本发明专利技术涉及制取亲合物酶化合物的方法，该化合物以检测剂Ａ（胆固醇的亲合物）和目视显示剂Ｂ为基础，用于在患者皮肤表面上目视显示胆固醇。使用亲合胆固醇的甾类糖苷、三萜烯糖苷、疏水蛋白质、蛋白质毒素或多烯抗菌素作为检测剂Ａ，而使用酶作为目视显示剂Ｂ。为了提高所制取的化合物的敏感性，将检测剂Ａ和目视显示剂Ｂ固定在交联剂Ｃ上，使用低分子或高分子化合物作为交联剂Ｃ。（*该技术在2009年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物有机化学领域，即涉及制取亲合酶化合物的方法，该化合物以检测剂(它是胆固醇的亲合物)和目视显示剂为基础，用于在患者皮肤表面目视显示胆固醇。所制取的这种化合物可以最有效地用于诊断，其中包括对动脉粥样硬化的早期诊断，在临床和诊疗所条件下的确诊，并可用于控制疗法。上述化合物还可用于生理学、组织学和组织化学的研究，以查明胆固醇含量的升高及其定位。此外，所提供的化合物还能够查明具有一定病状，尤其是肿瘤病状的患者所特有的低胆固醇含量。动脉粥样硬化及其并发症-心肌梗塞、中风和坏疽是世界各国人口死亡的主要原因之一。多年的研究表明，动脉粥样硬化属于首先应当被查明并预防的疾病，而造成动脉粥样硬化危险的主要因素则是机体中的胆固醇积聚。在群体中对动脉粥样硬化的预防要求首先在一批最危险的患者中查明危险性，随后对他们区别治疗并改变生活方式。按照机体中积聚的胆固醇量，在患者中选择危险性高的一组人，这在预防动脉粥样硬化的课题中是最困难的。诊断动脉粥样硬化的公知方法是基于定量确定静脉血血浆中的总胆固醇含量(Consensus Conference on Lowering Blood Cholesterol to Prevent HeartDesease，JAMA，1985，253，P.2080-2086;The Lipid Research Clinics Population Studies Data Book;Publication 80-152，Bethesda，Ma，National Institutes of Health，1980，Vol.1;Lipid Research Clinics Programm，JAMA，1984，251，P.351-364)。在某些情况下，对将患者列入危险组而言，胆固醇含量大于260毫克%被认为是足够了。可以通过分析血浆血脂蛋白和测定动脉粥样性指标提供更详细的诊断，该指标是总胆固醇与高密度脂蛋白胆固醇之差同高密度脂蛋白胆固醇之比IaTep.= (XcobⅡ.-XCJIBⅡ.)/(XcJIBⅡ.)在动脉粥样性指标大于3时，患者属于危险组，而当动脉粥样性指标大于5.6时，则属于动脉粥样硬化患者(Климов A.H.“ФенотипироВание липопротеинов”，Методические рекомендации МЗ СССР，M。，медицина，1975，Goldfourt V.，Holtzman E.，Neufeld H.N.Total and High Density Lipoprotein Cholesterol in the Serum and Risk of Morality British Medical Jounal，1985，290，P.1239-1243)。使用这些方法与取血相联系，结果会造成患者外伤，而且除了不安全之外，同时还要考虑传递病毒感染的可能性。分离血浆脂蛋白和分析胆固醇仍然是复杂而昂贵的方法。此外，在三种测定总胆固醇中的一种情况下，甚至完全表现不出与动脉粥样硬化严重程度的关系(CM.Мясников A.Л.“Гипертоницеская Болезнь”，1965，M.Медицина，с.300)。另外，最近几年的研究指出，血浆血不能充分反映动脉壁和其他营养作用徐缓组织所特有的胆固醇积聚过程。随着动脉粥样硬化病因的某些原理性问题的解决，使进一步改进诊断方法成为可能。已证明，在动脉粥样硬化病的发展过程中，起主要作用的是组织中的胆固醇。已经成功地查明了这种组织，它类似于动脉壁也积聚胆固醇。最近几年的研究指出，在动脉壁和皮肤中的胆固醇含量之间有密切的相互关系。这使有可能原理上建立新的诊断方法，特别是诊断动脉粥样硬化的方法。上面所指出的在动脉壁和皮肤中的胆固醇含量之间的相互关系，可用直接测定皮肤的活组织(Биоптат)中胆固醇的方法而确定。将皮肤样品在液态氮中冻结，然后冷冻干燥，用弗尔奇(Фолч)试剂分离胆固醇并用传统化学或生物化学方法测定胆固醇(CM.Никитин Ю.П.，Гордиенко И.A.，Долгов A.B.，Филимонва T.A.“Содержание холестерина В кожеи его корреляция с дпидным поКазателем сыворотки крови у здорвых людей и ьольных ишемической ьолезнью сердца”Кардиология，1987，XXyⅡ No 10，C.48-51。但是，显然这种方法不适合于对居民进行普查，由于它会造成外伤和实施的复杂性。在美国专利No4458686中描述了直接在皮肤下及其表面上测定限制在血液中的葡萄糖和乙醇的方法，并指出利用胆固醇氧化酶测定胆固醇的可能性，在使用对于待查明的被作用物是特殊氧化-还原酶，主要是氧化脱氢酶时，氧浓度化学当量的变化是测量这些物质数量的方法的基础。此时，用电化学方法定量测量氧浓度变化，例如，使用采用专门设备和为此目的而特制电极的极谱分析法。为了保证复杂仪器进行工作，还需要高度技术熟练人员。所有这些必然限制了将该方法用于对居民普查的可能性。由PCT/84/00888申请得知一种检测-目视显示的复合物，在该复合物中，检测元素和目视显示元素直接或通过交联剂交联。上述复合物被指定用于测定小量的目标分子，也包括生物组织中的脂类。但是，上述测定脂类的方法仅在试验室条件下应用，并且需要由患者身上预先取出生物液体或组织，也就是说，该方法本身在实施当中是有损伤性的，多步骤和复杂的。在皮肤的活组织上获得皮肤中胆固醇含量和动脉血管粥样硬化病患程度相互关系的结果。这种方法除外伤性外，还有许多缺点，因为厚度1毫米的活组织包括不同的皮肤组成皮肤角质层(厚度平均为0.1毫米)和结缔组织(本身为真皮)，后者又由两层-乳头层和网状层构成。这两层能良好地供血，并因而血管和血液进入活组织。此外，它们还带有汗腺和脂肪腺及其分泌物。皮下的多脂肪组织直接处于真皮之下，它们也可以进入活组织。因此，活组织的不均质性使积聚在皮肤内的胆固醇含量的数据出现误差。从这个观点来看，最精确的方法应当是能够在真皮角质层的皮肤表面上测定胆固醇的含量。本专利技术的任务是建立制取亲合酶化合物的方法，这种化合物用于直接在患者皮肤上，特别是在皮肤表皮的角质层内目视显示胆固醇，而不必由患者身上取血和取皮肤的活组织。可以使用人皮肤的任何部分用于诊断，但最合适的是手心表面，因为它不含脂肪腺和分泌物，脂肪腺、分泌物和皮肤角质层一样含有胆固醇，这些胆固醇可能影响诊断指标的结果。按照本专利技术，这一任务是通过建立制取亲合酶化合物的方法而得到解决的。该化合物是双功能化合物。所制取的化合物有选择地与患者皮肤的自由胆固醇相结合，而随后可以用作目视鉴别。为制取这种化合物，必须使用至少两个组成部分检测剂A，它选自能够有选择地并牢固地与皮肤的自由胆固醇形成复合物的物组，这是为了保证让全部双功本文档来自技高网...
【技术保护点】
制取亲合酶化合物的方法，该化合物以检测剂Ａ和目视显示剂Ｂ为基础，用于在患者皮肤表面目视显示胆固醇，其特征在于，检测剂Ａ选自甾类糖苷。该甾类糖苷在其结构中具有作为配基的呋甾烷醇或螺甾烷醇系的甾环酶，以及具有含３－１０个线状或分支结构单糖的 低聚糖酶，或者选自三萜烯糖苷，该三萜烯糖苷在其结构中具有α－或β－爱留米脂醇、羽扇豆烷、胡椒烷、达玛烷、羊毛脂甾烷或哥洛斯烷系的配基，以及具有由２－８个分支或线状结构基组成的低聚糖，或者选自能够有选择地与胆固醇形成复合物的疏水蛋白质，或者选自能够有选择地与胆固醇形成复合物的蛋白质毒素，它可由细菌、海洋微生物，昆虫或蛇获得，或者选自能够有选择地与胆固醇形成复合物的多烯抗菌素，或者选自对胆固醇有高亲合性的酶，检测剂Ａ先在水介质中用化学方法活化，活化在Ａ与活化剂的比为１∶１－１ ∶１０、检测剂Ａ的浓度为１－２０毫克／毫升、温度０－２５℃、ＰＨ＝４下进行０．１－２４小时，然后向所得溶液适当加入目视显示剂Ｂ。目视显示剂Ｂ选自下列酶：乙酰胆碱酯酶、酪氨酸酶、葡糖磷酸脱氢酶、葡糖氧化酶、葡萄糖淀粉酶、半乳糖甙酶、过氧化 物酶、碱性或酸性磷酸酶、α－胰凝乳朊酶或焦磷酸酶，Ａ∶Ｂ（摩尔比）＝２０∶１－１∶１，该溶液在０－２５℃温度下孕育１－２４小时。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：朱利米罗普金，伊利那帕安德连诺娃，维克托维佐夫斯基，亚力山大布拉波斯基，
申请(专利权)人：物理化学科学研究所，
类型：发明
国别省市：SU[苏联]
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