呋喃糖部分的核苷，如在天然存在的脱氧核糖核苷(DNA)中发现。在某些实施方案中，2’-脱氧核苷可包含修饰的核碱基或可包含RNA核碱基(例如，尿嘧啶)。“2’-脱氧核糖”意指2'-H呋喃糖部分，如在天然存在的脱氧核糖核苷(DNA)中发现。“2’-O-甲氧基乙基”(又为2’-MOE和2’-OCH2CH2-OCH3和MOE和2’-O-甲氧基乙基核糖)是指呋喃糖环的2'位的O-甲氧基-乙基修饰。2’-O-甲氧基乙基核糖修饰的糖为修饰的糖。“2’-O-甲氧基乙基核糖修饰核苷”(又为2'-MOE核苷)意指包含2'-MOE修饰的糖部分的核苷。“2'-取代的核苷”意指在呋喃糖环的2'位上包含除H或OH以外的取代基的核苷。在某些实施方案中，2'-取代的核苷包括具有双环糖修饰的核苷。“5-甲基胞嘧啶”意指用连接至5位的甲基修饰的胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶是修饰的核碱基。“约”意指在值的±10％以内。例如，如果指出“化合物影响SOD-1至少约50％的抑制”，那么表示45％至55％范围内的SOD-1水平被抑制。“伴随施用”是指在相同时间以任何方式对两种药剂同时施用，其中两种药剂的药理作用均在患者中显现。伴随施用不需要在单一药物组合物中、以相同剂型或通过相同施用途经对两种药剂进行施用。两种药剂的作用不需要在相同时间显现。所述作用仅需要重叠一段时间但不需要同延。“施用”意指向动物提供药剂，且包括但不限于由医学专业人员施用和自行施用。“改善”是指减轻、减缓、停止或逆转病状或疾病严重性的至少一个指标。指标的严重性可通过本领域的技术人员已知的主观或客观度量来确定。“动物”是指人类或非人类动物，包括但不限于小鼠、大鼠、家兔、狗、猫、猪，和非人灵长类，包括但不限于猴子和猩猩。“抗体”是指特征在于与抗原以某种方式特异性反应的分子，其中抗体与抗原各自利用另一者来定义。抗体可本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种化合物，其包含修饰寡核苷酸，所述修饰寡核苷酸由12至30个连接核苷组成并且具有核碱基序列，所述核碱基序列包含SEQ ID NO:118‑1461的任何核碱基序列的至少8个、至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个连续核碱基。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.04.01 US 61/973,8031.一种化合物，其包含修饰寡核苷酸，所述修饰寡核苷酸由12至30个连接核苷组成并且具有核碱基序列，所述核碱基序列包含SEQIDNO:118-1461的任何核碱基序列的至少8个、至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个连续核碱基。2.一种化合物，其包含修饰寡核苷酸，所述修饰寡核苷酸由12至30个连接核苷组成并且具有核碱基序列，所述核碱基序列包含SEQIDNO:15、21、23、47、54和67中的任何核碱基序列的至少8个、至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个连续核碱基，其中至少一个核苷间键联为磷酸二酯键联。3.如权利要求1所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸具有混合主链。4.如权利要求3所述的化合物，其中所述混合主链基序选自以下：sossssssssoooss、sooossssssssoss、sooosssssssssoss、soosssssssssooss、sooossssssssooss、sooosssssssssooss、sooossssssssssooss、sooosssssssssssooos、soooossssssssssooss、sooosssssssssssooss、sososssssssssssosos和sooossssssssssoooss，其中s＝硫代磷酸酯核苷间键联，并且o＝磷酸二酯核苷间键联。5.如任一前述权利要求所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸具有以下任一个糖化学基序：abddddddddababaa、babaddddddddabab、aaaadddddddddbbaa、aaaaddddddddababa、aaaaddddddddbabaa、aaaaddddddddbbaaa、aaaaaddddddddbbaa、aaaabddddddddbaaa、aaaabdddddddbaaaa、aaabddddddddbaaaa、aaabbdddddddbbaaa、aabbdddddddddbbaa、aabbddddddddaaaaa、aabbddddddddbbaaa、ababddddddddaaaaa、ababddddddddbabaa和babaddddddddaaaaa，其中e＝任何2’非二环修饰糖，b＝任何二环修饰糖，d＝2’-脱氧核糖。6.如权利要求5所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸具有以下任一个糖化学基序：ekddddddddekekee、kekeddddddddekek、eeeedddddddddkkee、eeeeddddddddekeke、eeeeddddddddkekee、eeeeddddddddkkeee、eeeeeddddddddkkee、eeeekddddddddkeee、eeeekdddddddkeeee、eeekddddddddkeeee、eeekkdddddddkkeee、eekkdddddddddkkee、eekkddddddddeeeee、eekkddddddddkkeee、ekekddddddddeeeee、ekekddddddddkekee和kekeddddddddeeeee，其中e＝2’-O-甲氧基乙基核糖修饰糖，k＝cEt修饰糖，d＝2’-脱氧核糖。7.如任一前述权利要求所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸的核碱基序列与SEQIDNO:1或SEQIDNO:2至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％互补。8.如任一前述权利要求所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸为单链修饰寡核苷酸。9.如权利要求1、2和5-8所述的化合物，其中至少一个核苷间键联为修饰的核苷间键联。10.如权利要求9所述的化合物，其中至少一个修饰的核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。11.如权利要求10所述的化合物，其中每个修饰的核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。12.如权利要求1、2和5-9所述的化合物，其中至少一个核苷间键联为磷酸二酯核苷间键联。13.如权利要求1、2、5-8所述的化合物，其中至少一个核苷间键联为硫代磷酸酯键联，并且至少一个核苷间键联为磷酸二酯键联。14.如任一前述权利要求所述的化合物，其中至少一个核苷包含修饰的核碱基。15.如权利要求14所述的化合物，其中所述修饰的核碱基为5-甲基胞嘧啶。16.如权利要求1-4和7-15所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸中的至少一个核苷包含修饰的糖。17.如权利要求16所述的化合物，其中所述至少一个修饰的糖是双环糖。18.如权利要求17所述的化合物，其中所述双环糖包含4’-CH(R)-O-2’桥，其中R独立地为H、C1-C12烷基或保护基。19.如权利要求18所述的化合物，其中R为甲基。20.如权利要求18所述的化合物，其中R为H。21.如权利要求16所述的化合物，其中所述至少一个修饰的糖包含2’-O-甲氧基乙基。22.如权利要求1-4和7-21所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸包含：由8-10个连接脱氧核苷组成的缺口区段；由4-6个连接核苷组成的5’翼区段；和由5-7个连接核苷组成的3’翼区段；其中所述缺口区段定位在所述5’翼区段与所述3’翼区段之间，并且其中每个翼区段的每个核苷包含修饰的糖。23.如权利要求22所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸包含：由10个连接脱氧核苷组成的缺口区段；由5个连接核苷组成的5’翼区段；和由5个连接核苷组成的3’翼区段；其中所述缺口区段定位在所述5’翼区段与所述3’翼区段之间，并且其中每个翼区段的每个核苷包含修饰的糖。24.如权利要求22所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸包含：由9个连接脱氧核苷组成的缺口区段；由5个连接核苷组成的5’翼区段；和由5个连接核苷组成的3’翼区段；其中所述缺口区段定位在所述5’翼区段与所述3’翼区段之间并且其中每个翼区段的每个核苷包含修饰的糖。25.如权利要求22所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸包含：由8个连接脱氧核苷组成的缺口区段；由5个连接核苷组成的5’翼区段；和由5个连接核苷组成的3’翼区段；其中所述缺口区段定位在所述5’翼区段与所述3’翼区段之间，并且其中每个翼区段的每个核苷包含修饰的糖。26.如权利要求22所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸包含：由8个连接脱氧核苷组成的缺口区段；由4个连接核苷组成的5’翼区段；和由5个连接核苷组成的3’翼区段；其中所述缺口区段定位在所述5’翼区段与所述3’翼区段之间，并且其中每个翼区段的每个核苷包含修饰的糖。27.如权利要求22所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸包含：由8个连接脱氧核苷组成的缺口区段；由5个连接核苷组成的5’翼区段；和由7个连接核苷组成的3’翼区段；其中所述缺口区段定位在所述5’翼区段与所述3’翼区段之间，并且其中每个翼区段的每个核苷包含修饰的糖。28.如权利要求22所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸包含：由8个连接脱氧核苷组成的缺口区段；由6个连接核苷组成的5’翼区段；和由6个连接核苷组成的3’翼区段；其中所述缺口区段定位在所述5’翼区段与所述3’翼区段之间，并且其中每个翼区段的每个核苷包含修饰的糖。29.如权利要求22所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸包含：由9个连接脱氧核苷组成的缺口区段；由6个连接核苷组成的5’翼区段；和由5个连接核苷组成的3’翼区段；其中所述缺口区段定位在所述5’翼区段与所述3’翼区段之间，并且其中每个翼区段的每个核苷包含修饰的糖。30.如权利要求1-3和7-21所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸由12、13、14、15、16、17、18、19或20个连接核苷组成。31.一种由根据下式的修饰寡核苷酸组成的化合物：32.一种由根据下式的修饰寡核苷酸组成的化合物：33.一种由根据下式的修饰寡核苷酸组成的化合物：34.一种由根据下式的修饰寡核苷酸组成的化合物：35.一种由根据下式的修饰寡核苷酸组成的化合物：36.一种由根据下式的修饰寡核苷酸组成的化合物：37.一种由根据下式的修饰寡核苷酸组成的化合物：38.一种由根据下式的修饰寡核苷酸组成的化合物：39.一种由根据下式的修饰寡核苷酸构成的化合物：mCesAeoGesGeoAesTdsAdsmCdsAdsTdsTdsTdsmCdsTdsAdsmCeoAesGeomCesTe；其中，A＝腺嘌呤，mC＝5’-甲基胞嘧啶G＝鸟嘌呤，T＝胸腺嘧啶，e＝2’-O-甲氧基乙基核糖修饰糖，d＝2’-脱氧核糖，s＝硫代磷酸酯核苷间键联，并且o＝磷酸二酯核苷间键联。40.一种由根据下式的修饰寡核苷酸构成的化合物：TesTeoAeoAesTdsGdsTdsTdsTdsAdsTdsmCdsAkoGkoGesAesTe；其中，A＝腺嘌呤，mC＝5’-甲基胞嘧啶G＝鸟嘌呤，T＝胸腺嘧啶，e＝2’-O-甲氧基乙基核糖修饰糖，k＝cEt修饰糖，d＝2’-脱氧核糖，s＝硫代磷酸酯核苷间键联，并且o＝磷酸二酯核苷间键联。41.一种由根据下式的修饰寡核苷酸构成的化合物：GesGeoAeoTeoAdsmCdsAdsTdsTdsTdsmCdsTdsAdsmCkoAksGesmCe；其中，A＝腺嘌呤，mC＝5’-甲基胞嘧啶G＝鸟嘌呤，T＝胸腺嘧啶，e＝2’-O-甲氧基乙基核糖修饰糖，k＝cEt修饰糖，d＝2’-脱氧核糖，s＝...

【专利技术属性】
技术研发人员：埃里克·E·斯威兹，T·科尔，H·柯达赛维茨，苏珊·M·弗赖尔，T·P·康登，E·万斯维奇，T·洛克哈特，T·维柯斯，P·辛格，
申请(专利权)人：IONIS制药公司，
类型：发明
国别省市：美国;US