家蚕BmNPV多角体晶体固定蝎毒素蛋白的方法技术

本发明专利技术公开了一种家蚕BmNPV多角体晶体固定蝎毒素蛋白的方法，包括：(1)进行蝎毒素蛋白BmK基因的克隆；(2)用限制性内切酶BamHI和HindIII消化所述pCR2.1-BmK基因得到BmK基因片段，然后将BmK基因片段克隆入杆状病毒转移载体pBlueBacHisa得到重组的转移载体；将所述重组的转移载体与家蚕野生型核型多角体病毒BmNPVDNA共转染入家蚕培养细胞，并通过同源重组产生含有蝎毒素蛋白基因的重组杆状病毒；(3)使用家蚕培养细胞，接种所述含有蝎毒素蛋白基因的重组杆状病毒和野生型病毒BmNPV，在27℃下感染三天以进行感染表达，后通过离心收集家蚕培养细胞。本发明专利技术解决了蝎毒素蛋白容易失活的缺点，为开发蝎毒素蛋白作为生物杀虫剂创造了条件。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及DNA重组技术、蛋白质分析技术，尤其涉及一种。
技术介绍
蝎毒素蛋白是由细胞产生的一类具有对昆虫具有毒性的蛋白质，可应用于农业害虫的杀灭，但该蛋白质不稳定，在环境中易被分解而失去活性。家蚕杆状病毒中的核型多角体病毒在感染宿主后的晚期能够产生大量的多角体蛋白，并聚合形成一种独特的超大分子蛋白质结晶——多角体。目前的研究表明多角体的功能主要保护包埋在多角体内部的病毒粒子，使之长时间保存活性。 本专利技术利用这一现象，利用野生型病毒表达多角体，同时构建了表达蝎毒素蛋白基因的病毒载体，将两种病毒同时感染家蚕培养细胞，这样野生型病毒产生多角体，在细胞内会将蝎毒素蛋白包埋和固定入多角体内部。这样解决了蝎毒素蛋白容易失活的缺点，为开发蝎毒素蛋白作为生物杀虫剂创造了条件。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种。它利用基因工程表达技术，构建含有蝎毒素蛋白基因的重组病毒，并利用家蚕培养细胞作为宿主，重组病毒与野生型病毒共感染细胞，使蝎毒素蛋白被固定于多角体内部。为了达到上述目的，本专利技术采用的具体技术方案为 本专利技术包括 (1)按以下方法进行蝎毒素蛋白基因的克隆 以从蝎子抽提本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种家蚕BmNPV多角体晶体固定蝎毒素蛋白的方法，其特征在于包括：(1)？按以下方法进行蝎毒素蛋白BmK基因的克隆：以从蝎子抽提的总RNA为模板，利用RT？PCR扩增反应得到蝎毒素蛋白BmK基因；所述PCR扩增所用的引物设计如下：正向引物为含有BamHI酶切位点的5’？GGATCCATGGATGGATATATAAG？3’，反向引物为含有HindIII酶切位点的5’？AAGCTTTTACTTTTTTCCACCGC？3’；所述RT？PCR扩增反应为：一个循环，94°C模板变性3分钟；接着30个循环，94°C？变性50？秒，55°C退火30？秒，72°C延伸1分钟；最后1个循环，72°C延伸10？分...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王国宝，沈运旺，吴小锋，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：