一种动物脑组织磷脂提取分析方法技术

本发明专利技术提供一种动物脑组织磷脂提取分析方法，该方法按如下步骤进行（均按重量份）：ａ．动物脑组织磷脂提取滤液经蒸发得固状磷脂复合物，然后用氯仿溶解、再定容；ｂ．将硅胶∶羧甲基纤维素钠＝１∶２－４混合均匀，用铺板器铺０．２－０．６ｍｍ薄层层析板，晾干后于９０－１２０℃烘箱中活化２０－６０分钟；ｃ．将氯仿∶无水乙醇∶三乙胺∶水＝１∶１－１．５∶１－１．５∶２－３．５混合为展开剂，对磷脂复合物进行展开，而后晾干；ｄ．再将薄层层析板放入用中性去离子水配制的０．３－０．４％的溴百里香酚蓝染液中浸板，取出后，放在通风处直至斑点与背景对比达到最佳。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种动物脑组织磷脂提取薄层分析方法。
技术介绍
现有技术有关植物磷脂提取、分离的研究较多，如鲍风等(大豆磷脂组分的研究I磷脂组成的薄层色谱分析.生物化学和生物物理学报.1981，4(13)373～377)、李立(大豆磷脂的开发与应用.饲料工业.1999，20，(12)33～36)、马辰等(大豆磷脂中磷脂类成分含量的测定.中国中药杂志，1999，20(12)33～36)。而涉及动物脑组织磷脂复合物方面研究的有周建忠等(高效液相色谱法测定大鼠肺及脑组织细胞膜磷脂.色谱.1994，6(12)，44 1～442)、李世莉等(大鼠脑组织磷脂色谱随龄性变化的研究.佳木斯医学院学报.1992，15(1)1～2)。其中大部分是以高效液相色谱进行分析，而且是以获取其中的某个成分为目的的。最终的产业实施需投资大，操作麻烦，时间长，溶剂用量大，磷脂复合物各成分的分离效果较差，成本高。
技术实现思路
本专利技术提供一种操作简单，成本低廉，斑点与背景对比明显的动物脑组织磷脂提取分析方法。本专利技术的目的可通过如下技术措施来实现 该方法按如下步骤进行(均按重量份)a.动物脑组织磷脂提取滤液经蒸发得固状磷脂复合物，然后用氯仿溶解、再定容；b.将硅胶∶羧甲基纤维素钠＝1∶2-4混合均匀，用铺板器铺0.2-0.6mm薄层层析板，晾干后于90-120℃烘箱中活化20-60分钟；c.将氯仿∶无水乙醇∶三乙胺∶水＝1∶1-1.5∶1-1.5∶2-3.5混合为展开剂，对磷脂复合物进行展开，而后晾干；d.再将薄层层析板放入用中性去离子水配制的0.3-0.4％的溴百里香酚蓝染液中浸板，取出后，放在通风处直至斑点与背景对比达到最佳。本专利技术的目的还可通过如下技术措施来实现所述的中性去离子水的pH＝6-8；所述的浸板时间为5-30秒；所述的蒸发温度为不高于80℃；所述的硅胶∶羧甲基纤维素钠＝1∶2.5-3。本专利技术利用胆固醇和油溶于丙酮而磷脂不溶的性质，搅拌萃取去除动物脑中的胆固醇和油。然后利用磷脂溶于甲苯等一些有机溶剂的性质，进行磷脂复合物的提取，所得的磷脂复合物经旋转蒸发获得黄色固体状磷脂复合物，将之用氯仿溶解、定容，利用碱性展开剂对磷脂复合物氯仿液进行展开，展开完毕后，晾干，放入用中性去离子水配制的显色剂中浸渍显色，取出后晾干，通过斑点与背景对比，达到各磷脂组分分离的目的。本专利技术还可继续进行薄层扫描定量测定，或薄层法各分离成分的小样制备，或作为柱层析效果的判断。此方法操作简单，成本低廉，斑点与背景对比明显，且磷脂组分分离效果明显。所用的原料为鲜牛脑，也可采用鱼、兔、鸡、蟾蜍等不同动物的脑组织，经干燥和组织破碎器破碎即可。溴百里香酚蓝溶液，可采用多种存在质量差异的溴百里香酚蓝指示剂，只要采用pH为中性的去离子水配制显色剂即可。具体实施例方式实施例1鲜牛脑经55℃干燥，干牛脑用破碎器破碎，取干牛脑10公斤、丙酮30公斤，在80r/min搅拌下提取1h，过滤，得滤渣，重复提取3次，去除胆固醇和油。将滤渣在55℃烘干，加入30公斤的甲苯，在80r/min搅拌下提取1h，过滤得滤液，重复提取3次，滤液在40℃旋转蒸发得干的黄色固体状磷脂复合物，然后称取5mg，加氯仿溶解、定容为5mg/ml。将硅胶(GF254)与0.5％的羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液以1∶2的重量比混合均匀，用自动铺板器铺板，薄层板厚度为0.4mm，晾干，110℃条件下活化40min，置干燥器内备用。以氯仿∶无水乙醇∶三乙胺∶水＝10∶11.3∶11.7∶2.0为展开剂，对氯仿溶解的磷脂复合物进行展开，展距110cm。待层析完毕后，取出薄板，自然晾干，然后将之放入用pH＝6.5的去离子水配制的0.3％的溴百里香酚蓝溶液中，染色15秒，取出后，放在通风处直至斑点与背景对比达到最佳。实施例2鲜兔脑经50℃干燥，干兔脑用破碎器破碎，取干兔脑10公斤、丙酮20公斤，在60r/min搅拌下提取1.5h，过滤，得滤渣，重复提取4次，去除胆固醇和油。将滤渣在室温下晾干，加入30公斤的乙醚，在100r/min搅拌下提取0.5h，过滤得滤液，重复提取2次，滤液在65℃旋转蒸发得干的黄色固体状磷脂复合物，然后称取5mg，加氯仿溶解、定容为5mg/ml。将硅胶(GF254)与0.5％的羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液以1∶3的重量比混合均匀，用自动铺板器铺板，薄层板厚度为0.2mm，晾干，90℃条件下活化60min，置干燥器内备用。以氯仿∶无水乙醇∶三乙胺∶水＝10∶10∶11∶3为展开剂，对氯仿溶解的磷脂复合物进行展开，展距105cm。待层析完毕后，取出薄板，自然晾干，然后将之放入用pH＝7.5的去离子水配制的0.4％的溴百里香酚蓝溶液中，染色20秒，取出后，放在通风处直至斑点与背景对比达到最佳。实施例3鲜鸡脑经55℃干燥，干牛脑用破碎器破碎，取干牛脑10公斤、丙酮30公斤，在100r/min搅拌下提取0.5h，过滤，得滤渣，重复提取2次，去除胆固醇和油。将滤渣在55℃烘干，加入30公斤的正己烷，在60r/min搅拌下提取1.5h，过滤得滤液，重复提取4次，滤液在25℃旋转蒸发得干的黄色固体状磷脂复合物，然后称取5mg，加氯仿溶解、定容为5mg/ml。将硅胶(GF254)与0.5％的羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液以1∶4的重量比混合均匀，用自动铺板器铺板，薄层板厚度为0.6mm，晾干，120℃条件下活化20min，置干燥器内备用。以氯仿∶无水乙醇∶三乙胺∶水＝10∶15∶14∶3.5为展开剂，对氯仿溶解的磷脂复合物进行展开，展距100cm。待层析完毕后，取出薄板，自然晾干，然后将之放入用pH＝7的去离子水配制的0.3％的溴百里香酚蓝溶液中，染色15秒，取出后，放在通风处直至斑点与背景对比达到最佳。实施例4鲜蟾蜍脑经55℃干燥，干牛脑用破碎器破碎，取干牛脑10公斤、丙酮30公斤，在90r/min搅拌下提取1.2h，过滤，得滤渣，重复提取3次，去除胆固醇和油。将滤渣自然晾干，加入30公斤的氯仿，在70r/min搅拌下提取1h，过滤得滤液，重复提取2次，滤液在45℃旋转蒸发得干的黄色固体状磷脂复合物，然后称取5mg，加氯仿溶解、定容为5mg/ml。将硅胶(GF254)与0.5％的羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液以1∶3的重量比混合均匀，用自动铺板器铺板，薄层板厚度为0.4mm，晾干，100℃条件下活化30min，置干燥器内备用。以氯仿∶无水乙醇∶三乙胺∶水＝10∶10∶15∶2.5为展开剂，对氯仿溶解的磷脂复合物进行展开，展距110cm。待层析完毕后，取出薄板，自然晾干，然后将之放入用pH＝7.2的去离子水配制的0.35％的溴百里香酚蓝溶液中，染色10秒，取出后，放在通风处直至斑点与背景对比达到最佳。权利要求1.，其特征在于该方法按如下步骤进行(均按重量份)a.动物脑组织磷脂提取滤液经蒸发得固状磷脂复合物，然后用氯仿溶解、再定容；b.将硅胶∶羧甲基纤维素钠＝1∶2-4混合均匀，用铺板器铺0.2-0.6mm薄层层析板，晾干后于90-120℃烘箱中活化20-60分钟；c.将氯仿∶无水乙醇∶三乙胺∶水＝1∶1-1.5∶1-1.5∶2-3.5混合为展开剂，对磷脂复合物进行展开，而后晾干；d.再将本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种动物脑组织磷脂提取分析方法，其特征在于该方法按如下步骤进行（均按重量份）：ａ．动物脑组织磷脂提取滤液经蒸发得固状磷脂复合物，然后用氯仿溶解、再定容；ｂ．将硅胶∶羧甲基纤维素钠＝１∶２－４混合均匀，用铺板器铺０．２－０．６ ｍｍ薄层层析板，晾干后于９０－１２０℃烘箱中活化２０－６０分钟；ｃ．将氯仿∶无水乙醇∶三乙胺∶水＝１∶１－１．５∶１－１．５∶２－３．５混合为展开剂，对磷脂复合物进行展开，而后晾干；ｄ．再将薄层层析板放入用中性去离子水配制的 ０．３－０．４％的溴百里香酚蓝染液中浸板，取出后，放在通风处直至斑点与背景对比达到最佳。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杨雅婷，刘代成，
申请(专利权)人：山东师范大学，
类型：发明
国别省市：88[中国|济南]