一种用于测定高密度脂蛋白胆固醇的试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种用于测定高密度脂蛋白胆固醇的试剂盒。所述试剂盒包括第一试剂和第二试剂，其中，第一试剂包括抑制非高密度脂蛋白溶解的表面活性剂I和溶解高密度脂蛋白的表面活性剂II，所述表面活性剂I和所述表面活性剂II混合后的HLB值在13～14范围内，表面活性剂I和表面活性剂II在第一试剂中的体积比为1:30～1:1。该试剂盒通过几种成分的协同作用，提高了试剂盒的稳定性，能特异性释放HDL，同时能特异掩蔽抑制非HDL的解离，并可消除血清中其他成分的干扰，保证测量的准确性。

【技术实现步骤摘要】
—种用于测定高密度脂蛋白胆固醇的试剂盒
本专利技术涉及胆固醇的测定
，尤其涉及一种用于测定高密度脂蛋白胆固醇的试剂盒。
技术介绍
人体血液中的胆固醇除了游离胆固醇，大部分与极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)等脂蛋白结合成脂蛋白胆固醇形式存在。其中，HDL亦称为al脂蛋白，比较富含磷脂质，在血清中的含量约为300mg/dl。其蛋白质部分，A — I约为75%，A — II约为20%。HDL接受来自于包括动脉壁的各组织的胆固醇，通过直接逆转运或间接逆转运，将其运入肝脏，再清除出血液，因此HDL与积累于细胞内的胆固醇的除去作用相关。因此高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)是动脉粥样硬化(AS)、冠心病(CHD)的等各种动脉硬化症的危险预防因子(呈负相关)，其在血液中的水平对动脉硬化性疾病的诊断有特异的辅助作用。 HDL-C增高最主要的临床价值是能够将动脉粥样硬化斑块的泡沫细胞转移至肝脏排出体外，可见于原发性高密度脂蛋白血症(家族性高α-脂蛋白血症)，并发现此群家族中长寿者多。接受雌激素胰岛素或某些药物(如烟酸、维生素Ε，肝素等)治疗者，亦可增高，虾青素可显著提升人类高密度脂蛋白胆固醇。高密度脂蛋白胆固醇降低常见于脑血管病冠心病、高甘油三酯血症、肝功能损害如急慢性肝炎、肝硬化、肝癌、糖尿病、吸烟、缺少运动等其降低可作为冠心病的危险指标。因此，体内高密度脂蛋白胆固醇浓度测定对诊断冠心病、心脑血管病、肝炎、肝硬化等疾病具有一定的参考意义。 目前HDL-C含量测定在临床试验中已经常规化。美国胆固醇教育计划(NCEP)对HDL-C测定的建议中指出=HDL-C测定的准确性非常重要，因为HDL-C在一个很窄的浓度范围内与冠心病呈负相关；CHD危险增高的界限是在HDL-C浓度范围的低端，测定的细小误差会产生相对大的影响。 测定高密度脂蛋白胆固醇的方法很多，目前市场上流通的主要是匀相测定法，包括PEG修饰酶法、选择抑制法、清除法和免疫分离法。 PEG修饰法是用PEG修饰改性胆固醇酯酶(CEH)和胆固醇氧化酶(COD)，修饰酶对脂蛋白的结构具有选择性，其次序是LDL < VLDL < CM < HDL ;另外葡聚糖、α -环糊精硫酸盐(α-S⑶)和Mg2+与非HDL形成复合物，可以避免修饰酶对非HDL的作用，因此在葡聚糖、Mg2+、a -环糊精硫酸盐和修饰酶作用下可以直接测定HDL-C。 选择抑制法(pro法)是在Rl (第一试剂)中含表面活性剂I (HDL-C的反应抑制剂)、聚阴离子和某种盐，乳糜微粒(CM)、VLDL、LDL在多聚阴离子一盐环境下发生凝聚，同时表面活性剂I与凝聚的脂蛋白的疏水集团有高度亲和力，能吸附在凝聚的脂蛋白的颗粒表面形成遮蔽，抑制非HDL-C的反应，同时，HDL上也有表面活性剂I，但由于亲和力较弱，反应时可逆的；R2(第二试剂)中含有对HDL亲水基团有高度亲和力的表面活性剂IUHDL-C的反应促进剂)，其对HDL的吸附不仅置换出第一反应中与HDL亲和的表面活性剂I，还能使HDL形成可溶性复合物，使HDL-C参与反应。 清除法是利用表面活性剂对脂蛋白的亲和性差异。在Rl (第一试剂)反应促进剂(表面活性剂I)的作用下，血清中非HDL形成可溶性复合物，可溶性复合物表层的游离胆固醇在COD催化下反应生成H2O2，通过过氧化物酶(POD)(或过氧化氢酶(CAT)，Rl中不加P0D,不加叠氮钠)除去H2O2 ;然后，加入R2 (第二试剂)，在特殊选择性表面活性剂作用下，只有HDL可溶，所释放的胆固醇在胆固醇酯酶(CEH)和COD作用下，生成H2O2,通过POD (如果Rl中用CAT除去H2O2,则R2中要添加叠氮钠抑制其作用)、4_AAP和色原，发生显色反应，直接测定HDL-C。 免疫分离法有两种，一是PEG/抗体包裹法，用低浓度的PEG4000包裹非HDL，加入特异性抗apoB、apoCIII抗体,使非HDL颗粒复合物凝聚,然后加入胆固醇酶试剂,检测HDL-C，最后加入盐酸胍试剂，终止酶促反应和溶解含apoB脂蛋白复合物，避免干扰吸光度测定；二是抗体免疫分离法，Rl中的抗人β脂蛋白抗体首先与血清中非HDL结合形成不溶性抗原-抗体复合物，加入R2后，复合物不与酶试剂起反应，只有HDL-C与酶试剂发生反应，生成H2O2,最后通过Trinder反应测定HDL-C含量。 PEG修饰法需要对酶进行修饰，很大程度上降低了酶的活性，造成成本增加；免疫分离法特异性抗体价格昂贵且反应步骤多，实用性差；清除法和选择抑制法主要关键是表面活性剂的选择，但表面活性剂的使用比较困难，对非HDL的掩蔽抑制不完全，同时对HDL的释放不彻底。 针对上述问题，非常有必要开发一种对HDL-C的检测更加灵敏的产品。
技术实现思路
本专利技术提供了一种测定高密度脂蛋白中的胆固醇的试剂盒，可简单、高效地检测高密度脂蛋白胆固醇的含量。 本专利技术提供的用于测定高密度脂蛋白中的胆固醇的试剂盒包括包括第一试剂(R1)，所述Rl包括抑制非高密度脂蛋白溶解的表面活性剂I和溶解高密度脂蛋白的表面活性剂II，并且所述表面活性剂I和所述表面活性剂II混合后的亲水疏水平衡值(Hydrophile-Lipophile Balance Number,HLB 值)为 13 ?14。其中，HLB 值也称水油度，它既与表面活性剂的亲水亲油性有关，又与表面活性剂的表面(界面)张力、界面上的吸附性、乳化性及乳状液稳定性、分散性、溶解性、去污性等基本性能有关，还与表面活性剂的应用性能有关。HLB值越大代表亲水性越强，HLB值越小代表亲油性越强，一般而言，HLB值从I?40之间。亲油性表面活性剂HLB较低，亲水性表面活性剂HLB较高。亲水亲油转折点HLB为10。HLB小于10为亲油性，大于10为亲水性。HLB在实际应用中有重要参考价值。 在本申请中，除非标明或毫无疑义的表明HLB值是公式计算值还是实际测量值，否则在本申请中均指实际测量值。 在一个具体的实施方案中，所述表面活性剂I在所述Rl中的体积含量为0.1?3.0%。在一个优选的实施方案中，所述表面活性剂I在所述Rl中的体积含量为0.3?1.0%。 在一个具体的实施方案中，所述表面活性剂II在所述Rl中的体积含量为0.1?3.0%。在一个优选的实施方案中，所述表面活性剂II在所述Rl中的体积含量为1.0?2.5%。 在一个具体的实施方案中，所述表面活性剂I和所述表面活性剂II在所述Rl中的体积比为1:30?1:1。在一个优选的实施方案中，所述表面活性剂I和所述表面活性剂II在所述Rl中的体积比为1:20?1:1。在一个进一步优选的实施方案中，所述表面活性剂I和所述表面活性剂II在所述Rl中的体积比为1:15?1: 1.5。 在一个具体的实施方案中，所述表面活性剂I选自聚氧乙烯烷基醚、(聚氧丙烯-聚氧乙烯)嵌段聚合物和壬基酚聚氧乙烯醚中的一种或多种；和/或所述表面活性剂II选自聚氧乙烯基联苯乙烯化苯基醚、聚氧乙烯烷基醚、失水山梨糖醇脂肪酸酯和聚氧乙烯油酸酯中的一种或多种。例如，所述表面活性剂I选自Emulgen本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于测定高密度脂蛋白中的胆固醇的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括第一试剂，所述第一试剂包括抑制非高密度脂蛋白溶解的表面活性剂I和溶解高密度脂蛋白的表面活性剂II，并且所述表面活性剂I和所述表面活性剂II混合后的亲水疏水平衡值为13～14。

【技术特征摘要】
1.一种用于测定高密度脂蛋白中的胆固醇的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括第一试剂，所述第一试剂包括抑制非高密度脂蛋白溶解的表面活性剂I和溶解高密度脂蛋白的表面活性剂II，并且所述表面活性剂I和所述表面活性剂II混合后的亲水疏水平衡值为13 ~14。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂I在所述第一试剂中的体积含量为0.1~3.0%。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂II在所述第一试剂中的体积含量为0.1~3.0%。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂I和所述表面活性剂II在所述第一试剂中的体积比为1:30~1:1。5.根据权利要求1-4所述的试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂I选自聚氧乙烯烷基醚、(聚氧丙烯-聚氧乙烯)嵌段聚合物和壬基酚聚氧乙烯醚中的一种或多种；和/或所述表面活性剂II选自聚氧乙烯基联苯乙烯化苯基醚、聚氧乙烯烷基醚、失水山梨糖醇脂肪酸酯和聚氧乙烯油酸酯中的一种或多种。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一试剂还包括过氧化氢酶和胆固醇氧化酶。7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一试剂还包括抗坏血酸氧化酶和/或胆红素氧化酶。8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一试剂还包括聚阴离子、Mg2+、α -环糊精硫酸盐、显色剂、第一防腐剂、第一保护剂和第一缓冲液。9.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括第二试剂，所述第二试剂包括助色剂、过氧化物酶、胆固醇酯酶、第二防腐剂和第二缓冲液，并任选地包括第二保护剂。10.根据权利要求8或9所述的试剂盒，其特征在于，所述聚阴离子选自硫酸葡聚糖、硫酸葡聚糖盐、肝素、肝素盐、钨磷酸、钨磷酸盐、硫酸寡糖、硫酸寡糖盐和硫酸软骨素中的一种或多种； 所述α-环糊精硫酸盐选自钠盐、钾盐、铵盐、镁盐和钙盐中的任一种或多种； 所述显色剂选自苯胺类化合物或苯酚类化合物；所述苯胺类化合物选自N-(3-磺基丙基)苯胺、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺基丙基)-3-甲基苯胺、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺基丙基)_3，5-二甲基苯胺、N-乙基-N-(-3-磺基丙基)-3-甲基苯胺、N-(2-羟基-3-磺基丙基)_3，5- 二甲氧基苯胺、N，N- 二甲基-3-甲基苯胺、N, N- 二(3...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁锦云，时敏，韦锐，叶强，张华杰，
申请(专利权)人：深圳市新产业生物医学工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44