慢病毒载体的半稳定生产制造技术

本发明专利技术提供新的半稳定包装细胞系以及使用所述半稳定包装细胞系而产生慢病毒载体(LV)的方法。用baculo-AAV杂合系统产生本发明专利技术的新方法和包装细胞系，用于慢病毒结构蛋白和调控蛋白的稳定表达，所述系统包含含有侧翼为AAVITR的整合盒的杆状病毒骨架，以及编码rep蛋白的质粒。该系统允许得到HIV-1的结构蛋白和调控蛋白gag/pol和rev的稳定整合。所述系统允许得到包含HIV的结构蛋白和调控蛋白gag/pol和rev的细胞系，用于半稳定LV生产。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于基因治疗的慢病毒载体(LV)的生产。更具体地讲，本专利技术涉及半稳定慢病毒包装细胞系以及使用杂合杆状-腺伴随病毒(baculo-Adeno associated virus(AAV))载体而制备包装细胞系的方法，用于慢病毒结构蛋白和调控蛋白的稳定整合。直量 自从2001年针对AIDS的首次LV I期临床试验之后，研究基于HIV的LV作为基因递送载体的38个1-1I期和2个I1-1II期试验已经经过当局的审查；它们中的3个仍然处于审查中。最大数量的试验包括单基因病，其中的一些具有高发病率，例如库利氏贫血(Cooley’ s anemia) β -重型地中海贫血(4个试验)。其次是癌症和感染性疾病,主要是HIV-1感染。通常，Ι/II期试验中招募的患者数量是有限的，但在III期中则不是。因此迫切需要第2代(基于LTR)和第3代(基于SIN) LV的稳定包装细胞系，以应付LV大规模生产的需要，大量用于未来有希望的III期试验。基于瞬时方案的LV生产在全局应用的安全性、成本和再现性的观点来看确实是不现实的。越来越多的证据显示，新近开发的用于基因治疗的病毒整合载体LV本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.09.02 EP 10175088.31.一种用于慢病毒结构蛋白和调控蛋白的稳定表达的系统，其由以下组成: i.杂合载体，其包含含有侧翼为AAVITR并包含2个表达盒的整合盒的杆状病毒骨架，其中第一表达盒编码慢病毒gag基因和pol基因，第二个编码慢病毒rev和选择标记，和 i1.含有处于启动子控制之下的AAV rep可读框(ORF)的表达质粒。2.权利要求1的系统，其中所述杂合载体的2个表达盒是尾-尾的方向并且每个由组成型启动子和多聚A驱动。3.权利要求1或2的系统，其中所述启动子选自CMV、CMVIE、PGK、SV40、eFl a、SFFV和 RSV。4.权利要求1-3中任一项的系统，其中所述启动子是CMVIE启动子。5.前述权利要求中任一项的系统，其中所述选择标记选自潮霉素、卡那霉素、新霉素、zeomycin的抗性基因。6.权利要求5的系统，其中所述选择标记是潮霉素抗性基因。7.前述权利要求中任一项的系统，其中所述选择标记是克隆在内部核糖体进入位点(IRES)下游。8.前述权利要求中任一项的系统，其中所述rep蛋白是rep78。9.一种由稳定表达慢病毒gag、pol和rev的细胞组成的半稳定慢病毒包装细胞系，其特征在于这类细胞含有稳定整合到其基因组中的侧翼为AAV ITR并包含2个表达盒的至少一个拷贝的整合盒，其中第一表达盒编码慢病毒gag基因和pol基因，第二个编码慢病毒rev和选择标记。10.权利要求9的半...

【专利技术属性】
技术研发人员：C博沃伦塔，A斯托尔纳约洛，P里扎尔迪，F马维利奥，
申请(专利权)人：莫尔梅德股份有限公司，
类型：
国别省市：